Induktion des glomerulären L-Arginin-, NO-Systems im Vergleich zwischen akuter und chronischer Anti-Thy1-Glomerulonephritis der Lewis-Ratte:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
5
2.
EINLEITUNG
8
2.1.
PATHOGENETISCHE
MECHANISMEN
DER
GLOMERULONEPHRITIS:
8
2.2.
DIE
ANTI-THY1-GLOMERULONEPHRITIS:
10
2.3.
PHYSIOLOGIE
UND
PATHOPHYSIOLOGIE
DES
L-ARGININ/NO-SYSTEMS:
11
2.4.
BEDEUTUNG
DES
L-ARGININ/NO-SYSTEMS
DER
NIERE:
13
2.5.
FRAGESTELLUNG
DES
TIEREXPERIMENTES:
15
3.
METHODEN
16
3.1.
METHODIK
DES
TIERVERSUCHS:
16
3
1.1
GRUNDLAGEN
DER
ANTI-THY1-GLOMERULONEPHRITIS:
16
3.1.2
STUDIENDESIGN:
17
3.1.3
OPERATIVE
TECHNIKEN
DES
TIERVERSUCHS:
18
3.1.3.1.
INJEKTION
DES
ANTIKOERPERS:
18
3.1.3
2
TECHNIK
DER
NEPHREKTOMIE
UND
PROBENGEWINNUNG:
18
3.1.3.3.
ISOLATION
UND
KULTIVIERUNG
DER
GLOMERULI
19
3
1.3.4.
ISOLATION
DER
PERITONEALMAKROPHAGEN.
20
3.2.
BESTIMMUNG
DER
NO-SYNTHASE-AKTIVITAET
IN
DER
ZELLKULTUR:
21
3.3.
BESTIMMUNG
DER
ARGINASE-AKTIVITAET
IN
DER
GLOMERULAEREN
KULTUR:
23
3.4.
BESTIMMUNG
DER
ORNITHINDECARBOXYLASEAKTIVITAET:
25
3.5.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
27
3.6.
BESTIMMUNG
DER
ALBUMINURIE
MIT
ELISA:
28
3.7.
HISTOLOGISCHE
ARBEITSTECHNIKEN
30
3.7.1.
PAS-FAERBUNG
30
3.7.2.
MATRIXSCORE:
30
3.7.3.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
MAKROPHAGENFAERBUNG:
31
3.8.
RNA-ISOLATION:
32
3.8.1.
GRUNDLAGEN:
32
3.8.2.
CAESIUMCHLORID-DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION:
33
3.8.3.
PHENOLCHLOROFORMEXTRAKTION:
33
3.8.4
ETHANOLPRAEZIPITATION:
34
3.8.5
BESTIMMUNG
DER
RNA-KONZENTRATION
MIT
DEM
PHOTOMETER:
34
3.8
6.
QUALITAETSKONTROLLE
DER
RNA
DURCH
GELELEKTROPHORESE
35
3.9.
"NORTHERN
BLOTTING"
36
3.9
1.
GRUNDLAGEN:
36
3.9.2.
AGAROSEGEL
ZUR
RNA
AUFTRENNUNG:
36
3.9.3.
"NORTHERN
BLOTTING"
37
3.9.4.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
HYBRIDISIERUNGSSONDEN:
37
3.9.5.
SEPHADEX
-GELFILTRATION:
38
3.9.6.
HYBRIDISIERUNG:
38
3.9.7.
AUSWERTUNG
DES
"NORTHERN
BLOTS":
39
3.10.
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
40
3.10.1.
GRUNDLAGEN:
40
3.10.2.
REVERSE
TRANSKRIPTION:
41
3.10.3.
PCR-VERSUCHSBEDINGUNGEN:
41
3.10.4.
SEMIQUANTITATIVE
PCR:
42
3.11.
KREATININ
IM
SERUM:
44
3.12.
STATISTISCHE
AUSWERTUNG:
44
4.
ERGEBNISSE:
45
4.1.
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN:
45
4.2.
PROTEINAUSSCHEIDUNG
IM
24-STUNDEN-SAMMELURIN:
48
4.3.
ALBUMINAUSSCHEIDUNG
IM
24-STUNDEN-SAMMELURIN:
49
4.4.
KREATININKONZENTRATION
IM
SERUM:
50
4.5.
GLOMERULAERE
EXPRESSION
DER
INDUZIERBAREN
UND
ENDOTHELIALEN
NO-SYNTHASEN:
51
4.5.1
INOS-MRNA
DETEKTION
MIT
NORTHERN
BLOT:
51
4.5.2.
SEMIQUANTITATIVE
RT-PCR
ZUM
NACHWEIS
DER
INOS-MRNA:
52
4.5.3.
SEMIQUANTITATIVE
RT-PCR
ZUM
NACHWEIS
DER
ENOS-MRNA:
53
4.6.
NITRITKONZENTRATION
IN
DEN
GLOMERULAEREN
KULTUREN:
54
4.7.
IMMUNHISTOCHEMISCHER
MAKROPHAGENNACHWEIS.
56
4.8.
INOS-MRNA-EXPRESSION
DER
PERITONEALMAKROPHAGENKULTUR:
58
4.9.
NITRITKONZENTRATION
IM
UEBERSTAND
DER
MAKROPHAGENKULTUR:
59
4.10.
REGULATION
DER
ORMTHINDECARBOXYLASE:
60
4.10.1
AKTIVITAET
DER
ORMTHINDECARBOXYLASE:
60
4.10.2.
GLOMERULAERE
MRNA-EXPRESSION
DER
ORNITHINDECARBOXYLASE:
61
4.11.
AKTIVITAET
DER
ARGINASE:
63
3
5.
DISKUSSION
64
6.
ZUSAMMENFASSUNG:
75
7.
LITERATURVERZEICHNIS:
77
8.
MATERIAL
/
BEZUGSQUELLEN:
84
8.1
CHEMIKALIEN:
84
8.2.
PUFFER
/
MEDIEN
86
8.3.
NUKLEINSAEUREN
/
NORTHERN
BLOT-SONDEN
88
8.4.
ENZYME
88
8.5.
ANTIKOERPER
88
8.6.
KITS
89
8.7.
OP-AUSRUESTUNG
89
8.8.
VERBRAUCHSMATERIALIEN
89
8.9.
GERAETE
90
8.10.
COMPUTER
SOFTWARE
91
9.
CURRICULUM
VITAE
92
4 |
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