Hämodynamische und molekularbiologische Untersuchungen am perfundierten biventrikulär arbeitenden Rattenherzen: Einfluß von Noradrenalin:
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 8
1.1 HERZHYPERTROPHIE 8
1.2 EINFLUSS VON NORADRENALIN AUF HAEMODYNAMIK UND
MOLEKULARBIOLOGIE DES HERZENS 10
1.3 DIE ZYTOKINE INTERLEUKIN-1 SS UND INTERLEUKIN-6 UND IHRE ROLLE BEI
DER ENTWICKLUNG DER HERZHYPERTROPHIE UND HERZINSUFFIZIENZ 12
1.4 FRAGESTELLUNGEN 15
2 MATERIAL UND METHODEN 17
2.1 VERSUCHSTIERE 17
2.2 VERWENDETE CHEMIKALIEN 17
2.2.1 CHEMIKALIEN FUER DIE VERSUCHE AM ISOLIERT PERFUNDIERTEN HERZEN 17
2.2.2 CHEMIKALIEN FUER DIE MOLEKULARBIOLOGISCHE PRAEPARATION 18
2.3 ISOLIERT PERFUNDIERTES ARBEITENDES HERZ 19
2.3.1 ISOLIERUNG DER HERZEN 19
2.3.2 PERFUNDIERTES BIVENTRIKULAER ARBEITENDES HERZPRAEPARAT 20
2.3.3 PERFUSIONSBEDINGUNGEN 21
2.3.4 HAEMODYNAMISCHE MESSGROESSEN 22
2.3.5 VERSUCHSPROTOKOLL FUER MOLEKULARBIOLOGISCH UNTERSUCHTE HERZEN 23
2.3.6 KONTROLLHERZEN 24
2.3.7 MIT NORADRENALIN STIMULIERTE HERZEN 24
2.3.8 STATISTISCHE AUSWERTUNG DER HAEMODYNAMISCHEN WERTE 25
2.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE MATERIALIEN 26
2.4.1 VERWENDETE BAKTERIEN UND ZELLEN 26
2.4.2 VERWENDETE OLIGONUKLEOTIDE 26
2.4.3 MATERIALIEN UND VERWENDETE KITS 26
2.4.4 RADIOCHEMIKALIEN 27
2.4.5 FOTOMATERIALIEN 27
2.4.6 VERWENDETE PLASMIDE 27
2.4.7 HAEUFIG VERWENDETE LOESUNGEN 27
2.5 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 28
2.5.1 ERSTELLUNG DES PRIMERS FUER INTERLEUKIN-1 SS 28
2.5.2 REVERSE TRANSKRIPTION 28
5
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.5.3 VERDAU DES PLASMIDS PGE IL-6 UND PNLSUB(18S) MIT
RESTRIKTIONSNUKLEASEN 29
2.5.4 POLYMERASE-KETTENREAKTION 31
2.5.5 AGAROSEGELEKTROPHORESE DER DNA 31
2.5.6 TRANSFORMATION 32
2.5.7 PRAEPARATION VON DNA 33
2.5.8 SEQUENZIERUNG 33
2.5.9 RNA-PRAEPARATION AUS DEN VERSUCHSHERZEN 33
2.5.10 RIBONUCLEASE PROTECTION ASSAYS (RPA) DER PROBEN 34
2.5.11 AGAROSEGELELEKTROPHORESE DER RNA 35
2.5.12 NORTHERN BLOTTING DER PROBEN 35
2.5.13 RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON CDNA 35
2.5.14 DNA-RNA-HYBRIDISIERUNG 37
2.5.15 SOFTWARETECHNISCHE AUSWERTUNG DER BLOTS 37
2.5.16 STATISTISCHE UND GRAPHISCHE AUSWERTUNG DER MOLEKULARBIOLOGISCHEN
WERTE 37
3
3.1
3.1.1
3.1.2
3.1.3
3.1.4
3.2
3.2.1
3.2.2
3.2.3
3.2.4
3
.
2.5
ERGEBNISSE 38
FUNKTIONELLE VERAENDERUNGEN DES ISOLIERT PERFUNDIERTEN BIVENTRIKULAER
ARBEITENDEN RATTENHERZENS 38
EINFLUSS DER NORADRENALINSTIMULATION AUF HAEMODYNAMISCHE PARAME
TER DES ISOLIERT PERFUNDIERTEN BIVENTRIKULAER ARBEITENDEN RATTENHER
ZENS 38
MESSUNG VON KORONAR-, AORTEN-, PULMONALISFLUSS UND FREQUENZ
UNTER NORADRENALINSTIMULATION 38
MESSUNG VON INTRAKARDIALEN DRUCKPARAMETEM (LVPMAX UND
RVPMAX, DP/DTMAX UND DP/DTMIYY ) UNTER NORADRENALINSTIMULATION 38
MESSUNG VON PULMONALIS- UND AORTENFLUSS DER PERFUNDIERTEN
BIVENTRIKULAER ARBEITENDEN EIERZEN UNTER KONTROLLBEDINGUNGEN UND
UNTER NORADRENALINSTIMULATION 42
ERGEBNISSE DER MOLEKULARBIOLOGISCHEN ARBEITEN 44
PRIMERDESIGN FUER DAS INTERLEUKIN-1 SS 44
VERDAU DES PLASMIDS PCEL IL-1 SS MIT RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
45
ERSTELLTE INTERLEUKIN-1 SS SONDE 46
AUSWERTUNG DER NORTHEM-BLOTS: VERHALTEN DES INTERLEUKIN-1 SS UND
DES INTERLEUKIN-6 UNTER KONTROLLBEDINGUNGEN 47
ERGEBNISSE DES RIBONUCLEASE-PROTECTION ASSAYS 48
6
AUSWERTUNG DER NORTHEM-BLOTS: VERHALTEN DES INTERLEUKIN-1 SS UND
DES INTERLEUKIN-6 UNTER NORADRENALINSTIMULATION 51
4
DISKUSSION 55
4.1 DAS VERSUCHSMODELL IM VERGLEICH ZU ANDEREN MODELLEN 56
4.2 DAS HAEMODYNAMISCHE VERHALTEN DES PRAEPARATS
57
4.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNG DER VERAENDERUNGEN UNTER NA
STIMULATION 59
MOEGLICHE MECHANISMEN DER REGULATION DER INTERLEUKINEXPRESSION
61
5 ZUSAMMENFASSUNG DER ARBEIT 65
6 LITERATURVERZEICHNIS 68
7 DANKSAGUNGEN 78
8 LEBENSLAUF 79
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