MCMV interferiert mit der MHC-Klasse-I-Antigenpräsentation: Untersuchungen zur Speziesspezifität und zur Interaktion der viralen Effektormoleküle während der Virusinfektion
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.4
1.1
DIE
FAMILIE
DER
HERPESVIREN
.
4
1.2
STRUKTUR
DER
HERPES
VIREN
.
5
1.3
VERMEHRUNG
DER
HERPESVIREN
.
6
1.4
UEBERTRAGUNG
UND
VERBREITUNG
DES
ZYTOMEGALIEVIRUS
BEIM
MENSCHEN
.
7
1.5
KRANKHEITSSYMPTOME
BEIM
MENSCHEN
NACH
EINER
ZYTOMEGALIEVIRUSINFEKTION
.
8
1.6
THERAPIE
VON
ZYTOMEGALIEVIRUSINFEKTIONEN
BEIM
MENSCHEN
.
8
1.7
MCMV
ALS
MODELL
.
8
1.8
IMMUNANTWORT
GEGEN
VIRALE
ERREGER
.
9
1.9
IMMUNANTWORT
GEGEN
MCMV
.
10
1.10
MHC-KLASSE-L-VERMITTELTE
ANTIGENPRAESENTATION
.
11
1.11
ANTIGENPRAESENTATION
UNTER
MCMV-LNFEKTION
.
13
1.12
INHIBITION
DER
MHC-KLASSE-I-ANTIGENPRAESENTATION
.
13
1.13
MCMV
INTERFERIERT
MIT
DER
MHC-KLASSE-I-ANTIGENPRAESENTATION
.
14
1.14
FRAGESTELLUNG
DER
ARBEIT
.17
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
18
2.1
MATERIAL
.
18
2.1.1
REAGENZIEN
.
18
2.1.2
ANTIKOERPER
.
19
2.2
KLONIERUNG
DER
PLASMIDE
.
20
2.2.1
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
20
2.2.2
DNA-VERDAU
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
.
21
2.2.3
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
DEM
AGAROSEGEL
.
21
2.2.4
LIGATION
.
21
2.2.5
UEBERSICHT
DER
VERWENDETEN
PLASMIDE
.
22
2.2.6
HERSTELLUNG
CHEMISCH
KOMPETENTER
BAKTERIEN
MIT
HILFE
VON
CACH
.
22
2.2.7
TRANSFORMATION
CHEMISCH
KOMPETENTER
BAKTERIEN
.
23
2.2.8
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
.
23
2.3
EUKARYONTISCHE
ZELLEN
.
24
2.3.1
ZELLINIEN
.
24
2.3.2
ZELLKULTUR
.
24
2.3.3
STABILE
TRANSFEKTION
MITTELS
EINES
CALCIUM-PHOSPHAT-PRAEZIPITATS
.
25
2.4
VACCINIA-VIREN
.
26
2.4.1
VACCINIA-VIREN
.
26
2.4.2
HERSTELLUNG
EINES
VACCINIA-VIRUSSTOCKS
.
27
2.4.3
BESTIMMUNG
DES
TITERS
EINES
VACCINIA-VIRUSSTOCKS
.
27
2.5
RADIO-IMMUNPRAEZIPITATION
.
28
2.6
ENDOGLYKOSIDASE
H
(ENDO
H)
-
VERDAU
.
29
2.7
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
29
INHALTSVERZEICHNIS
2.8
FLUORESZENZZYTOMETRIE
.
30
2.9
KONFOKALE
LASERSCANMIKROSKOPIE
.
32
3
ERGEBNISSE
.
33
3.1
TRANSPORTINHIBITION
VON
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELEN
VON
MENSCH
UND
MAUS
DURCH
M06/GP48
UND
M!52/GP40
.
33
3.1.1
DAS
MCMV-PROTEIN
M06/GP48
INHIBIERT
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELE
VON
MENSCH
UND
MAUS
IM
TRANSPORT
.
33
3.1.2
HUMANE
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELE
WERDEN
DURCH
ML52/GP40
NICHT
IM
TRANSPORT
GEHEMMT
.
37
3.2
MOEGLICHE
URSACHEN
FUER
DIE
SPEZIESSPEZIFISCHE
HEMMUNG
DES
TRANSPORTS
VON
MHC
KLASSE-I-MOLEKUELEN
DURCH
M!52/GP40
.
44
3.2.1
DIE
SSJM-SPEZIES
SPIELT
KEINE
ROLLE
BEI
DER
SPEZIESSPEZIFISCHEN
INHIBITION
DES
TRANSPORTS
DURCH
ML52/GP40
.
45
3.2.2
DIE
ZUSAETZLICHE
GLYKOSYLIERUNG
IN
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELEN
DER
MAUS
IST
NICHT
GRUND
FUER
DIE
INHIBITION
DES
TRANSPORTS
DURCH
ML52/GP40
.
51
3.3
WELCHER
BEREICH
DER
SCHWEREN
KETTE
VON
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELEN
WIRD
VON
ML52/GP40
ERKANNT
?
.
55
3.3.1
DIE
LUMINALE
DOMAENE
VON
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELEN
WIRD
VONML52/GP40
ZURUECKGEHALTEN
.
55
3.3.2
DIE
AI-DOMAENE
DER
SCHWEREN
KETTE
IST
WICHTIG
FUER
DEN
ML52/GP40-EFFEKT.62
3.4
UNTERSUCHUNG
DER
IMMUNMODULIERENDEN
GENPRODUKTE
M04/GP34,
M06/GP48
UND
M!52/GP40
WAEHREND
DER
VIRUSINFEKTION
.
66
3.4.1
NEBEN
M04/GP34,
M06/GP48
UND
ML52/GP40
KODIERT
MCMV
FUER
KEINE
WEITEREN
GENE
MIT
EINFLUSS
AUF
DIE
MHC-KLASSE-I-OBERFLAECHENEXPRESSION
.67
3.4.2
M06/GP48
UND
ML52/GP40
SIND
DIE
EINZIGEN
MCMV-GENPRODUKTE,
WELCHE
DIE
OBERFLAECHENEXPRESSION
VON
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELEN
REDUZIEREN
.
70
3.4.3
DIE
MHC-KLASSE-I-OBERFLAECHENEXPRESSION
VERSCHIEDENER
ALLELE
IST
NACH
MCMV-INFEKTION
UNTERSCHIEDLICH
STARK
REDUZIERT
.
70
3.4.4
DIE
DELETION
VON
M06/GP48
VERRINGERT
DEUTLICH
DIE
RETENTION
VON
MHC-
KLASSE-I-MOLEKUELEN,
WOHINGEGEN
DIE
DELETION
VON
ML52/GP40
DIE
RETENTION
DER
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELE
NUR
MINIMAL
AUFHEBEN
KANN
.
71
3.4.5
M04/GP34
BEHINDERT
DIE
RETENTION
VON
H-2K
B
.
77
3.4.6
M04/GP34
KANN
DER
OBERFLAECHENREDUKTION
VON
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELEN
DURCH
ML52/GP40
ENTGEGENWIRKEN,
ABER
KAUM
DER
OBERFLAECHENREDUKTION
DURCH
M06/GF48
.
77
4
DISKUSSION
.
81
4.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ERKENNUNG
VON
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELEN
DURCH
M06/GP48
UND
M!52/GP40
.
82
4.2
DIE
VIRALEN
PROTEINE
M04/GP34,
M06/GP48
UND
ML52/GP40
BEEINFLUSSEN
SICH
WAEHREND
DER
VIRUSINFEKTION
.
87
4.3
AUSBLICK
.
92
S
ZUSAMMENFASSUNG
.
93
2
INHALTSVERZEICHNIS
6
LITERATUR
.
.
94
7
ABKUERZUNGEN
.
104
8
PUBLIKATIONEN
.
105
9
DANKSAGUNG
-------------------------------------------------------------------
106
10
LEBENSLAUF
.
107
3 |
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