Untersuchungen zur Aktivität des Transposons Restless in dem heterologen Wirt Neurospora crassa: mit 11 Tabellen
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|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Berlin [u.a.]
Cramer
2002
|
| Schriftenreihe: | Bibliotheca mycologica
193 |
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINFUEHRUNG
.
1
1.
EINLEITUNG
.
1
2.
TRANSPOSONEN
IN
HYPHENPILZEN
.
3
2.1
KLASSE
I
RETROELEMENTE
.
4
2.2
KLASSE
II
DNA-ELEMENTE
.
8
3.
DIE
FAMILIE
DER
MT-TRANSPOSONEN
.
12
3.1
DIE
ELEMENTE
DER
MT-FAMILIE
SIND
WEIT
VERBREITET
.
12
3.2
ALLGEMEINE
MERKMALE
DER
ZIAT-TRANSPOSONEN
.
17
4.
DIE
AUSWIRKUNG
VON
TRANSPOSONEN
AUF
DAS
GENOM
VON
HYPHENPILZEN
.
18
5.
DIE
DNA-METHYLIERUNG
VON
REPETITIVEN
SEQUENZEN
IN
HYPHENPILZEN
.
19
6.
ANWENDUNG
VON
TRANSPOSONEN
.
21
N.
PROBLEMSTELLUNG
.
22
HL
MATERIAL
UND
METHODEN
.
24
1.
MATERIAL
.
24
1.1
STAEMME
.
24
1.2
OLIGONUKLEOTIDE
.
25
1.3
PLASMIDE
.
26
1.4
CHEMIKALIEN
.
29
1.5
MEMBRANEN
UND
PAPIERE
.
29
1.6
ENZYME
.
30
1.7
HAEUFIG
VERWENDETE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
30
1.8
NAEHRMEDIEN
.
30
2.
METHODEN
.
31
2.1
KULTURBEDINGUNGEN
.
31
2.2
ISOLIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
31
2.2.1
PLASMID-DNA
AUS
ESCHERICHIA
COLI
.
31
2.2.2
GESAMT-DNA
AUS
HYPHENPILZEN
.
31
2.2.3
GESAMT-RNA
AUS
HYPHENPILZEN
.
32
2.3
TRANSFORMATIONEN
.
32
2.3.1
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
.
32
2.3.2
PROTOPLASTIERUNG
UND
TRANSFORMATION
VON
NEUROSPORA
CRASSA
.
32
2.3.3
ELEKTROPORATION
VON
NEUROSPORA
CRASSA
KONIDIEN
.
33
2.4
SELEKTIONSSYSTEME
VON
N.
CRASSA
.
33
2.4.1
SELEKTION
PUTATIVER
N.
CRASSA
MUTANTEN
MIT
DEFEKT
IM
MTR-GEN
.
33
2.4.2 DOMINANTE
SELEKTION
VON
N.
CRASSA
AUF
ZEOCIN-RESISTENZ
.
34
2.5
GELELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
DNA
.
34
2.5.1
AGAROSEGELE
.
34
2.5.2
POLYACRYLAMIDGELE
.
34
2.6
ELUTION
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
.
35
2.7
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
35
2.8
SOUTHERN
BLOT
UND
DNA-DNA-HYBRIDISIERUNGEN
.
35
2.9
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
36
2.9.1
STANDARD-PCR
.
36
2.9.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
36
2.9.3
ASYMMETRISCHE
PCR
.
36
2.10
PCR-VERMITTELTE
IN
VITRO
MUTAGENESE
.
37
2.10.1
IN
VITRO
MUTAGENESE
ZUM
AUSTAUSCH
EINZELNER
NUKLEOTIDE
.
37
2.10.2
IN
VITRO
MUTAGENESE
ZUM
AUSTAUSCH
MEHRERER
NUKLEOTIDE
.
37
2.11
HERSTELLUNG
EINES
T-VEKTORS
.
38
2.12
DNA-SEQUENZIERUNG
.
38
2.13
AUSWERTUNG
VON
NUKLEOTID-SEQUENZEN
.
38
2.14
GRAPHISCHE
DARSTELLUNG
VON
VEKTORKARTEN
.
38
2.15
DIGITALE
BILDBEARBEITUNG
.
38
2.16
SICHERHEITSBESTIMMUNGEN
.
38
IV.
ERGEBNISSE
.
39
1.
DAS
TRANSPOSON
RESTLESS
IM
HETEROLOGEN
WIRT
NEUROSPORA
CRASSA
.
39
1.1
VEKTORKONSTRUKTIONEN
ZUR
TRANSFORMATION
VON
N.
CRASSA
.
39
1.2
DIE
TRANSFORMATION
VON
RESTLESS
VEKTOREN
IN
N.
CRASSA
.
44
1.3
UNTERSUCHUNG
ZUR
VEGETATIVEN
METHYLIERUNG
VON
RESTLESS
IN
N.
CRASSA.
47
2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
SPLEISSEN
VON
RESTLESS
IN
N.
CRASSA
.
49
2.1
VEKTORKONSTRUKTIONEN
UND
TRANSFORMATION
VON
N.
CRASSA
.
49
2.2
ANALYSE
VON
RESR/ESS-TRANSKRIPTEN
IN
VERSCHIEDENEN
N.
CRASSA
TRANSFORMANTEN
.
52
2.3
ANALYSE
DER
GESPLEISSTEN
RESTTE-TRANSKRIPTE
.
54
3.
NACHWEIS
DER
AKTIVITAET
VON
RESTLESS
IN
N.
CRASSA
.
58
3.1
SELEKTIONSSYSTEME
ZUM
NACHWEIS
DER
RESR/ESS-TRANSPOSITION
.
58
3.1.1
NACHWEIS
DER
EXZISION
VON
RESTLESS
DURCH
VORWAERTS-SELEKTION
MIT
HILFE
DES
MTR-GENS
.
58
3.1.2
NACHWEIS
DER
EXZISION
VON
RESTLESS
DURCH
DOMINANTE
SELEKTION
MITTELS
ZEOCIN-RESISTENZ
.
63
3.2
MOLEKULARER
NACHWEIS
DER
REST/ESS-TRANSPOSITION
.
66
4.
NACHWEIS
DELETIERTER
RESR/ESS
KOPIEN
IM
HOMOLOGEN
WIRT
TOLYPOCLADIUM
INFLATUM
.
69
V.
DISKUSSION
.
73
1.
MECHANISMEN
ZUR
INAKTIVIERUNG
VON
REPETITIVEN
SEQUENZEN
IN
N.
CRASSA
.
73
1.1
RESTLESS
WILD
ALS
REPETITIVES
ELEMENT
IN
NEUROSPORA
CRASSA
ERKANNT
.
75
1.2
BESTEHT
EIN
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
DER
DNA-METHYLIERUNG
UND
DER
AKTIVITAET
VON
TRANSPOSONEN?
.
78
2.
DAS
AEE^Z/E^-TRANSKRIPT
KANN
IN
DEM
WIRT
N.
CRASSA
NACHGEWIESEN
WERDEN.
80
2.1
DAS
ALTERNATIVE
SPLEISSEN
VON
RESTLESS
IST
EIN
KOMPLEXER
MECHANISMUS.
81
3.
DAS
REST/ESS-ELEMENT
IST
EIN
AKTIVES
KLASSE
II
TRANSPOSON
.
84
3.1
DIE
EXZISION
VON
RESTLESS
IN
N.
CRASSA
IST
EIN
SELTENES
EREIGNIS
.
84
3.2
DIE
AKTIVITAET
VON
RESTLESS
IN
N.
CRASSA
KANN
OPTIMIERT
WERDEN
.
85
3.3
DAS
TRANSPOSON
RESTLESS EXISTIERT
ALS
INTAKTES
ELEMENT
UND
ALS
DELETIONSDERIVAT
.
87
3.4
REPETITIVE
SEQUENZMOTIVE
UND
IHR
EINFLUSS
AUF
DIE
EXZISION
DES
RESTLESS
TRANSPOSONS
.
90
3.5
RESTLESS
HINTERLAESST
IN
N.
CRASSA
KEINE
YYFOOTPRINTS
"
BEI
DER
KORREKTEN
EXZISION
.
92
3.6
DIE TRANSPOSITION
VON
RESTLESS
FINDET
BEVORZUGT
WAEHREND
DER
REPLIKATION
STATT
.
96
4.
HOMOLOGE
UND
HETEROLOGE
TRANSPOSITION
VON
MOBILEN
GENETISCHEN
ELEMENTEN
.
99
VI.
ZUSAMMENFASSUNG
.
103
VII.
SUMMARY
.
105
VM.
LITERATUR
.
107
IX.
ANHANG
.
135 |
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