Aufreinigung und Charakterisierung der Elicitine von Phytophtora quercina:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Utz, Wiss.
2002
|
| Schriftenreihe: | Biologie
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Techn. Univ., Diss., 2002 |
| Beschreibung: | VII, 174 S. Ill., graph. Darst. |
| ISBN: | 3831601712 |
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I.
E
INLEITUNG
1
1.
PHYTOPHTHORA
QUERCINA
1
2.
WIRT-PATHOGEN-INTERAKTIONEN
2
2.1.
ERKENNUNG
UND
SIGNALVERARBEITUNG
3
2.2.
SIGNALTRANSDUKTION
5
3.
ELICITINE
11
3.1.
CHEMISCHE
UND
MOLEKULARE
EIGENSCHAFTEN
DER
ELICITINE
11
3.2.
BIOLOGISCHE
WIRKUNG
DER
ELICITINE
12
3.3.
ELICITIN-VERMITTELTE
SIGNALKASKADE
14
3.4.
ROLLE
DER
ELICITINE
ALS
STEROL-CARRIER-PROTEINE
15
3.5.
BEDEUTUNG
DER
ELICITINE
IN
VIVO
17
4.
ZIELE
DER
ARBEIT
18
II.
M
ATERIAL
19
1.
CHEMIKALIEN
19
2.
GERAETE
UND
LABORARTIKEL
21
3.
ELEKTROPHORESE
23
3.1.
TRIS-TRICIN-SDS-PAGE
23
3.2.
PROTEINE
UND
STANDARDS
24
3.2.1.
CRYPTOGEIN
24
3.2.2.
LOW
RANGE
STANDARD
24
4.
WESTERN
BLOT
25
4.1.
LOESUNGEN
25
4.2.
MATERIAL
26
4.3.
PROTEINE,
STANDARDS
UND
ANTIKOERPER
26
4.3.1.
CRYPTOGEIN
27
4.3.2.
PRESTAINED
STANDARD
A
27
4.3.3.
PRESTAINED
STANDARD
B
27
4.3.4.
ANTIKOERPER
27
5.
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
28
5.1.
GELLOESUNG
28
5.2.
ELEKTRODENPUFFER
28
6.
FAERBELOESUNGEN
FUER
DIE
ELEKTROPHORESE
28
6.1.
SILBERNITRATFAERBUNG
28
6.2.
FCF
FAST
GREEN-FAERBUNG
29
7.
PILZKULTURMEDIEN
30
7.1.
V8-MEDIUM
30
7.2.
MALZAGAR
30
7.3.
ML-MEDIUM
30
8.
MEDIEN
FUER
TABAKZELLKULTUREN
30
8.1.
NTD-MEDIUM
30
8.1.1.
MAKROELEMENTE
31
8.1.2.
MIKROELEMENTE
31
8.1.3.
VITAMINE
31
8.1.4.
FE-EDTA-LOESUNG
31
8.1.5.
HORMONE
32
9.
H2O2-N
ACHWEIS
32
9.1.
HAOZ-NACHWEIS
IN
PLANTA
32
9.2.
H2O2-NACHWEIS
IN
VITRO
32
10.
ZELLTODBESTIMMUNG
33
11.
ELISA
33
III.
M
ETHODEN
35
1.
ANZUCHT
VON
PILZISOLATEN,
PFLANZEN
UND
ZELLEN
35
1.1.
PILZISOLATE
35
1.1.1.
ANZUCHT
UND
FLUESSIGKULTUR
35
1.1.2.
P^/^RF/WU-WACHSTUMSKURVE
UND
ELICITINABGABE
36
1.1.3.
STEROLZUSATZ
ZUM
KULTURMEDIUM
36
1.1.4.
GEWINNUNG
VON
ZOOSPOREN
VON
P.
QUERCINA
36
1.1.5.
WURZELEXSUDATGEWINNUNG
NONQUERCUS
RVBUR
37
1.2.
ANZUCHT
DER
PFLANZEN
37
1.3.
ZELLKULTUREN
37
2.
PROTEINBESTIMMUNG
38
3.
BIOASSAY
MIT
TABAKBLAETTERN
39
3.1.
INFILTRIEREN
VON
LOESUNG
IN
TABAKBLAETTER
39
3.2.
INKUBATION
DER
BLAETTER IN
LOESUNG
39
4.
BESTIMMUNG
DES
GEHALTES
AN
PR-PROTEINEN
IN
TABAKBLAETTERN
UND
-ZELLEN
40
4.1.
ANSATZ
UND
PROBENAUFBEREITUNG
DER
TABAKBLAETTER
40
4.1.1.
EXTRAKTION
VON
TABAKBLAETTERN
ZUR
BESTIMMUNG
DER
SS-L,3-GLUCANASE
UND
CHITINASEAKTIVITAET
41
4.2.
ANSATZ
UND
PROBENAUFBEREITUNG
DER
TABAKZELLEN
42
4.3.
BESTIMMUNG
DER
CHITINASE
UND
SS-L,3-GLUCANASEAKTIVITAET
42
4.3.1.
SS
1
,3-GLUCANASEASSAY
42
4.3.1.1.
ANSATZ
43
4.3.I.2.
AUSWERTUNG
43
4.3.2.
CHITINASEASSAY
44
4.3.2.1.
ANSATZ
44
4.3.2.2.
AUSWERTUNG
44
5.
ETHAN
UND
ETHYLENMESSUNGEN
45
5.1.
ETHYLEN-UND
ETHANMESSUNG
IN
TABAKZELLKULTUREN
45
5.2.
ETHYLEN
UND
ETHANMESSUNG
IN TABAKBLAETTERN
45
6.
ELEKTROPHORESE
46
6.1.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
6.2.
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
47
6.3.
AUSWERTUNG
48
7.
WESTERN-BLOT
(SEMI-DRY-BLOT)
48
7.1.
PROTEINTRANSFER
48
7.2.
ANTIKOERPERMARKIERUNG
49
8.
FAERBUNG
DER
GELE
UND
BLOTS
49
8.1.
SILBERNITRATFAERBUNG
49
8.2.
FAST
GREEN
FCF-FAERBUNG
50
9.
FPLC-FAST
PROTEIN
LIQUID
CHROMATOGRAPHY
51
9.1.
LONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
9.1.1
REINIGUNG
VON
BASISCHEN
ELICITINEN
AUS
DEM
KULTURFILTRAT
VON
P.
QUERCINA
ZUR
N-TERMINALEN
SEQUENZIERUNG
51
9.1.2
QUANTITATIVE
AUFREINIGUNG
VON
ELICITINEN
AUS
DEM
KULTURFILTRAT
52
VON
P.
QUERCINA
MITTELS
ANIONEN
UND
KATIONENTAUSCHER
9.2.
GELFILTRATION
53
10.
ELISA
54
10.1.
ANSATZ
54
10.2.
AUSWERTUNG
55
11.
MESSUNG
DES
OXIDATIVE
BURST
56
11.1.
MESSUNG
DES
OXIDATVE
BURST
IN
ZELLKULTUREN
56
11.2.
NACHWEIS
VON
H2O2
IN TABAKBLAETTERN
57
12.
BESTIMMUNG
DES
ZELLTODS
58
13.
LEITFAEHIGKEITSMESSUNG
AN
TABAKBLATTSCHEIBEN
59
14.
N-TERMINALE
SEQUENZIERUNG
DES
ELICITINS
MITTELS
EDMAN-ABBAU
59
14.1.
PROBENVORBEREITUNG
59
14.2.
N-TERMINALE
AMINOSAEURESEQUENZANALYSE
59
15.
SYNTHESE
EINES
SYNTHETISCHEN
PEPTIDS
60
IV.
E
RGEBNISSE
61
1.
GEWINNUNG,
CHARAKTERISIERUNG
UND
AUFREINIGUNG
VON
ELICITINEN
AUS
DEM
KULTURFILTRAT
VON
P.
QUERCINA
61
1.1.
GEWINNUNG
VON
ELICITINEN
AUS
DEM
KULTURFILTRAT
VON
P.
QUERCINA
61
1.1.1.
PROTEINBESTIMMUNG
61
1.1.2.
ZUSAETZE
ZUM
PAY/^ZI/ZWW-KULTURMEDIUM
61
1.1.3.
KINETIK
DER
ELICITINPRODUKTION
63
1.2.
REINIGUNG
DER
ELICITINE
AUS
DEM
KULTURFILTRAT
VON
P.
QUERCINA
65
1.2.1.
UEBERSICHT
UEBER
DIE
AUFREINIGUNGSSCHRITTE
BIS
ZUR
SEQUENZANALYSE
65
1.2.2.
DARSTELLUNG
DER
PHYTOPHTHORA
PROTEINE
MITTELS
TRIS-TRICIN-SDS-PAGE
67
1.2.3.
WESTERN
BLOT
DES
KULTURFILTRATS
UND
ANTIKOERPERMARKIERUNG
MIT
ANTIKOERPERN
GEGEN
SS-CRYPTOGEIN
68
1.2.4.
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
DES
ROHEN
KULTURFILTRATS
69
1.2.5.
AKTIVITAETSTEST
DES
KULTURFILTRATS
VON
P.
QUERCINA
AN
TABAKBLAETTERN
70
1.2.6.
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
ZUR
GEWINNUNG
EINER
GEREINIGTEN
BASISCHEN
ELICITINFRAKTION
71
1.2.7.
LOKALISIERUNG
DER
ELICITINE
IN
DEN
FRAKTIONEN
NACH
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
72
1.2.8.
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
DER
ANIONENAUSTAUSCHERFRAKTIONEN
73
1.2.9.
WESTERN
BLOT
DER
BASISCHEN
FRAKTION
DES
KULTURFILTRATS
VON
P.
QUERCINA
74
1.2.10.
N-TERMINALE
ANSEQUENZIERUNG
74
1.2.11.
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
DER
BASISCHEN
FRAKTION
76
1.2.12.
AUSBEUTE
DES
GEREINIGTEN
ELICITINS
77
1.3.
QUANTITATIVE
GEWINNUNG
VON
SAUREN
UND
BASISCHEN
ELICITINEN
AUS
DEM
KULTURFILTRAT
VON
P.
QUERCINA
78
1.3.1.
SCHEMATISCHE
DARSTELLUNG
WICHTIGER
REINIGUNGS
UND
DETEKTIONSSCHRITTE
78
1.3.2.
DARSTELLUNG
DER
IM
KULTURFILTRAT
ENTHALTENEN
PROTEINE
MITTELS
SDS-PAGE
79
1.3.3.
LONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
80
1.3.4.
NACHWEIS
VON
ELICITINEN
IN
DEN
FRAKTIONEN
MITTELS
ELISA
82
1.3.5.
DARSTELLUNG
DER
FRAKTIONEN
FS-2
UND
FB-2
MITTELS
TRIS-TRICIN-SDS-PAGE
82
1.4.
BESTIMMUNG
DES
MOLEKULARGEWICHTS
DER
ELICITINE
IN
VIVO
84
1.4.1.
GELFILTRATION
84
1.4.2.
DARSTELLUNG
DER
FRAKTIONEN
FL
-
F4
MITTELS
ELISA
85
1.4.3.
DARSTELLUNG
DER
FRAKTIONEN
FL
-
F4
MITTELS
SDS-PAGE
86
1.5.
SYNTHETISCHES
PEPTID
88
1.5.1.
BIOTEST
88
1.5.2.
ELISA
DES
SYNTHETISCHEN
PEPTIDS
PEP
666
88
1.6.
WECHSELWIRKUNG
DER
ELICITINE
AUS
DEM
KULTURFILTRAT
VON
P.
QUERCINA
MIT
ANTIKOERPERN
GEGEN
VERSCHIEDENE
ELICITINE
89
1.7.
ZUSAMMENFASSUNG
KAPITEL
1
90
2.
BIOLOGISCHE
WIRKUNG
DES
KULTURFILTRATS
VON
PHYTOPHTHORA
QUERCINA
AUF
TABAKPFLANZEN
92
2.1.
BIOASSAY
DES
KULTURFILTRATS
VON
P.
QUERCINA
MIT
VERSCHIEDENEN
TABAKSORTEN
92
2.1.1.
BIOASSAY
DER
TABAKSORTEN
BEL
B
UND
BEL
W3
92
2.1.2.
EINFLUSS
DER
BELICHTUNG
AUF
DIE
SYMPTOMAUSPRAEGUNG
BEI
TABAKBLAETTERN
DER
SORTE
SATNSUN
NN
93
2.2.
ETHYLENINDUKTION
IN
TABAKBLAETTERN
95
2.2.1.
ETHYLENINDUKTION
IN
BLAETTERN
DER
TABAKSORTEN
SAMSUN
NN,
BEL
B,
BEL
W3
UNTER
EINFLUSS
DER
BELICHTUNG
96
2.2.2.
KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT
DER
ETHYLENPRODUKTION
97
2.2.3.
EINFLUSS
DER
LICHTPHASENLAENGE
AUF
DIE
ETHYLENEMISSION
98
2.3.
H2O2-NACHWEIS
IN TABAKBLAETTERN
99
2.4.
INDUKTION
VON
PR-PROTEINEN
IN
TABAKBLAETTERN
DER
SORTEN
SAMSUN
NN,
BEL
B
UND
BEL
W3
NACH
BEHANDLUNG
MIT
KULTURFILTRAT
VON
P.
QUERCINA
100
2.4.1.
SS-L,3-GLUCANASEN
102
2.4.2.
CHITINASEN
103
2.5.
INDUKTION
VON
ELEKTROLYTLEAKAGE
IN
TABAKBLAETTERN
104
2.6.
ZUSAMMENFASSUNG
KAPITEL
2
107
3.
WIRKUNG
VON
ELICITINEN
AUF
ZELLKULTUREN
DER
TABAKSORTEN
BEL
B
UND
BEL
W3
109
3.1.
OXIDATIVE
BURST
UND
ZELLTOD
109
3.1.1.
KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT
DES
OXIDATIVE
BURST
IN
DEN
TABAKZELLKULTUREN
BEL
B
UND
BEL
W3
110
3.1.2.
KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT
DES
ZELLTODS
IN
DEN
TABAKZELLKULTUREN
BEL
B
UND
BEL
W3
112
3.1.3.
ZEITLICHE
DARSTELLUNG
DER
INDUKTION
DES
ZELLTODS
BEI
BEL
W3
NACH
ELIDTIERUNG
113
3.1.4.
ZUGABE
VON
KATALASE
ZU
TABAKZELLKULTUREN
BEL
B
UND
BEL
W3
114
3.1.5.
ZUGABE
VON
SUPEROXIDDISMUTASE
ZU
TABAKZELLKULTUREN
BEL
BUND
BEL
W3
115
3.1.6.
EINFLUSS
VON
DPI
AUF
DEN
OXIDATIVE
BURST
UND
DEN
ZELLTOD
IN
DER
ZELLKULTUR
BEL
W3
116
3.1.7.
EINFLUSS
VON
STAUROSPORIN
AUF
DEN
OXIDATIVE
BURST
UND
DEN
ZELLTOD
IN
DER
ZELLKULTUR
BEL
W3
118
3.1.8.
HEMMUNG
DER
NO-SYNTHASE
DURCH
MONOMETHYL-L-ARGININ
119
3.2.
MESSUNG
DER
ETHYLEN
UND
ETHANEMISSION
IN
DEN
TABAKZELLKULTUREN
BEL
B
UND
BEL
W3
121
3.2.1.
KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT
DER
ETHYLENEMISSION
121
3.2.2.
INDUKTION
VON
ETHAN
DURCH
KULTURFILTRAT
VON
P.
QUEMNA
122
3.3.
INDUKTION
VON
PR-PROTEINEN
(CHITINASE
UND
SS-L,3-GLUCANASE)
IN
DEN
TABAKZELLKULTUREN
BEL
B
UND
BEL
W3
124
3.4.
ZUSAMMENFASSUNG
KAPITEL
3
126
V.
D
ISKUSSION
128
VI.
Z
USAMMENFASSUNG
158
VII
.
L
ITERATURVERZEICHNIS
161 |
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