Expression der Endothelin-Rezeptorsubtypen und Regulation des arteriellen Blutdrucks in Endothelin-1 transgenen Mäusen:
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1 EINLEITUNG UND ZIELSETZUNG DER ARBEIT 1
2 LITERATURUEBERSICHT 2
2.1 ENDOTHELIN 2
2.2 ENDOTHELIN-REZEPTOREN 6
2.3 ENDOTHELIN UND NIERE 10
2.4 ROLLE VON ET-1 BEI DER ARTERIELLEN HYPERTONIE 11
2.5 TRANSGENE TIERMODELLE DES ENDOTHELIN-SYSTEMS 15
2.5.1 HUMAN ENDOTHELIN-1 TRANSGENE MAEUSE 17
3 MATERIAL UND METHODEN 18
3.1 MATERIAL 18
3.1.1 GERAETE 18
3.1.2 CHEMIKALIEN 19
3.2 METHODEN 21
3.2.1 TIERHALTUNG UND TIERVERSUCHSGENEHMIGUNG 21
3.2.2 ORGANENTNAHME 21
3.2.3 PROTEINBESTIMMUNG NACH LOWRY 22
3.2.4 PROTEINBESTIMMUNG NACH PIERCE 23
3.2.5 ENDOTHELIN-1 RADIOIMMUNOASSAY (RIA) 23
3.2.5.1 ENDOTHELINEXTRAKTION AUS NIERENGEWEBE 24
3.2.5.2 AUFARBEITUNG DER PROBEN ZUR WEITEREN BEARBEITUNG IM RIA 25
3.2.5.3 RIA FUER ET-1 25
3.2.6 HISTOLOGISCHE METHODEN 28
3.2.6.1 FIXIERUNG 28
3.2.6.2 PARAFFINEINBETTUNG 28
3.2.6.3 HE-FAERBUNG 29
3.2.6.4 IMMUNHISTOCHEMIE 30
3.2.7 DIGITALE MORPHOMETRIE 32
3.2.8 IN SITU HYBRIDISIERUNG 33
3.2.8.1 VORBEREITUNG DER GERAETE UND LOESUNGEN 33
3.2.8.2 PLASMIDISOLIERUNG 33
3.2.8.3 GEL-ELEKTROPHORESE 35
3.2.8.4 GEFRIERSCHNITTE 36
3.2.8.5 RESTRIKTIONSANSATZ 37
3.2.8.6 TRANSKRIPTION 38
3.2.8.7 HYBRIDISIERUNG 40
3.2.8.8 AUTORADIOGRAPHIE 44
3.2.8.9 AUSWERTUNG 44
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.2.9 HORMON-REZEPTOR BINDUNGSSTUDIEN NACH SCATCHARD 46
3.2.9.1 THEORETISCHE GRUNDLAGEN DER SCATCHARD-ANALYSE 46
3.2.9.2 PRAEPARATION DER PLASMAMEMBRANEN 48
3.2.9.3 TRENNMETHODE UND MESSUNG DER RADIOAKTIVITAET 49
3.2.9.4
ABHAENGIGKEIT DER
ET-1
BINDUNG VON DER PROTEINKONZENTRATION
50
3.2.9.5 ABHAENGIGKEIT DER ET-1 BINDUNG VON DER INKUBATIONSSZEIT 51
3.2.9.6 KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT DER BINDUNG VON BQ-123 52
3.2.9.7 KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT DER BINDUNG VON BQ-3020 54
3.2.9.8 BINDUNGSSTUDIEN MIT ET-1 UND SCATCHARD-ANALYSE 55
3.2.10 INVASIVE MESSUNG DES MITTLEREN ARTERIELLEN BLUTDRUCKS 57
3.2.10.1 MESSAPPARATUR 57
3.2.10.2 NARKOSE UND IMPLANTATION DER INTRAVASKULAEREN KATHETER 58
3.2.10.3 ABLAUF DER MESSUNG UND PHARMAKOLOGISCHE INTERVENTION 58
3.2.11 STATISTIK 58
4 ERGEBNISSE 59
4.1 KOERPER-UND ORGANGEWICHTE 59
4.2 KONZENTRATIONEN VON IRET IN PLASMA UND NIERENGEWEBE 61
4.3 IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS VON IRET IN NIERENGEWEBE 61
4.4 NACHWEIS VON PRAEPRO-ET-L-MRNA IN NIERENGEWEBE DURCH IN SITU
HYBRIDISIERUNG 63
4.5 MEDIA ZU LUMEN RATIO DER INTRARENALEN ARTERIEN 65
4.6 HORMON-REZEPTOR-BINDUNGSSTUDIEN AN NIERENGEWEBE 67
4.6.1 ABHAENGIGKEIT DER [
125I]ET-1 BINDUNG VON DER PROTEINKONZENTRATION 67
4.6.2 ABHAENGIGKEIT DER [125I]ET-1 BINDUNG VON DER INKUBATIONSZEIT 68
4.6.3 KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT DER BINDUNG VON BQ-123 69
4.6.4 KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT DER BINDUNG VON BQ-3020 70
4.6.5 BINDUNGSSTUDIEN MIT ET-1 UND SCATCHARDANALYSE 72
4.6.6 REZEPTORDICHTE (B
MAX) BEI 3 MONATE ALTEN MAEUSEN 76
4.6.7 REZEPTORDICHTE (B
MAX) BEI 16 MONATE ALTEN MAEUSEN 79
4.6.8 VERGLEICH DER ALTERSABHAENGIGEN REZEPTORDICHTE (BMAX) 82
4.6.9 VERGLEICH DER ALTERSABHAENGIGEN REZEPTORAFFINITAET (KD) 85
4.7 INVASIVE MESSUNG DES ARTERIELLEN BLUTDRUCKS 86
4.7.1 VERGLEICH DES ARTERIELLEN BLUTDRUCKS UND DER PULSFREQUENZ 86
4.7.2 WIRKUNG VON LOESUNGSMITTEL AUF DEN ARTERIELLEN BLUTDRUCK 87
4.7.3 BLUTDRUCKKURVEN UNTER BQ-788 UND BQ-123 88
4.7.4 VERGLEICH DES ARTERIELLEN BLUTDRUCKS UND DER PULSFREQUENZ NACH
BQ-788 90
4.7.5 VERGLEICH DES ARTERIELLEN BLUTDRUCKS UND DER PULSFREQUENZ NACH
BQ-123 96 |
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