Charakterisierung humaner monoklonaler Antikörper aus Synovialgewebe einer Patientin mit rheumatoider Arthritis:
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
-
IV
1
EINLEITUNG.
-
1
1.1
AUTOINUNUNERKRANKUNGEN
.
1
1.2
RHEUMATOIDE
ARTHRITIS
.
3
2
MATERIAL
UND
METHODEN
-
.9
2.1
ELEKTROFUSION
.
9
2.2
ZELLKULTUR
.
10
2.2.1
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
.
10
2.2.2
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
.
11
2.2.3
KLONIERUNG
VON
HYBRIDOMZELLEN
.
12
2.2.4.
GEWINNEN
VON
UEBERSTAND
AUS
DER
ZELLKULTUR
.
13
2.3
REINIGUNG
VON
IMMUNGLOBULIN
G
A9D2
.
13
2.3.1
AMMONIUMSULFAT-FAELLUNG
.
13
2.3.2
REINIGUNG
VON
IMMUNGLOBULIN
G
UEBER
PROTEIN
G
SEPHAROSE
.
13
2A
REINIGUNG
VON
IMMUNGLOBULIN
M
D9G
10
.
14
2.5
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
.
15
2.5.1
ENZYME
LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
15
2.5.1.1
ALLGEMEINE
ELISA-METHODEN
.
15
2.5.1.2
BESTIMMUNG
DER
IGG-KONZENTRATION
.
16
2.5.1.3
BESTIMMUNG
DER
IGM-KONZENTRATION
.
18
2.5.1.4
ELISA
ZUR
BESTIMMUNG
DER
IGG-SUBKLASSE
UND
DER
LEICHTEN
KETTE.
.19
2.5.1.5
ELISA
ZUR
BESTIMMUNG
LEICHTEN
KETTE
VOM
IGM
.
20
INHALTSVERZEICHNIS
II
2.5.1.6
ELISA
ZUM
NACHWEIS
DER
BINDUNG
VON
D9G10
AN
CYCLOPHILIN
.
20
2.5.2
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
.
20
2.5.3
WESTERN
BLOT
.
21
2.5.3.1
ALLGEMEINE
EINFUEHRUNG
ZUM
WESTERN
BLOT
.
21
2.5.3.2
SDS-GELELEKTROPHORESE
.
22
2.5.3.3
BLOTTING
.
25
2.5.3.4
TESTUNG
DES
BLOT'S
MIT
ANTIKOERPER
.
27
2.6
PHAGE
DISPLAY
PEPTIDE
LIBRARY
.
28
2.6.1
ALLGEMEINE
PHAGE
DISPLAY
PEPTIDE
LIBRARY
METHODE
.
28
2.6.2
BIOPANNING
VON
D9G10
UND
A2D9
MIT
DER
PHAGE
DISPLAY
PEPTIDE
LIBRARY
.28
2.6.3
PHAGEN
TITRATION
.
32
2.7
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
33
2.7.1
DNA
ISOLIERUNG
.
33
2.7.2
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
ZUR
AUFTRENNUNG
VON
DNA
.
34
2.7.3
ISOLIERUNG
VON
RNA
.
36
2.7.4
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
37
2.7.5
POLYMERASE-CHAIN-REAKTION
.
38
2.7.5.1
PCR
ZUR
AMPLIFTZIERUNG
DER
VARIABLEN
REGION
DER
SCHWEREN
IMMUNGLOBULINKETTE
(VH)
.
39
2.7.5.2
PCR
ZUR
AMPLIFIZIENMG
DER
LEICHTKETTEN
CDNA
DER
ZELLINIE
D9G10.41
2.7.6
REINIGUNG
DER
PCR-PRODUKTE
.
42
2.7.7
SEQUENZIERUNG
DER
DNA-PRODUKTE
.
43
2.7.7.1
SEQUENZIERUNG
DER
PCR-FRAGMENTE
DURCH
CYCLE
SEQUENCING
.
43
2.7.7.2
SEQUENZIERUNG
DER
DNA-PROBEN
AUS
DEM
PHAGE
DISPLAY
PEPTIDE
LIBRARY
.
44
2.8
DATENBANKRECHERCHE
.
45
2.9
GERAETE
.
47
2.10
CHEMIKALIEN
.
50
INHALTSVERZEICHNIS
III
3
ERGEBNISSE
.
51
3.1
PATIENTENBESCHREIBUNG
.
51
3.2
KULTIVIERUNG
DER
HYBRIDOME
UND
REINIGUNG
DER
ANTIKOERPER
.
51
3.3
CHARAKTERISIERUNG
VON
IGG
A2D9
.
53
3.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
LEICHTEN
KETTE
VON
IGM
D9G10
.
53
3.5
PEPTIDE
PHAGE
DISPLAY
LIBRARY
.
54
3.5.1
PHAGEN
DNA
.
55
3.5.2
SEQUENZIERUNG
DER
DNA
DER
7MER
PHAGEN
VON
IGG
A2D9
UND
DES
STREPTAVIDINS
.
56
3.5.3
SEQUENZIERUNG
DER
DNA
DER
7MER
PHAGEN
VON
IGM
D9G10
UND
DES
STREPTAVIDINS
.
58
3.5.4
SEQUENZIERUNG
DER
DNA
DER
12MER
PHAGEN
VON
IGM
D9G10
UND
DES
STREPTAVIDINS
.
60
3.6
DATENBANKRECHERCHE
MIT
DER
7MER SEQUENZ
VON
D9G10
.
61
3.7
CYCLOPHILIN
ELISA
.
63
3.8
WESTERN
BLOT
MIT
CYCLOPHILIN
.
63
3.9
ANALYSE
DES
IMMUNGLOBULINGENS
VON
D9G10
.
65
4
DISKUSSION.
-
.71
4.1
IMMUNGLOBULIN
M
D9G10
UND
CYCLOPHILIN
.
71
4.2.
CYCLOPHILIN
.
71
4.3
CYCLOPHILIN
IN
AUTOIMMUNERKRANKUNGEN
.
74
4.4
CYCLOPHILIN
A
UND
CYCLOSPORIN
A
.
75
4.5
BEDEUTUNG
UND
AUSBLICK
.
79
5
ZUSAMMENFASSUNG.
_
.80
6
LITERATURVERZEICHNIS.
.
81 |
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