Urokinase aktiviert den Jak-Stat-Signaltransduktionsweg in humanen Endothelzellen:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.1
1. EINLEITUNG.3
1.1 ENDOTHELZELLFUNKTION UND UROKINASE-TYP PLASMINOGEN-AKTIVATOR
(U-PA).3
1.2 DAS U-PA / U-PAR-SYSTEM.4
1.3 FUNKTIONEN DES U-PA / U-PAR-SYSTEMS.6
1.4 DER JAK / STAT-SIGNALTRANSDUKTIONSWEG.10
1.5 ZIELSETZUNG.13
2. MATERIAL UND METHODIK. 15
2.1 CHEMISCHE UND BIOCHEMISCHE MATERIALIEN, GERAETE, HERSTELLER UND
LIEFERANTEN.15
2.1.1 CHEMIKALIEN UND BIOCHEMISCHE SUBSTANZEN.15
2.1.2 ANTIKOERPER.16
2.1.3 GERAETE UND MATERIALIEN.17
2.2 ZELLKULTUR.18
2.2.1 ZELLEN UND MEDIEN.18
2.2.2 ENDOTHELZELLISOLIERUNG AUS HUMANEN NABELSCHNUEREN.18
2.3 STIMULATION MIT UROKINASE-TYP PLASMINOGEN-AKTIVATOR (U-PA) UND
ZELLYSIS.19
2.4 VORBEHANDLUNG MIT PI-PLC UND BESTIMMUNG DER U-PAR KONZENTRATION
IM ELISA.19
2.5 ISOLIERUNG VON NUKLEAEREN PROTEINEN. 20
2.6 PROTEINBESTIMMUNG. 21
2.7 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE).21
2.8 WESTERN BLOT UND STRIPPING.22
2.8.1 SEMI-DRY-BLOTTING. 22
2.8.2 IMMUNOLOGISCHER NACHWEIS DER TRANSFERIERTEN PROTEINE.22
2.8.3 STRIPPING VON PVDF-BLOTMEMBRANEN.23
2.9 IMMUNOPRAEZIPITATION. 23
2.10ELECTROPHORETIC MOBILITY SHIFT ASSAY (EMSA).23
2.10.1 5'-ENDLABELING VON OLIGONUKLEOTIDEN. 23
2.10.2 BINDUNGSREAKTION UND ELEKTROPHORESE. 24
2.11 FIXIERUNG UND FAERBUNG DER ZELLEN ZUR MIKROSKOPIE. 25
2.11.1 FIXIERUNG VON ENDOTHELZELLEN.25
2.11.2 IMMUNOCHEMISCHE FAERBUNG VON ENDOTHELZELLEN.25
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/963044648
3. ERGEBNISSE.26
3.1 IMMUNOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER ZELLEN.26
3.2 U-PA- UND ATF-INDUZIERTE STIMULATION VON ENDOTHELZELLEN.27
3.2.1 U-PA-INDUZIERTE TYROSIN-PHOSPHORYLIERUNG IN ENDOTHELZELLEN.27
3.2.2 ATF-INDUZIERTES TYROSIN-PHOSPHORYLIERUNGSMUSTER IN ENDOTHELZELLEN
.29
3.2.3 U-PA-INDUZIERTES TYROSIN-PHOSPHORYLIERUNGSMUSTER NACH
VORBEHANDLUNG DER ZELLEN MIT PI-PLC.30
3.2.4 ZUSAMMENFASSUNG 1.32
3.3 IDENTIFIZIERUNG BESTIMMTER JANUS-KINASEN ALS TEIL DER
U-PAR-VERMITTELTEN
SIGNALTRANSDUKTION.33
3.3.1 NACHWEIS DER JANUS-KINASEN IN ENDOTHELZELLEN.33
3.3.2 IDENTIFIZIERUNG DER MIT DEM U-PA-REZEPTOR ASSOZIIERTEN
JANUS-KINASEN.34
3.3.3 U-PA-INDUZIERTE, ZEITABHAENGIGE AKTIVIERUNG VON JAK 1 UND TYK 2.36
3.3.4 ZUSAMMENFASSUNG II.38
3.4 U-PA-INDUZIERTE AKTIVIERUNG VON STAT 1.38
3.4.1 NACHWEIS VON STAT 1 IN ENDOTHELZELLEN.38
3.4.2 ZEITABHAENGIGKEIT DER AKTIVIERUNG VON STAT 1 DURCH U-PA.40
3.4.3 TRANSLOKATION VON STAT 1 IN DEN ZELLKERN. 42
3.4.4 ZUSAMMENFASSUNG III. 45
3.5 U-PA INDUZIERT EINE SPEZIFISCHE GAS/ISRE BINDUNGSAKTIVITAET IN
ENDOTHELZELLEN. 45
3.5.1 U-PA-INDUZIERTE BILDUNG EINES PROTEIN-DNA-KOMPIEXES.45
3.5.2 STAT 1 IST BESTANDTEIL DES U-PA-INDUZIERTEN PROTEIN-DNA-KOMPLEXES
.47
3.5.3 ZUSAMMENFASSUNG IV. 48
4. DISKUSSION. 49
4.1 DAS U-PA / U-PAR-SYSTEM UND SIGNALTRANSDUKTION.49
4.2 DAS U-PA / U-PAR-SYSTEM UND DER JAK/STAT-SIGNALTRANSDUKTIONSWEG.52
4.3 MOEGLICHE FUNKTIONELLE BEDEUTUNG DER U-PA/U-PAR-VERMITTELTEN
AKTIVIERUNG
DES JAK/STAT-SYSTEMS IN HUMANEN ENDOTHELZELLEN.55
5. ZUSAMMENFASSUNG DER ARBEIT. 58
LITERATURVERZEICHNIS.61
VEROEFFENTLICHUNG IM ZUSAMMENHANG MIT DIESER ARBEIT.77
DANKSAGUNG. 78
ERKLAERUNG AN EIDES STATT. 79
LEBENSLAUF. 80 |
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