Analyse von humanen Knochenmarkszellen unter Langzeitkulturbedingungen im Hinblick auf Zelldifferenzierung, Produktion von Extrazellulärmatrix und deren Mineralisierung:
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Marburg
Görich und Weiershäuser
2001
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INHALTSVERZEICHNISS
ABKUERZUNGEN
.
7
1
EINLEITUNG
.
8
1.1
DAS
KNOCHENMARK
.
8
1.2
WACHSTUMSFAKTOREN
.
10
1.2.1
GRANULOZYTEN
/
MAKROPHAGEN
-
KOLONIE
-
STIMULIERENDER
FAKTOR
(GM-CSF)
.
11
1.2.2
INTERLEUKIN
-
3
(IL-3)
.
12
1.3
DAS
BINDEGEWEBE
.
13
1.4
DAS
KNOCHENGEWEBE
.
18
1.4.1
KNOCHENSPEZIFISCHE
ZELLEN
.
19
1.4.2
DIE
KNOCHENMATRIX
.
22
1.4.3
DIE
KNOCHENMINERALISATION
.
25
1.5
ZELLKULTUREN
.
27
1.5.1
ZELLKULTUR
ALLGEMEIN
.
27
1.5.2
KNOCHENMARKZELLKULTUR
.
28
1.6
FRAGESTELLUNG
.
28
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
31
2.1
MATERIAL
.
31
2.1.1
GERAETE
.
31
2.1.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
31
2.1.3
REAGENTIEN
.
32
2.1.4
ANTIKOERPER
.
33
2.1.5
KULTURMEDIEN
.
34
2.2
FLOW
CHART
.
36
2.3
ZELLKULTUR
.
37
2.3.1
ZELLGEWINNUNG
.
37
2.3.1.1
AUFARBEITUNG
DER
ZELLEN
DER
INTERPHASE.
38
2.3.1.2
AUFARBEITUNG
DER
ZELLEN
DES
PELLETS
.
39
2.3.2
AUSSAAT
DER
ZELLEN
.
39
2.3.3 KULTIVIERUNG
DER
ZELLEN
.
39
2.4
MIKROSKOPIE
.
40
2.4.1
DURCHLICHTMIKROSKOPIE
.
40
2.4.2
HISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN
.
40
2.4.2.1
FAERBUNG
NACH
VON
KOSSA
.
40
2.4.2.2
ALIZARINROT
S-FAERBUNG
.
41
2.4.2.3
PAS-REAKTION
.
41
2.4.2.4
NEUFUCHSIN-FAERBUNG
.
41
2.4.3
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
.
42
2.4.3.1
VITALFAERBUNG
.
42
2.4.3.2
IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNGEN
.
42
2.4.4
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
44
2.4.4.1
FIXIERUNG
ZUR
MORPHOLOGISCHEN
AUSWERTUNG
.
44
2.4.4.2 ELEMENTANALYSE
DER
ECM
MITTELS
ENERGIEDISPERSIVER
ROENTGENSPEKTROSKOPIE
(REM-SDX).
44
2.5
FLUORESZENZ-AKTIVIERTE
ZELLSORTIERUNG
(FACS-ANALYSE)
.
44
2.6
UNTERSUCHUNG
DER
UEBERSTAENDE
.
45
2.6.1
GESAMTPROTEIN
-
BESTIMMUNG
.
47
2.6.2
DOT
-
BLOTS
.
47
2.6.3
SEMIQUANTITATIVE
ANALYSE
DER
DOT-BLOTS
MIT
OPTIMAS
6.0
.49
2.7
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.49
3
ERGEBNISSE
.
50
3.1
ZELLKULTUR
.
50
3.1.1
LICHTMIKROSKOPISCHE
AUSWERTUNG
.
50
3.1.1.1
ZELLEN
DER
INTERPHASE
.
50
3.1.1.2
ZELLEN
DES
PELLETS
.
57
3.1.2 RASTERELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
AUSWERTUNG
.
64
3.1.2.1
ZELLEN
DER
INTERPHASE
.
64
3.1.2.2
ZELLEN
DES
PELLETS
.
67
3.2
FAERBUNGEN
.
70
3.2.1
FLUORESZENZFAERBUNGEN
.
70
3.2.1.1
VITALFAERBUNG
.
70
3.2.1.2
IMMUNHISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN
.
73
3.2.1.2.1
FLUORESZENZMIKROSKOPISCHER
NACHWEIS
ZELLULAERER
BESTANDTEILE
.
73
3.2.1.2.2
FLUORESZENZMIKROSKOPISCHER
NACHWEIS
DER
BESTANDTEILE
DER
EXTRAZELLULAERMATRIX
.
79
3.2.2
HISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN
.
85
3.2.2.1
PAS-REAKTION
.
85
3.2.2.2
NEUFUCHSIN-FAERBUNG
.
88
3.2.2.3
VON
KOSSA-FAERBUNG
.
90
3.2.2.4
ALIZARINROT
S
FAERBUNG
.
92
3.3
ELEMENTANALYSE
DER
ECM
MITTELS
ENERGIEDISPERSIVER
ROENTGENSPEKTROSKOPIE
(REM-SDX).
93
3.4
FLUORESZENZ-AKTIVIERTE
ZELLSORTIERUNG
(FACS-ANALYSE)
.
99
3.4.1
VITALITAET
.
99
3.4.2
FACS
-
ANALYSE
DER
POPULATIONEN
DER
KNOCHENMARKZELLEN
.
103
3.5
UEBERSTAENDE
.
113
3.5.1
GESAMTPROTEINGEHALT
.
113
3.5.2
DOT-BLOTS
.
114
4
DISKUSSION
.
122
4.1
ZELLULAERE
BESTANDTEILE
VON
KNOCHENMARKKULTUREN
.
123
4.2
DIE
EXTRAZELLULAERE
MATRIX
DES
KNOCHENMARKS
.
128
4.2.1.1
-KOLLAGENE
.
129
4.2.1.2
-
FIBRONEKTIN
.
130
4.2.1.3
-LAMININ
.
131
4.2.1.4
-
PROTEOGLYKANE
.
132
4.3
DIE
MINERALISATION
DER
EXTRAZELLULAERMATRIX
.
134
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
139
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
142
7
VERZEICHNIS
DER
AKADEMISCHEN
LEHRER.
162
8
DANKSAGUNG
.
163
9
EHRENWOERTLICHE
ERKLAERUNG
.
164
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