Charakterisierung der Antikörpergene humaner CD5-positiver B-Zellen und Plasmazellen der Darmschleimhaut mittels Einzelzell-PCR:
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
GRUNDZUEGE
DER
IMMUNANTWORT
1
1.2
STRUKTUR
UND
DIVERSIFIZIERUNG
DER
ANTIKOERPER
UND
ANTIKOERPERGENE
2
1.3
SOMATISCHE
HYPERMUTATION
5
1.4
DIE
KEIMZENTRUMSREAKTION
8
1.5
CD5-POSITIVE
B-LYMPHOZYTEN
10
1.6
PLASMAZELLEN
DER
DARMSCHLEIMHAUT
14
1.7
ZIELE
DER
ARBEIT
16
2
MATERIAL
UND
METHODEN
18
2.1
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSEN
UND
ISOLIERUNG
EINZELNER
B-ZELLEN
AUS
DEM
BLUT
GESUNDER
ERWACHSENER
18
2.1.1
ISOLIERUNG
EINZELNER
CD5
+
CD19
+
,
CD5
+
LGM*LGD
+
,
CD5
+
LGM
+
LGD
'
UND
CD5LGM*LGD
'
AUSPRAEGENDER
B-ZELLEN
AUS
DEM
BLUT
GESUNDER
ERWACHSENER
18
2.1.2
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSEN
VON
B-ZELLSUBPOPULATIONEN
DES
BLUTES
UND
DER
TONSILLE
20
2.2
ISOLIERUNG
EINZELNER
PLASMAZELLEN
AUS
HISTOLOGISCHEN
SCHNITTEN
MITTELS
MIKROMANIPULATION
21
2.3
EINZELZELL-PCR
24
2.4
SEQUENZIERUNG
DER
PCR-PRODUKTE
UND
ANALYSE
DER
DNA-SEQUENZEN
28
3
ERGEBNISSE
30
3.1
SEQUENZANALYSE
DER
V
K
-GEN-UMLAGERUNGEN
CD5-POSLTIVER
B-ZELLEN
DES
BLUTES
30
3.1.1
MUTATIONSANALYSE
REARRANGIERTER
V
K
-GENE
HUMANER
CD5
+
CD19
+
B-ZELLEN
30
3.1.2
BESTIMMUNG
DES
ANTEILS
CD5-POSITIVER
B-ZELLEN
IN
HUMANEN
B-ZELLSUBPOPULATIONEN
DES
BLUTES
UND
DER
TONSILLE
33
3.1.3
MUTATIONSANALYSE
REARRANGIERTER
V
K
-GENE
HUMANER
CD5
+
LGM*LGD*,
CD5
+
LGM
+
LGD
'
UND
CD5
LGM
+
LGD
B-ZELLEN
37
3.1.4
ANALYSE
DES
REPERTOIRES
POTENTIELL
FUNKTIONELL
UMGELAGERTER
V
K
-GENE
IN
CD5-POSITIVEN
B-ZELLEN
UND
NACHWEIS
VON
N-NUKLEOTIDEN
AN
V
K
J
K
-VERBINDUNGSSTELLEN
43
3.1.5
IDENTIFIZIERUNG
EINES
BISHER
NICHT
BESCHRIEBENEN
J^-GEN-POLYMORPHISMUS
IN
DEN
ZELLEN
DES
SPENDERS
RK
44
3.2
SEQUENZANALYSE
DER
V
H
-GEN-UMLAGERUNGEN
IGA
UND
IGM-SEZERNIERENDER
PLASMAZELLEN
DES
DUENNDARMS
45
3.2.1
IGA
UND
IGM-SEZEMIERENDE
PLASMAZELLEN
DES
DUENNDARMS
WEISEN
HOCHMUTIERTE
V
H
-GEN-REARRANGEMENTS
AUF
45
3.2.2
DELETIONEN
UND
INSERTIONEN
IN
REARRANGIERTEN
V
H
-GENEN
INTESTINALER
PLASMAZELLEN
50
4
DISKUSSION
53
4.1
V^-GEN-UMLAGERUNGEN
CD5-POSITIVER
B-ZELLEN
DES
ERWACHSENEN
SIND
ZUM
UEBERWIEGENDEN
TEIL
UNMUTIERT
53
4.1.1
UEBERSICHT
UEBER
ANALYSEN
DER
REARRANGIERTEN
V-GENE
CD5-POSITIVER
B-ZELLEN
IN
DER
LITERATUR
53
4.1.2
DIE
UEBERWIEGENDE
MEHRHEIT
CD5-POSITIVER
B-ZELLEN
DES
MENSCHEN
WEIST
UNMUTIERTE
IMMUNGLOBULIN-GENE
AUF
56
4.1.3
CD5-POSITIVE
UND
CD5-NEGATIVE
B-ZELL-FRAKTIONEN
UNTERSCHEIDEN
SICH
NICHT
IM
REPERTOIRE
IHRER
REARRANGIERTEN
V
K
-GENE
UND
IN
DER
HAEUFIGKEIT
DES
AUFTRETENS
VON
N-NUKLEOTIDEN
61
4.1.4
DIE
TEILNAHME
CD5-POSITIVER
B-ZELLEN
AN
EINER
KEIMZENTRUMSREAKTION
BEGUENSTIGT
MOEGLICHERWEISE
DIE
ENTWICKLUNG
VON
NEOPLASIEN
CD5-AUSPRAEGENDER
B-ZELLEN
SOWIE
DIE
ENTSTEHUNG
EINIGER
AUTOIMMUNERKRANKUNGEN
63
4.2
IGA
UND
IGM-SEZEMIERENDE
PLASMAZELLEN
DES
MENSCHLICHEN
DARMS
WEISEN
HOCHMUTIERTE
V
H
-GEN-UMLAGERUNGEN
AUF
65
4.2.1
PLASMAZELLEN
DES
MENSCHLICHEN
DUENNDARMS
WEISEN
UEBERWIEGEND
MUTIERTE
V
H
-GEN-UMLAGERUNGEN
AUF
68
4.2.2
V
H
-GEN-UMLAGERUNGEN
IGM
UND
IGA-SEZEMIERENDER
PLASMAZELLEN
DES
DUENNDARMS
ZEIGEN
GLEICHERMASSEN
UNGEWOEHNLICH
HOHE
MUTATIONSFREQUENZEN
69
4.2.3
DELETIONEN
UND
INSERTIONEN
IN
V-GEN-UMLAGERUNGEN
TRAGEN
ZUR
DIVERSIFIZIERUNG
DES
ANTIKOERPER-REPERTOIRES
BEI
71
5
ZUSAMMENFASSUNG
73
6
LITERATURVERZEICHNIS
75
7
ERKLAERUNG
ZUR
VORABVEROEFFENTLICHUNG
VON
ERGEBNISSEN
89
8
LEBENSLAUF
90 |
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