Forensische Anwendungsmöglichkeiten der PCR: Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zur Art- und Geschlechtsidentifizierung
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
1.1
ALLGEMEINES
1
1.2
DNA-ANALYSE
IN
DER
RECHTSMEDIZIN
1
13
HUMANSPEZIFISCHE
UNTERSUCHUNGEN
1
1.4
GESCHLECHTSSPEZIFISCHE
ANALYSEMETHODEN
2
1.5
TIERARTSPEZIFISCHE
ANALYSEMETHODEN
4
1.6
FRAGESTELLUNG
5
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
6
2.1
PROBENMATERIAL
UND
PROBENHERKUNFT
6
2.2
EXTRAKTION
DER
DNA
6
2.2.1
DNA-EXTRAKTION
AUS
EDTA-VOLLBLUT
MIT
DEM
6
SUPER
QUIK
GENE-DNA-EXTRAKTIONS-KIT
2.2.2
DNA-EXTRAKTION
AUS
MILZGEWEBE
7
2
2.3
DNA-EXTRAKTION
AUS
VOLLBLUT
MIT
DEM
QIAMP
BLOOD
KIT
7
23
PHOTOMETRISCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
8
2.4
LAGERUNG
DER
DNA-LOESUNGEN
8
2.5
PCR-REAGENZIEN
8
2.6 ANSETZEN
DER
PCR-REAKTIONSGEMISCHE
10
2.7
PCR-AMPLIFIKATION
11
2.7.1
THERMOCYCLER
11
2.7.2
TEMPERATURPROFILE
UND
ZYKLEN
11
2.7.2.1
ALU-PCR
11
2.7.2.2
GESCHLECHTSBESTIMMUNG
12
2.7.23
RAPD-PCR
12
2.8
POLYACRYLAMIDGEL-HERSTELLUNG
12
2.9
POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
14
2.9.1
GERAETE
14
2.9.2
2.9.3
ELEKTROPHORESE-VORBEREITUNG
LAUFZEITEN
14
15
2.10
SILBERFAERBUNG
15
3.
ERGEBNISSE
16
3.1
DNA-EXTRAKTIONSVERFAHREN
16
3.1.1
SUPER
QUIK
GENE
-
BLOOD
-
KIT
16
3.1.2
QIAMP
BLOOD
KIT
16
3.2
AMPLIFIKATIONSERGEBNISSE
17
3.2.1
ALU-PCR
17
3.2.1.1
PRIMER
17
3.2.1.2
CYCLER-EINSTELLUNG
18
3.2.1.3
MAGNESIUMKONZENTRATION
18
3.2.1.4
DNA-NACHWEISGRENZE
UND
SPEZIFITAET
19
3.2.2.
GESCHLECHTSBESTIMMUNG
21
3.2.2.1
PRIMERKONZENTRATION
21
3.2.2.2
CYCLER-EINSTELLUNG
22
3.2.2.3
MAGNESIUMKONZENTRATION
22
3.2.2.4
KOAMPLIFIKATION
(TRIPLEX-/
DUPLEX-PCR)
23
3.2.2.5
DNA-NACHWEISGRENZE
24
3.2.3
FAILBEISPIEL
AUS
DER
RECHTSMEDIZIN
26
3.2.4
RAPD-PCR
26
3.2.4.1
PRIMER
26
3.2.4.2
CYCLER-EINSTELLUNG
27
3.2.4.3
MAGNESIUMKONZENTRATION
27
3.2.4.4
DNA-NACHWEISGRENZE
UND
SPEZIESIDENTIFIZIERUNG
27
3.3
ELEKTROPHORESE
33
3.4
SILBERFAERBUNG
34
4.
DISKUSSION
35
4.1
PROBENMATERIAL
35
4.2
ALU-PCR
35
4.2.1
PRIMERDESIGN,
ZIELSEQUENZ,
AMPLIFIKATIONSMUSTER
35
4.2.2
REAKTIONSBEDINGUNGEN
36
4.2.2.1
PRIMERKONZENTRATIONEN
36
4.2.2.2
MAGNESIUMKONZENTRATIONEN
38
4.2.2.3
CYCLER-EINSTELLUNGEN
39
4.2.2.4
DNA-TEMPLATE-KONZENTRATIONEN
40
43
SPEZIFITAET
41
4.3.1
METHODENVERGLEICH
ZUR
FESTSTELLUNG
DER
MENSCHSPEZIFITAET
44
4.3.2
SENSITIVITAET
(NACHWEISGRENZEN)
46
4.3.3
FORENSISCHE
ANWENDBARKEIT
47
4.4
PCR-GESCHLECHTSBESTIMMUNG
48
4.4.1
PRIMER,
ZIELSEQUENZ,
AMPLIFIKATIONSPRODUKTE
48
4.4.2
REAKTIONSBEDINGUNGEN
49
4.4.2.1
PRIMER-KONZENTRATIONEN
49
4.4.2.2
KOAMPLIFIKATION
49
4.4.2.3
MAGNESIUMKONZENTRATIONEN
51
4.4.2.4
CYCLER-EINSTELLUNGEN
51
4.4.3
SPEZIFITAET
53
4.4.4
ALTERNATIVE
METHODEN
54
4.4.5
SENSITIVITAET
(NACHWEISGRENZEN)
57
4.4.6
FORENSISCHE
ANWENDBARKEIT
60
4.5
RAPD-PCR
62
4.5.1
PRIMERDESIGN,
ZIELSEQUENZ,
AMPLIFIKATIONSMUSTER
62
4.5.2
REAKTIONSBEDINGUNGEN
63
4.5.2.1
PRIMER
63
4.5.2.2
MAGNESIUMKONZENTRATIONEN
63
4.5.2.3
CYCLER-EINSTELLUNGEN
65
4.5.2.4
DNA-TEMPLATE-KONZENTRATIONEN
66
4.5.3
REPRODUZIERBARKEIT
67
4.5.4
SENSITIVITAET
(NACHWEISGRENZEN)
70
4.5.5
VALIDITAET,
KONTAMINATION
UND
PROBLEMLOESESTRATEGIEN
71
4.5.6
ALTERNATIVE
METHODEN
DER
SPEZIESIDENTIFIZIERUNG
73
4.6
AUSBLICK
75
5.
ZUSAMMENFASSUNG
77
6.
ANHANG
79
6.1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
79
6.2
LITERATURVERZEICHNIS
81
6.3
DANKSAGUNG
93 |
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