Analyse der Zellsortierung und Zellbewegung von Dictyostelium discoideum mittels konfokaler 4D-Mikroskopie:
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
3
1.
EINLEITUNG
5
1.1.
K
ONFOKALE
M
IKROSKOPIE
UND
B
ILDVERARBEITUNG
5
1.2.
G
RUEN
F
LUORESZIERENDES
P
ROTEIN
(GFP)
7
1.3.
DLCTYOSTELIVM
DISCOIDEUM
9
1.3.1.
SYSTEMATISCHE
STELLUNG
10
1.3.2.
LEBENSWEISE
UND
ENTWICKLUNG
11
1.4.
A
RTSPEZIFISCHE
S
ORTIERUNG
UND
E
NTWICKLUNG
15
1.5.
D
AS
Z
YTOSKELETT
VON
D.
DISCOIDEUM
17
1.6.
F
RAGESTELLUNGEN
18
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
20
2.1.
E
XPERIMENTELLER
T
EIL
20
2.1.1.
FLUESSIGE
MEDIEN
20
2.1.2.
PLATTEN
21
2.1.3.
VERWENDETE
GFP-VARIANTEN
22
2.1.4.
VERWENDETE
ZELLEN
23
2.1.5.
ZELLKULTUR
24
2.1.6.
MIKROSKOP-SYSTEME
26
2.1.7.
SLUG-VERSUCHE
27
2.1.8.
ARTENMISCHEXPERIMENTE
28
2.1.9.
SEVERIN-GFP
MESSUNGEN
29
2.2.
B
ILDVERARBEITUNG
UND
A
USWERTUNG
31
2.2.1.
XYT-SEQUENZEN
32
2.2.2.
DARSTELLUNG
VON
4D-DATENSAETZEN
33
2.2.3.
ZELLVERFOLGUNG
35
2.2.4.
AUSWERTUNGSROUTINEN
36
3.
ERGEBNISSE
37
3.1.
S
IMULTANE
D
ETEKTION
ZWEIER
SPEKTRALER
GFP-V
ARIANTEN
3
7
3.1.1.
DETEKTION
IN
KONFOKALMIKROSKOPEN
MIT
GLASFILTERN
37
3.1.2.
DETEKTION
IN
KONFOKALMIKROSKOPEN
MIT
SPEKTRALER
FILTERTECHNIK
41
3.2.
I
N
VIVO
Z
ELLSORTIERUNG
ZWEIER
P
RESTALK
-Z
ELLPOPULATIONEN
IN
S
LUGS
42
3.2.1.
VERTEILUNG
DER
GFP-REPORTER
IN
SLUGS
43
3.2.1.1.
S65T-GFP
UNTER
DEM
ECRNA
PROMOTOR
43
3.2.1.2.
W2/W7-GFP
UNTER
DEM
PSTO
PROMOTOR
43
3.2.2.
ZURUECLFALLEN
VON
ZELLEN
AUS
DEM
PRESTALK-BEREICH
44
3.2.3.
BILDUNG
VON
NEUEN
SPITZEN
47
3.2.3.1.
PSTA-GFP-MARKIERTE
ZELLEN
47
3.2.3.2.
PSTO-GFP-MARKIERTE
ZELLEN
50
3.2.3.3.
4D-ZELLVERFOLGUNG
EINZELNER
PSTO-GFP-ZELLEN
53
3.2.3.4.
DYNAMIK
DER
PSTO-GFP
EXPRESSION
IN
SLUGS
57
3.2.4.
MISCHUNGEN
VON
GFP-VARIANTEN
IN
SLUGS
58
3.2.4.I.
PSTA-GFP
UND
PSTO-GFP-ZELLEN
WAEHREND
DER
SPITZENBILDUNG
58
3.2.4.2.
LABILE
UND
STABILE
GFP-VARIANTEN
58
3.3.
A
RTSPEZIFISCHE
Z
ELLSORTIERUNG
WAEHREND
DER
E
NTWICKLUNG
59
3.3.1.
D.
DISCOIDEUM
UNDD.
MUCOROIDES
59
3.3.1.1.
BEGINN
DER
ENTWICKLUNG
59
3.3.1.2.
AGGREGATION
60
3.3.1.3.
MOUNDS
65
3.3.1.4.
ZUSAMMENFASSUNG
70
3.3.2.
D.
DISCOIDEUM
UND
POLYSPHONDYLIUM
PALLIDUM/VIOLACEUM
70
3.4.
I
NTRAZELLULAERE
L
OKALISIERUNG
EINES
S
EVERIN
GFP-F
USIONSPROTEINS
73
3.4.1.
GFP-KONTROLLE
UND
RATIO-BILDER
SEVERIN-GFP/TRITC-DEXTRAN
73
3.4.2.
ENDOZYTOSE
75
3.4.2.1.
MAKROPINOZYTOSE
75
3.4.2.2.
PHAGOZYTOSE
76
3.4.3.
ZELLBEWEGUNG
77
3.4.3.1.
UNGERICHTETE
ZELLBEWEGUNG
'
77
3.4.3.2.
CHEMOTAXIS
79
3.4.3.3.
GERICHTETE
BEWEGUNG
82
3.4.4.
ZELL-ZELL
KONTAKTE
83
3.4.5.
ZELLEN
IN
AGGREGATIONSSTROEMEN
84
3.4.6.
SEVERIN-GFP
WAEHREND
DER
ZELLTEILUNG
87
4.
DISKUSSION
89
4.1.
S
IMULTANE
D
ETEKTION
VON
GFP-V
ARIANTEN
89
4.2.
I
N
VIVO
Z
ELLSORTIERUNG
ZWEIER
P
RESTALK
-Z
ELLPOPULATIONEN
IN
S
LUGS
90
4.2.1.
VERTEILUNG
DER
GFP-REPORTER
IN
SLUGS
90
4.2.2.
ZURUECKFALLEN
VON
PRESTALK-ZELLEN
IN
DEN
PRESPORE-BEREICH
91
4.2.3.
NEUBILDUNG
VON
SPITZEN
92
4.2.4.
MISCHUNGEN
VON
GFP-VARIANTEN
IN
SLUGS
96
4.3.
A
RTSPEZIFISCHE
Z
ELLSORTIERUNG
WAEHREND
DER
E
NTWICKLUNG
97
4.3.1.
D.
DISCOIDEUM
UND
D.
MUCOROIDES
97
4.3.2.
D.
DISCOIDEUM
UND
POLYSPHONDYLIUM
PALLIDUM/VIOLACEUM
99
4.3.3.
MECHANISMEN
DER
ARTSPEZIFISCHEN
ZELLSORTIERUNG
100
4.3.4.
VERGLEICH
MIT
INNERARTLICHEN
SORTIERUNGSVORGAENGEN
100
4.4.
I
NTRAZELLULAERE
L
OKALISIERUNG
EINES
S
EVERIN
GFP-F
USIONSPROTEINS
102
4.4.1.
ENDOZYTOSE
103
4.4.2.
VEGETATIVE
ZELLEN
103
4.4.3.
FRUEHE
AGGREGATION
UND
CHEMOTAXIS
104
4.4.4.
AGGREGATIONSSTROEME
105
4.4.5.
SEVERIN-GFP
WAEHREND
DER
ZELLTEILUNG
107
5.
LITERATURVERZEICHNIS
108
LEBENSLAUF
118
DANK
119 |
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