Vergleichende quantitative Analyse des Laminin-5-Gehaltes der Basalmembran normaler, hyperplastischer und maligner oraler Mucosa: eine neue Anwendung für die konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS.I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.IV
1 EINLEITUNG.1
1.1 LAMININ-5.1
1.1.1 LAMININ - EINE MOLEKUELFAMILIE.1
1.1.2 ALLGEMEINER AUFBAU DER LAMININE.2
1.1.3 BESONDERHEITEN IM AUFBAU VON LAMININ-5.2
1.1.4 LAMININ-5 ALS BASALMEMBRANMOLEKUEL.3
1.1.5 DIE BEDEUTUNG VON LAMININ-5 FUER DIE ORALE MUKOSA.5
1.1.5.1 LAMININ-5 UND ORALE WUNDHEILUNG
.5
1.1.5.2 LAMININ-5 UND DIE MANIFESTATION BLASENBILDENDER DERMATOSEN
IN DER MUNDHOEHLE.5
1.1.5.3 LAMININ-5 IM ORALEN PLATTENEPITHELKARZINOM
.6
1.2 DIE KONFOKALE LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE. 8
1.2.1 DAS KONFOKALE PRINZIP.8
1.2.2 PRINZIPIELLE MOEGLICHKEITEN DER QUANTITATIVEN ANALYSE MITTELS
QUANTITATIVER KONFOKALER LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE.12
1.3 ZIELSTELLUNG'.14
2 MATERIAL UND METHODEN.16
2.1 GEWINNUNG UND AUFBEREITUNG DES GEWEBES.16
2.1.1 PARAFFINEINBETTUNG UND KONVENTIONELLE HISTOLOGIE.16
2.1.2 KRYOKONSERVIERUNG.16
2.2 HISTOLOGISCHE BEURTEILUNG DES UNTERSUCHUNGSMATERIALS.17
2.3 IMMUNHISTOCHEMIE.18
2.3.1 PRIMAERE ANTIKOERPER.18
2.3.2 LICHTMIKROSKOPISCHE IMMUNHISTOCHEMISCHE DETEKTION DER
PRIMAEREN ANTIKOERPER MITTELS APAAP-METHODE.18
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
2.3.3 IMMUNFLUORESZENZMARKIERUNG FUER EPIFLUORESZENZ- UND LASER-
SCANNING-MIKROSKOPIE.19
2.3.4 VERZEICHNIS DER PUFFER-, FAERB- UND FIXIERUNGSLOESUNGEN FUER DIE
IMMUNHISTOCHEMIE.20
2.4 LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE.22
2.4.1 GERAETETECHNISCHE VORAUSSETZUNGEN.22
2.4.2 DURCHLICHTMODUS. 22
2.4.3 EPIFLUORESZENZMODUS.22
2.4.4 DIFFERENTIALINTERFERENZKONTRAST.23
2.4.5 EINSTELLUNG UND KALIBRIERUNG DES LSM-510.23
2.5 QUANTITATIVE AUSWERTUNG DES LAMININ-5-GEHALTS IN DER
BASALMEMBRAN. 25
2.5.1 HERSTELLUNG DER PRAEPARATE FUER DIE QUANTITATIVE AUSWERTUNG.25
2.5.2 BILDERFASSUNG UND MESSUNG DER IMMUNFLUORESZENZINTENSITAET.26
2.6 STATISTISCHE ANALYSE. 27
2.7 VISUALISIERUNG DES LAMININ-5-GRADIENTEN MITTELS FALSCHFARBEN
IN DER BASALMEMBRAN DER INVASIONSZONE ORALER
PLATTENEPITHELKARZINOME.27
3 ERGEBNISSE.28
3.1 IMMUNHISTOCHEMISCHE DEMONSTRATION VON LAMININ-5 MITTELS
APAAP-TECHNIK UND IMMUNFLUORESZENZ.28
3.1.1 DEMONSTRATION DER KETTEN DES LAMININ-5 MITTELS APAAP-TECHNIK .28
3.1.2 DEMONSTRATION DER KETTEN DES LAMININ-5 MITTELS KONVENTIONELLER
FLUORESZENZMIKROSKOPIE.30
3.1.3 DEMONSTRATION DER KETTEN DES LAMININ-5 MITTELS LASER-SCANNING-
MIKROSKOPIE .31
3.2 QUANTITATIVE ANALYSE DER LAMININ-5-IMMUNFLUORESZENZ.33
3.2.1 EXPERIMENTE ZUR STABILITAET UND REPRODUZIERBARKEIT DER
MESSVORGAENGE.33
3.2.1.1 OPTIMALE LASERLEISTUNG UND SCAN-GESCHWINDIGKEIT
.33
3.2.1.2 FESTE PARAMETER FUER DIE BILDERFASSUNG
.34
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.2 LAMININ-5-GEHALT IN DER BASALMEMBRAN NORMALER ADULTER ORALER
MUKOSA.36
3.2.3 LAMININ-5-GEHALT IN DER BASALMEMBRAN HYPERPLASTISCHER ORALER
MUKOSA.36
3.2.4 LAMININ-5-GEHALT IN DEN BASALMEMBRANEN ORALER
PLATTENEPITHELKARZINOME.36
4 DISKUSSION. 40
4.1 EXPRESSIONSMUSTER VON LAMININ-5 IN VERSCHIEDENEN
KARZINOMTYPEN.40
4.2 LAMININ-5 ALS INDIKATOR DES KARZINOMINVASION-ASSOZIIERTEN
AKTIVEN UMBAUS VON ZELL- UND MATRIXSTRUKTUREN.41
4.3 DER MONOKLONALE ANTIKOERPER GB3 - DAS OPTIMALE WERKZEUG
FUER DIE QUANTITATIVE ANALYSE DES LAMININ-5-GEHALTES IN
EPITHELIALEN BASALMEMBRANEN.42
4.4 VORAUSSETZUNGEN FUER DIE QUANTITATIVE BESTIMMUNG VON
PROTEINMENGEN AM HISTOLOGISCHEN SCHNITT MITTELS KONFOKALER
LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE.43
4.5 QUANTITATIVE ANALYSE VON LAMININ-5 AM HISTOLOGISCHEN SCHNITT
MITTELS LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE. 45
4.6 DER EINFLUSS DES BASALMEMBRANAUFBAUS ORALER
PLATTENEPITHELKARZINOME AUF INVASION UND METASTASIERUNG.46
4.7 DER LAMININ-5-GEHALT IN DER BASALMEMBRAN DER ORALER MUKOSA
UNTERSCHEIDET REAKTIVE BENIGNE UND KARZINOMATOESE LAESIONEN.47
4.8 PERSPEKTIVEN FUER DIE QUANTITATIVE BEWERTUNG VON MOLEKUELEN IN
SITU MITTELS KONFOKALER LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE.48
/
5 ZUSAMMENFASSUNG. 49
6 LITERATUR.52
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