Gezielte Induktion einer arthrose-spezifischen Pathomorphologie des Gelenkknorpels durch definierte Druckbelastung: histologisch-immunhistochemische Charakterisierung eines biomechanischen In-vitro-Modells
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INHALTSVERZEICHNIS
1
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 5
1.1 DIE DEGENERATIVE GELENKERKRANKUNG ARTHROSE 5
1.2 AUFGABENSTELLUNG UND ZIEL DIESER ARBEIT 15
2 MATERIAL UND METHODEN 17
2.1 MATERIALIEN 17
2.1.1 VERWENDETE REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN 17
2.1.2 PUFFER UND LOESUNGEN FUER DIE GEWEBEKULTUR 19
2.1.3 VERWENDETE ANTIKOERPER UND SEREN 21
2.1.3.1 PRIMAER-ANTIKOERPER UND-SEREN 21
2.1.3.2 DETEKTION (SEKUNDAER-ANTIKOERPER) 22
2.1.3.3 ENZYME 22
2.1.4 VERBRAUCHSMATERIALIEN 23
2.1.5 VERWENDETE LABORGERAETE 23
2.2 METHODEN 25
2.2.1 DAS DRUCKKAMMER-SYSTEM 25
2.2.2 DIE DRUCKBELASTUNG 27
2.2.3 ANLAGE DER DRUCKVERSUCHE 29
2.2.3.1 UNTERSUCHUNGEN ZUM EINFLUSS DER DRUCKPARAMETER 29
2.2.3 2 PHARMAKOLOGISCHE PRAEVALIDIERUNG DES
IN V/7RA-MODELLS 29
2.2.4 PROBENGEWINNUNG UND GEWEBEKULTUR 30
2.2.5 VERGLEICHSMATERIAL FUER DIE IMMUNHISTOCHEMISCHEN UNTERSUCHUNGEN 32
2.2.6 AUFARBEITUNG DER GEWEBE FUER DIE HISTOLOGIE UND IMMUNHISTOCHEMIE 32
2.2.7 HISTOLOGIE 33
2.2.7.1 HAEMATOXYLIN / EOSIN - FAERBUNG 34
22.1.2
SAFRANIN O / LICHTGRUEN - FAERBUNG 35
2.2.13
DIE BEURTEILUNG UND STATISTISCHE AUSWERTUNG DER HE-FAERBUNG 36
2.2.8 IMMUNHISTOCHEMIE 43
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
2
2.2.8.1 VORBEHANDLUNG DER OBJEKTTRAEGER 43
2.2.8.2 ANTIKOERPER UND SEREN 43
2.2.8.3 ENZYMATISCHE VORBEHANDLUNG 44
2.2.8 4 DURCHFUEHRUNG DER IMMUNHISTOCHEMISCHEN FAERBUNG 44
2.2.8.5 PROTOKOLL DER IMMUNHISTOCHEMISCHEN FAERBUNG 47
2.2.8.6 KONTROLLEN 47
2.2.8.7 DETEKTIONSKETTEN DER IMMUNHISTOCHEMISCHEN FAERBUNGEN 48
3 ERGEBNISSE 49
3.1 DIE WIRKUNG VON INTERMITTIEREND-ZYKLISCHER BELASTUNG AUF DIE
HISTOMORPHOLOGIE DER KNORPELEXPLANTATE 49
3.1.1 DER EINFLUSS DER LAENGE DER DRUCKPHASEN 49
3.1.2 DER EINFLUSS DER LAENGE DER DRUCKPAUSEN 52
3.1.3 DER EINFLUSS DER DRUCKFREQUENZ 5 5
3.1.4 DAS
IN VITRO-MODELL 58
3.1.5 ABHAENGIGKEIT DER VERAENDERUNGEN VON DER VERSUCHSDAUER 59
3.1.6 PHARMAKOLOGISCHE PRAEVALIDIERUNG DES MODELLS 62
3.2 IMMUNHISTOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DES
IN V/TRO-MODELLS 66
3.2.1 NICHT-KOLLAGENE MATRIX-PROTEINE MIT BIOMARKER-FUNKTION 66
3.2.1.1 CARTILAGE OLIGOMERIC MATRIX PROTEIN 66
3.2.1.2 FIBRONEKTIN 73
3.2.1.3 INTEGRIN SSI-REZEPTOR 74
3.2.1.4 SLOO-PROTEIN 76
3.2.2 PROTEOGLYKANE 78
3.2.2.1 CHONDROITIN-SULFAT 78
3.2.2 2 3B3(-)-EPITOP 80
3.2.2.3 KERATANSULFAT (KS) 81
3.2.3 KOLLAGENE 82
3.2.3.1 KOLLAGENLL 82
3.2.3 2 KOLLAGEN VI 83
3.2.3 3 KOLLAGEN I 84
3 2.3.4 KOLLAGEN III 85
3.2 3.5 KOLLAGEN X 86
INHALTSVERZEICHNIS
3
4 DISKUSSION 87
5 ZUSAMMENFASSUNG
IN
6 LITERATURVERZEICHNIS 121
7 ANHANG 137
7.1 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 137
7.2 TABELLENVERZEICHNIS 139
7.3 STATISTISCHE AUSWERTUNG DER HISTOLOGISCHEN BEURTEILUNG 141
7.4 ROHDATEN DER HISTOLOGISCHEN BEURTEILUNG DER EINZELNEN VERSUCHSREIHEN
142 |
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