Studien zur Regulation des humanen Thromboxan- und des humanen Prostacyclinrezeptors:
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2002
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1/1
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
PROSTANOIDE
UND
IHRE
BIOSYNTHESE
1
1.2
PROSTANOIDREZEPTOREN
UND
SIGNALTRANSDUKTION
4
1.2.1
PROSTAGLANDINREZEPTOREN
4
1.2.2
THROMBOXANREZEPTOR
5
1.2.3
PROSTACYCLINREZEPTOR
7
1.3
BIOLOGISCHE
WIRKUNGEN
VON
THROMBOXAN
UND
PROSTACYCLIN
11
2
PROBLEMSTELLUNG
13
3
MATERIAL
UND
METHODEN
15
3.1
ZELLKULTUREN
15
3.2
MATERIALIEN
UND
GERAETE
16
3.3
METHODEN
19
3.3.1
STIMULATION
DER
MEG-OL-ZELLEN
BZW.
DER
HVSMC'S
19
3.3.2
TOTAL-RNA-ISOLIERUNG
MIT
RNA-CLEAN
19
3.3.3
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
UND
REINHEIT
DER
RNA
20
3.3.4
DNASE-VERDAU
VOR
REVERSER
TRANSKRIPTION
20
3.3.5
REVERSE
TRANSKRIPTION
20
3.3.6
ENTFERNUNG
DES
PRIMERS
VON
DER
CDNA
21
3.3.7
POLYMERASEKETTENREAKTION
ZUM
NACHWEIS
DER
MRNA
DES THROMBOXAN
UND
DES
PROSTACYCLINREZEPTORS
UND
DES
SS-AKTINS
21
3.3.7.1
PCR-ANSATZ
21
3.3.7.2
PCR-PROGRAMM
22
3.3.8
GEL-ELEKTROPHORESE
UND
FAERBUNG
DER
GELE
22
3.3.9
QUANTIFIZIERUNG
DER
BANDEN
22
3.4
TRANSFEKTIONSVERSUCHE
23
3.4.1
PLASMIDGEWINNUNG
23
3.4.1.1
PLASMIDKONSTRUKTION
23
3.4.1.2
PLASMIDPRAEPARATION
25
3.4.1.3
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
UND
REINHEIT
DER
DNA
25
3.4.2
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
DURCH
ELEKTROPORATION
26
1/2
3.4.3
STIMULATION
DER
MEG-OL
27
3.4.4
LUCIFERASE-ASSAY
27
3.4.4.1
ERNTEN
DER
ZELLEN
27
3.4.4.2
AUSWERTUNG
DES
LUCIFERASE-ASSAYS
27
3.4.4.3
PROTEINBESTIMMUNG
27
3.5
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
28
4
ERGEBNISSE
29
4.1
NACHWEIS
DES
HUMANEN
THROMBOXAN-UND
PROSTACYCLINREZEPTORS
29
4.2
EXPERIMENT
MIT
DEM
AGENS
TPA
IN
VERSCHIEDENEN
KONZENTRATIONEN
34
4.3
EXPERIMENT
MIT
DEM
AGENS
TPA
UND
VERSCHIEDENEN
INKUBATIONSZEITEN
37
4.4
EXPERIMENT
MIT
DEM
AGENS
DB-CAMP
IN
VERSCHIEDENEN
KONZENTRATIONEN
40
4.5
EXPERIMENT
MIT
DB-CAMP
UND
FORSKOLIN
UND
VERSCHIEDENEN
INKUBATIONSZEITEN
42
4.6
EXPERIMENT
MIT
DER
KOMBINATION
VON
TPA
UND
DB-CAMP
44
4.7
EXPERIMENT
MIT
TPA
UND
SPEZIFISCHEN
PROTEINKINASE-C-INHIBITOREN
47
4.7.1
METHODE
DER
RNA-ISOLIERUNG
47
4.7.2
TRANSFEKTIONSVERSUCH
49
4.8
EXPERIMENT
MIT
DB-CAMP
UND
SPEZIFISCHEN
PROTEINKINASE-A-INHIBITOREN
51
4.8.1
METHODE
DER
RNA-ISOLIERUNG
51
4.8.2
TRANSFEKTIONSVERSUCH
55
4.9
EXPERIMENT
MIT
DEN
INTERLEUKINEN
IL-LFL,
IL-3,
IL-6,
IL-10
UND
THROMBIN
58
5
DISKUSSION
59
5.1
STUDIENZIEL
UND
WAHL
DER
MATERIALIEN
UND
METHODEN
59
5.2
ERGEBNISSE
DER
EXPERIMENTE
IM
VERGLEICH
MIT
DER
LITERATUR
62
5.2.1
STIMULATION
MIT
TPA
62
5.2.2
STIMULATION
MIT
DB-CAMP
65
5.2.3
STIMULATION
MIT
INTERLEUKINEN
68
5.2.4
STIMULATION
MIT
THROMBIN
71
5.3
BEDEUTUNG
DER
STUDIE
UND
AUSBLICK
72
6
LITERATURVERZEICHNIS
74
7
ANHANG
80 |
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