Heterologe Expression und funktionelle Charakterisierung intestinaler und renaler Peptidtransporter in der methylotrophen Hefe Pichia pastoris:
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INHALTSUEBERSICHT
1
ZUSAMMENFASSUNG.4
1 EINLEITUNG.6
2
MATERIAL UND METHODEN.20
3
ERGEBNISSE UND DISKUSSION.31
4
SYNOPSE UND ENTWICKLUENGSPERSPEKTIVEN.109
ANHANG.113
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/964442841
INHALTSVERZEICHNIS
2
ZUSAMMENFASSUNG.4
1 EINLEITUNG.6
1.1 ALLGEMEINE GRUNDLAGEN DES TRANSPORTES VON PEPTIDEN.6
1.2 DIE PHYSIOLOGISCHE ROLLE DER PEPTIDTRANSPORTER AN EPITHELIEN DES
DUENNDARMS UND DER NIERE.6
1.3 BEZIEHUNGEN ZWISCHEN STRUKTUR UND FUNKTION DER PEPTIDTRANSPORTER
PEPT1 UND PEPT2.9
1.4 DIE SUBSTRATSPEZIFIAET DER PEPTIDTRANSPORTER.12
1.5 DIE METHYLOTROPHE HEFE
PICHIA PASTORIS ALS HETEROLOGES
EXPRESSIONSSYSTEM.16
1.6
ZIELE DER ARBEIT.19
2
MATERIAL UND METHODEN.-.20
2.2
MATERIALIEN.
20
2.2.1 DAS OOZYTENSYSTEM.20
2.2.2 HEFE-UND BAKTERIENSTAEMME.20
2.2.3 RADIOAKTIV-MARKIERTE VERBINDUNGEN.20
2.2.4 PEPTIDE, PEPTIDMIMETIKA, PEPTID- UND AMINOSAEURENDERIVATE.20
2.2.5 CHEMIKALIEN, REAGENTIEN FUER DIE MOLEKULARBIOLOGIE,
VERBRAUCHSMATERIAL.20
2.2.6 GERAETE.21
2.3
METHODEN.
21
2.3.1 POLYMERASE-KETTENREAKTION.21
2.3.2 KONSTRUKTION DER EXPRESSIONSVEKTOREN.22
2.3.3 DNA-SEQUENZIERUNG.23
2.3.4 HEFETRANSFORMATION.24
2.3.5 TRANSPORTSTUDIEN AN HEFEZELLEN.25
2.3.6 MEMBRANPRAEPARATION. 27
2.3.7 WESTERN-BLOT-ANALYSE.27
2.3.8 ZUFALLSMUTAGENESE. 28
2.3.9 PRAEPARATION GENOMISCHER DNA AUS
P
.
PASTORIS.28
2.3.10EXPRESSION DER PEPTIDTRANSPORTER IN
XENOPUSLAEVIS
OOZYTEN.29
2.3.11 ANALYSE DER TRANSPORTPARAMETER.30
INHALTSVERZEICHNIS
3
3
ERGEBNISSE UND DISKUSSION.31
3.1 ETABLIERUNG DER HEFE
PICHIA PASTORIS ALS EXPRESSIONSSYSTEM FUER
PEPTIDTRANSPORTPROTEINE DER SAEUGER.32
3.1.1 EXPRESSION DES HUMANEN PEPTIDTRANSPORTERS PEPT1 INP. PASTORIS.32
3.1.2
FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG.:.35
3.1.3 ZUFALLSMUTAGENESE ZUR CAHRAKTERISIERUNG DER BEZIEHUNG ZWISCHEN
STRUKTUR UND FUNKTION. 45
3.1.4 DISKUSSION DER BEFUNDE ZUR NUTZUNG VON PICHIA PASTORIS
AUS
EXPRESSIONSSYSTEM DER PEPTIDTRANSPORTER AUS SAEUGERN (3.1).52
3.2 STRUKTUR-AFFINITAETS-BEZIEHUNGEN DER PEPTIDTRANSPORTER PEPT1 UND
PEPT2.63
3.2.1 VERGLEICH DER STRUKTURELLEN ANFORDERUNGEN VON SUBSTRATEN FUER IHRE
INTERAKTION MIT DEM INTESTINALEN UND DEM RENALEN PEPTIDTRANSPORTER PEPT1
UND PEPT2.64
3.2.2 DETERMINANTEN FUER DIE STEREOSPEZIFISCHE ERKENNUNG UND DEN
TRANSPORT VON
PEPTIDEN DURCH DIE PEPTIDTRANSPORTER
PEPT1 UND PEPT2.73
3.2.3 BESTIMMUNG DER MINIMALEN STRUKTURELLEN MERKMALE IN SUBSTRATEN VON
PEPT2.79
3.2.4 IDENTIFIZIERUNG EINES NEUARTIGEN INHIBITORS FUER DEN INTESTINALEN
PEPTIDTRANSPORTER
PEPT1.89
3.2.5 CHARAKTERISIERUNG HOCHAFFINER INHIBITOREN FUER PEPT2.93
3.2.6 DISKUSSION DER BEFUNDE ZU DEN STRUKTUR-AFFINITAETS-BEZIEHUNGEN
(3.2).98
4
SYNOPSE UND ENTWICKLUNGSPERSPEKTIVEN.109
ANHANG.
113 |
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