Immunhistologische Untersuchungen zum Vorkommen von Östrogen- und Progesteronrezeptoren sowie Charakterisierung der Zelldynamik in den Plazentomen des Rindes in der zweiten Hälfte der Gravidität und unter der Geburt:
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Autor: Wirth, Christina Lieselotte Astrid
Jahr: 2001
Inhaltsverzeichnis
INHAL TSVERZEICHNIS
Verzeichnis der verwendeten Abkürzungen 1
1 EINLEITUNG und AUFGABENSTELLUNG 2
2 LITERATUROBERSICHT 4
2.1 Plazentare Steroidbiosynthese beim Rind 4
2.1.1 Östrogene 4
2.1.2 Progesteron 5
2.2 Morphologischer und histologischer Aufbau der Rinderplazenta 7
2.3 Steroidhormonrezeptoren 12
2.3.1 Östrogenrezeptoren 13
2.3.2 Progesteronrezeptoren 15
2.3.3 Regulation der Expression von Östiogen-und Progesteronrezeptoren 17
2.3.4 Vorkommen von Östrogen- und Progesteronrezeptoren in der Plazenta 18
2.3.4.1 Östrogen-und Progesteronrezeptoren in der Plazenta des Rindes 18
2.3.4.2 Östrogenrezeptoren in der Plazenta anderer Spezies 19
2.3.4.3 Progesteronrezeptoren in der Plazenta anderer Spezies 21
2.4 Zelldynamik 23
2.4.1 Zellproliferation 23
2.4.1.1 Zellzyklus und Zellvermehrung 23
2.4.1.2 Das Ki67-Antigen 25
2.4.1.3 Plazentares Wachstum beim Rind 26
2.4.2 Zelluntergang 27
2.4.2.1 Morphologie von Nekrose und Apoptose 28
2.4.2.2 Molekulare Mechanismen und biochemische Charakteristika der
Apoptose 29
2.4.2.3 Apoptotische Vorgänge im Bereich der Reproduktionsorgane 33
2.4.2.4 Vorkommen der Apoptose in der Plazenta 34
3 EIGENE UNTERSUCHUNGEN 37
3.1 Material und Methoden 37
3.1.1 Gewinnung und Aufbereitung des Probenmaterials 37
Inhaltsverzeichnis
3.1.2 Vorbereitung der Gewebeschnitte für die immunhistochemischen Unter-
suchungen 38
3.1.3 Immunhistochemische Nachweisverfahren 39
3.1.3.1 Immunhistochemischer Nachweis des Progesteronrezeptors 39
3.1.3.2 Immunhistochemischer Nachweis des Östrogenrezeptors 41
3.1.3.3 Immunhistochemischer Nachweis des Ki67-Antigens 42
3.1.4 Darstellung der Apoptose mittels TdT-mediated dUTP-biotin nick end
labeling (TUNEL) 43
3.1.5 Quantitative Auswertung der gefärbten Gewebeschnitte 45
3.1.5.1 Quantitative Erfassung der Progesteron- bzw. Östrogenrezeptor-
Expression
3.1.5.2 Quantitative Erfassung der Ki67-Antigen-Expression 47
3.1.5.3 Quantitative Erfassung der Häufigkeit apoptotischer Zellen 48
3.1.6 Versuchsaufbau und statistische Auswertungen 48
3.1.6.1 Versuchsaufbau und statistische Auswertungen zur Progesteron- bzw.
Östrogenrezeptor-Expression
3.1.6.2 Versuchsaufbau und statistische Auswertungen zur Expression des Ki67-
Antigens 5
3.1.6.3 Versuchsaufbau und statistische Auswertungen zur Häufigkeit apoptoti-
scher Zellen 51
3.1.6.4 Weitere Angaben zur statistischen Auswertung und Darstellung der
Ergebnisse
3.1.7 Geräte, Materialien, Chemikalien und Lösungen
3.1.7.1 Auflistung der Geräte 53
3.1.7.2 Bezugsquellen für Materialien und Chemikalien 54
3.1.7.3 Puffer und Lösungen 56
3.1.7.4 Aliquotherstellung aus den TUNEL-Reagenzien 58
3.1.7.5 APES-Beschichtung der Objektträger 59
3.2 Ergebnisse 60
3.2.1 Expression von Progesteronrezeptoren in den Plazentomen des Rindes °°
3.2.1.1 Vorversuche zur Ermittlung eines geeigneten Primärantikörpers zur Dar-
stellung von Progesteronrezeptoren
3.2.1.2 Lichtmikroskopische Beobachtungen
Inhaltsverzeichnis
3.2.1.3 Verlauf der Progesteronrezeptor-Expression zwischen dem 150. Trächtig-
keitstag und der Geburt 64
3.2.1.4 Variabilität des Prozentsatzes Progesteronrezeptor-positiver Karunkel-
stromazellen in fünf Plazentomen einer 270 Tage graviden Kuh 67
3.2.2 Expression von Östrogenrezeptoren in den Plazentomen des Rindes 69
3.2.2.1 Vorversuche zur Ermittlung eines geeigneten Primärantikörpers zur Dar-
stellung von Östrogenrezeptoren 69
3.2.2.2 Lichtmikroskopische Beobachtungen 70
3.2.2.3 Verlauf der Östrogenrezeptor-Expression zwischen dem 150. Trächtig-
keitstag und der Geburt 73
3.2.2.4 Variabilität des Prozentsatzes Östrogenrezeptor-positiver Karunkelstro-
mazellen in fünf Plazentomen einer 270 Tage graviden Kuh 76
3.2.3 Proliferationsverhalten verschiedener Zellpopulationen in den Plazento-
men des Rindes 78
3.2.3.1 Lichtmikroskopische Beobachtungen zur Expression des Ki67-Antigens 78
3.2.3.2 Verlauf der Ki67-Antigen-Expression in Rinderplazentomen zwischen
dem 150. Trächtigkeitstag und der Geburt 82
3.2.3.3 Variabilität des Proliferationsverhaltens verschiedener Zellpopulationen
in fünf Plazentomen einer 270 Tage graviden Kuh 90
3.2.4 Vorkommen von Apoptose in den Plazentomen des Rindes 95
3.2.4.1 Lichtmikroskopische Beobachtungen in TUNEL-gefarbten Präparaten 95
3.2.4.2 Apoptose-Häufigkeit in den Plazentomen des Rindes zwischen dem 150.
Trächtigkeitstag und der Geburt 98
3.2.4.3 Variabilität der Apoptose-Häufigkeit in fünf Plazentomen einer 270 Tage
graviden Kuh 101
4 DISKUSSION 103
4.1 Diskussion der Methodik 103
4.1.1 Immunhistochemische Verfahren 103
4.1.1.1 Nachweis von PR mittels Immunhistochemie in der Rinderplazenta 103
4.1.1.2 Nachweis von ER mittels Immunhistochemie in der Rinderplazenta 103
4.1.1.3 Nachweis proliferierender Zellen mittels immunhistochemischer Darstel-
lung des Ki67-Antigens in der Rinderplazenta 104
in
Inhaltsverzeichnis
4.1.2 Nachweis apoptotischer Zellen mit der TUNEL-Methode 104
4.2 Diskussion der Ergebnisse 107
4.2.1 Vorkommen von Progesteronrezeptoren in den Plazentomen des Rindes 107
4.2.2 Vorkommen von Östrogenrezeptoren in den Plazentomen des Rindes 109
4.2.3 Zelldynamik in den Plazentomen des Rindes 111
4.2.3.1 Proliferationsverhalten verschiedener Zellpopulationen in den Plazento-
men des Rindes 111
4.2.3.2 Vorkommen von Apoptose in den Plazentomen des Rindes 114
5 ZUSAMMENFASSUNG 117
6 SUMMARY 120
7 LITERATURVERZEICHNIS 123
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