Regulation der BOB.1-OBF.1-Expression und der BOB.1-OBF.1-Proteinstabilität:
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG. X
1.1. DIE B-ZELLDIFFERENZIERUNG.
1.2. DIE ROLLE VON TRANSKRIPTIONSFAKTOREN IN DER B-ZELLENTWICKLUNG.4
1.3. DAS OKTAMERMOTIV.8
1.4. DIE TRANSKRIPTIONSFAKTOREN OCTL UND OCT2.9
1.5. DER B-ZELL-SPEZIFISCHE TRANSKRIPTIONSFAKTOR BOB.L/OBF.L.13
1.6. DER PHAENOTYP BOB. 1/OBF. 1-DEFIZIENTER MAEUSE.14
1.7. DIE REGULATION DER PROTEINSTABILITAET DURCH UBIQUITINYLIERUNG.16
1.8. ZIELE UND MOTIVATION DER ARBEIT.19
2 ERGEBNISSE
.
2
.1. ANALYSE DES BOB.L/OBF.L-PROMOTORS.22
2.1.1. B- UND T-ZELLEN NUTZEN DENSELBEN TRANSKRIPTIONELLEN STARTPUNKT IM
BOB.L/OBF.L -PROMOTOR.23
2.1.2. DER KLONIERTE BOB. 1/OBF. 1-PROMOTOR ZEIGT EINE ZELLSPEZIFITAET
FUER B-ZELLEN ABER KEINE INDUZIERBARKEIT IN
T-ZELLEN.26
2.2. INTERAKTIONSPARTNER VON BOB.L/OBF.L.
3 1
2.2.1. REGULATION VON BOB. 1 /OBF. 1 AUF PROTEIN-NIVEAU.31
2.2.2. POTENTIELLE INTERAKTIONSPARTNER VON BOB.L/OBF.L.34
2.2.3. BOB.L/OBF.L INTERAGIERT MIT SIAH1.39
2.2.4. REGULATION DER BOB. 1/OBF. 1-PROTEINSTABILITAET DURCH SIAH."44
2.2.5. DIE AKTIVIERUNG DES B-ZELLREZEPTORS FUHRT ZUR BOB. 1/OBF.
1-PROTEINDEGRADATION DURCH SIAH1.51
3. DISKUSSION.63
3.1. DER BOB. 1/OBF. 1-PROMOTOR.63
3.1.1. BINDUNGSSTELLEN FUER TRANSKRIPTIONSFAKTOREN IM BOB. 1/OBF.
1-PROMOTOR.63
3.1.2. POTENTIELLE REGULATIONSMECHANISMEN IM BOB. 1/OBF. 1-PROMOTOR DIE
ZU EINER ZELLSPEZIFITAET FUEHREN.65
3.1.3. REGULATIONSMECHANISMEN DIE EINE INDUZIERBARKEIT DES BOB. 1/OBF.
1-PROMOTORS IN T-ZELLEN ERKLAEREN
KOENNEN.68
3.2. SIAH1 IST EIN INTERAKTIONSPARTNER VON BOB.L/OBF.L.71
3.2.1. REGULATION VON BOB.L/OBF.L IN PRIMAEREN ZELLEN.71
3.2.2. BOB.L/OBF.L INTERAGIERT MIT SIAH 1.72
3.2.3. DEGRADATION VON BOB.L/OBF.L DURCH SIAH1.73
3.2.4. REGULATION DER BOB. 1/OBF. 1-DEGRADATION IN B-ZELLEN.74
3.2.5. DIE ROLLE DER SERINE 184, 188 UND 189 IN BOB.L/OBF.L.77
3.2.6. BOB. 1/OBF. 1 UND BCL6.79
3.3. INTERAKTIONSPARTNER DER BOB.L/OBF.L CARBOXY-TERMINALEN DOMAENE.80
3.3.1. DIE POTENTIELLE INTERAKTION ZWISCHEN BOB.L/OBF.L UNDABP 280.81
3.3.2. DIE POTENTIELLE INTERAKTION ZWISCHEN BOB.L/OBF.L UND
MCM7/CDC47.83
4. METHODEN UND MATERIALIEN.85
4.1. STANDARDMETHODEN.85
4.1.1. PRAEZIPITATION VON NUKLEINSAEUREN.85
4.1.2. PHENOL/CHLOROFORM-EXTRAKTION.85
4.1.3. KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN.85
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/964221829
4.1.4. KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON PROTEINEN.85
4.1.5. GELELEKTROPHORESEN.85
4.2. KLONIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN.86
4.2.1. RESTRIKTIONSVERDAU VON PLASMID-DNA.86
4.2.2. DEPHOSPHORYLIERUNG VON LINEARISIERTEN VEKTOREN.86
4.2.3. DIE KLENOW-REAKTION.86
4.2.4. AUFREINIGUNG VON DNA-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGELEN.86
4.2.5. LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN UND VEKTOREN.87
4.2.6. TRANSFORMATION DER LIGATIONSANSAETZE.87
4.3. ISOLATION VON DNA. 87
4.3.1. MINI-EXTRAKTION VON PLASMID-DNA.87
4.3.2. MAXI-EXTRAKTION VON PLASMID-DNA.88
4.3.3. PRAEPARATION VON GENOMISCHER DNA.88
4.4. ISOLATION VON RNA.89
4.4.1. PRAEPARATION VON GESAMT-RNA AUS MAUSGEWEBEN UND
GEWEBEKULTURZELLEN.89
4.4.2. PRAEPARATION VON GESAMT-RNA AUS PRIMAEREN ZELLEN FUER LIGHTCYCLER.89
4.5. HYBRIDISIERUNG VON NUKLEINSAEUREN.89
4.5.1. KOLONIEHYBRIDISIERUNG.89
4.5.2. SOUTHEM-BLOT ANALYSE.90
4.5.3. NORTHEM-BLOT ANALYSE.90
4.5.4. RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA-PROBEN.90
4.5.5. AUFREINIGUNG DER RADIOAKTIV MARKIERTEN DNA-PROBEN.90
4.6. SEQUENZIERUNG VON DNA.91
4.7. "PRIMER EXTENSION".91
4.7.1. RADIOAKTIVE PRIMERMARKIERUNG.91
4.7.2. "PRIMEREXTENSION".91
4.8. LIGHTCYCLER PCR.91
4.8.1. ISOLATION DER RNA.91
4.8.2. REVERSE TRANSKRIPTION.91
4.8.3. LIGHTCYCLER PCR.92
4.8.4. AUSWERTUNGSMETHODE.92
4.9. HERSTELLUNG VON PROTEINEXTRAKTEN.94
4.9.1. PROTEINEXTRAKTE AUS PRIMAEREN ZELLEN.94
4.9.2. PROTEINEXTRAKTE AUS TRANSFORMIERTEN ZELLINIEN.94
4.10. IMMUNOBLOT (WESTERN-BLOT ANALYSE).94
4.11. EXPRESSION UND AUFREINIGUNG REKOMBINANTER PROTEIN.95
4.11.1. GLUTATHION-S-TRANSFERASE (GST) MARKIERTE PROTEINE.95
4.11.2. IN VITRO TRANSKRIPTION UND TRANSLATION.95
4.12. "PULL-DOWN ASSAY".-.95
4.13. "YEAST-TWO HYBRID SCREEN".96
4.13.1. ALLGEMEINES ARBEITEN MIT HEFEN.96
4.13.2. AMPLIFIKATION DER CDNA-BIBLIOTHEK.96
4.13.3. HEFE-TRANSFORMATION.96
4.13.4. SS-GALACTOSIDASE-TEST.97
4.13.5. PLASMID-PREPARATION AUS HEFEN.97
4.14. ALLGEMEINE ZELLKULTURTECHNIKEN.97
4.14.1. ZENTRIFUGATION VON ZELLEN.97
4.14.2. BESTIMMUNG DER ZELLZAHL.97
4.14.3. EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN.98
4.15. KULTIVIEREN VON ZELLINIEN.98
4.15.1. KULTIVIEREN VON TRANSFORMIERTEN ZELLINIEN.98
4.15.2. KULTIVIEREN VON PRIMAEREN THYMOZYTEN.98
4.16. TRANSFEKTIONEN VON ZELLINIEN.98
4.16.1. DEAE-DEXTRAN-TRANSFEKTION VON S194-PLASMAZYTOMA, JURKAT T- UND
RAMOS B-ZELLEN.98
4.16.2. KALZIUMPHOSPHAT-TRANSFEKTION VON NIH/3T3.99
4.16.3. ELEKTROPORATION VON NIH/3T3-ZELLEN.99
4.17. BESTIMMUNG VON ENZYMAKTIVITAETEN.100
4.17.1. MESSUNG DER SS-GALAKTOSIDASEAKTIVITAET.100
4.17.2. MESSUNG DER LUZIFERASEAKTIVITAET.100
4.18. IMMUNFLUORESZENZ ANALYSEN.100
4.19. MESSUNG DER PROTEIN-HALBWERTSZEIT.101
4.20. ALLGEMEIN VERWENDETE MATERIALIEN.101
4.20.1. CHEMIKALIEN.101
4.20.2. PUFFER UND LOESUNGEN.102
4.20.3. MEDIUM FUER BAKTERIEN-, HEFE- UND ZELLKULTUR.103
4.20.4. REAGENZIEN UND ANTIKOERPER.104
4.20.5. ENZYME.105
4.20.6. GROESSENSTANDARDS.105
4.20.7. GEBRAUCHSFERTIGE KITS.105
4.20.8. PRIMER.106
4.20.9. VEKTOREN UND PLASMIDE.106
4.20.10. BIOLOGISCHE MATERIALIENF.107
4.20.11. VERBRAUCHSMATERIALIEN.107
4.20.12. MEMBRANEN UND FILTER.108
4.20.13. GERAETE.108
4.20.14. DATENVERARBEITUNG.109
5. ABKUERZUNGEN.HO
6. LITERATUR.HL
7. LEBENSLAUF.126
8. ERKLAERUNG.127 |
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