Untersuchungen zur Toxizität von D-Serin an der Ratte und an kultivierten Nierenepithelzellen:
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
10
1.
TIEREXPERIMENTE
10
1.1
TIERART
UND
TIERHALTUNG
10
1.2
NARKOSE
UND
TIERPRAEPARATION
10
1.2.1
CLEARANCESTUDIEN
10
1.2.2
MIKROINFUSIONSSTUDIEN
11
1.2.3
GEWINNUNG
VON
NIERENMATERIAL
ZUR
GLUTATHION-BESTIMMUNG
11
1.3
VERSUCHSPROTOKOLLE
12
1.3.1
CLEARANCESTUDIEN
12
1.3.2
MIKROINFUSIONSSTUDIEN
13
1.4
INFUSIONS
UND
MIKROINFUSIONSLOESUNGEN
15
1.4.1
INTRAVENOESE
INFUSION
15
1.4.2
MIKROINFUSION
15
1.5
ANALYSE
DER
PROBEN
AUS
DEN
TIEREXPERIMENTEN
16
1.5.1
AUFBEREITUNG
DER
PROBEN
16
1.5.1.1
AUFBEREITUNG
DER
BLUT
UND
URINPROBEN
AUS
DEN
CLEARANCE
EXPERIMENTEN
16
1.5.1.2
AUFBEREITUNG
DER
MIKROINFUSIONSPROBEN
16
1.5.1.3
AUFBEREITUNG
DES
NIERENMATERIALS
16
1.5.2
MESSUNG
DES
AUFBEREITETEN
PROBENMATERIALS
17
1.5.2.1
INULINBESTIMMUNG
MITTELS
FLUOROMETRIE
17
1.5.2.2
AMINOSAEURENAUFTRENNUNG
DURCH
HIGH
PRESSURE
LIQUID
CHROMATOGRAPH/
(HPLC)
18
1.5.2.3
GLUKOSEBESTIMMUNG
MITTELS
PHOTOMETRIE
19
1.5.2.4
FLUESSIGKEITS-SZINTILATIONSMESSUNG
VON
[
14
C]-D-SERIN
UND
[
3
H]-LNULIN
20
1.5.2.5
GLUTATHION
(GSH)-MESSUNG
MIT
DEM
PHOTOMETER
20
2.
AKTIVITAET
DER
D-AMINOSAEUREOXIDASE
(D-AAO)
IN
VITRO
21
2.1
BESTIMMUNG
DER
D-AAO-AKTIVITAET
21
2.2
BESTIMMUNG
DER
D-AAO-AKTIVITAET
NACH
ZUGABE
VON
21
A-AMINO-/SO-BUTYRAT
(AIB)
3.
ZELLKULTUR
22
3.1
KULTIVIERUNG
DER
ZELLEN 22
3.2.1
SUBKULTIVIEREN
DER
ZELLEN
23
3.2.2
ANSAAT
IN
YY6-WELL-PLASTIKSCHALEN
"
23
3.3
BESTIMMUNG
DER
D-SERIN-TOXIZITAET
MIT
DER
LAKTAT
DEHYDROGENASE
(LDH)-METHODE
23
3.3.1
INKUBATION
DER
ZELLEN
MIT
D-SERIN
24
3.3.2
VORBEREITUNG
DER
ZELLEN
24
3.3.3
PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DER
LDH-AKTIVITAET
24
3.3.4
BERECHNUNG
DER
LDH-FREISETZUNG
25
4.
STATISTIK
25
III.
ERGEBNISSE
26
1.
CLEARANCESTUDIEN
26
1.1
TOXIZITAET
HOHER
DOSEN
D-SERIN
(D-SER)
(7,6
MMOL/KG
KOERPER
GEWICHT
(KG),
INTRAPERITONEAL
(I.P.))
ANHAND
DER
BESTIMMUNG
DER
FRAKTIONELLEN
EXKRETION
(FE)
VERSCHIEDENER
AMINOSAEUREN
UND
GLUKOSE
2
H
UND
4
H
NACH
DER
INJEKTION
26
1.2
INJEKTION
STEIGENDER
DOSEN
D-SERIN
(0,25/0,76/2,54
MMOL/KG
KG)
29
1.3
KOINJEKTION
VON
A-AMINO-/SO-BUTYRAT
(AIB)
UND
D-SERIN
IN
AEQUI-
MOLAREN
DOSEN
34
2.
GLUTATHION
(GSH)-GEHALT
DER
NIERE
VOR
UND
NACH
D-SERIN
BELASTUNG
36
3.
MIKROINFUSIONSVERSUCHE
38
3.1
SPAETPROXIMALE
[
14
C]-D-SERIN-MIKROINFUSION
38
3.2 SPAETPROXIMALE
KOMIKROINFUSION
VON
[
14
C]
D-SERIN
UND
A-AMINO-/SO-BUTYRAT
(AIB)
39
4.
AKTIVITAET
DER
D-AMLNOSAEUREOXIDASE
(D-AAO)
41
4.1
AKTIVITAET
DER
D-AAO
MIT
D-SERIN
ALS
SUBSTRAT
41
4.2
AKTIVITAET
DER
D-AAO
NACH
ZUGABE
VON
A-AMINO-/SO-BUTYRAT
(AIB)
42
5.
ZELLKULTUR
43
5.1
LDH-FREISETZUNG
AUS
OPOSSUM-KIDNEY
(OK)-ZELLEN
NACH
STEIGENDEN
KONZENTRATIONEN
D-SERIN
IM
INKUBATIONSMEDIUM
44
5.2
LDH-FREISETZUNG
AUS
ATCC-OK-,
LLCPK,-,
SKPT
UND
IHKE-ZELLEN
45
IV.
DISKUSSION
46
V.
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
51
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
54 |
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