Untersuchungen zum nukleozytoplasmatischen Transport der frühen Proteine E1B-55K und E4orf6 des humanen Adenovirus Typ 5:
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
ZUSAMMENFASSUNG
1
2.
EINLEITUNG
3
2.1
NUKLEOZYTOPLASMATISCHER
TRANSPORT
3
2.1.1
KERNIMPORT
3
2.1.2
KEMEXPORT
4
2.1.3
BIDIREKTIONALER
TRANSPORT
'
4
2.2
DER
EUKARYOTISCHE
INITIATIONSFAKTOR
5A
5
2.2.1
EIF-5A-FUNKTION
5
2.2.2
BETEILIGUNG
VON
EIF-5A
AM
EXPORT
VON
HIV-L-RNA
6
2.3
ADENOVIREN
7
2.3.1
AUFBAU
UND
REPLIKATION
VON
ADENOVIREN
7
2.3.2
TRANSFORMIERENDE
EIGENSCHAFTEN
VON
ADENOVIREN
8
2.3.3
FUNKTION
VON
AD5
E1B-55K
BEI
DER
TRANSFORMATION
9
2.3.4
FUNKTION
VON
AD5
E1B-55K
BEIM
VIRALEN
RNA-EXPORT
9
3.
PROBLEMSTELLUNG
11
4.
MATERIAL
12
4.1
ZELLINIEN
12
4.2
BAKTERIEN
12
4.3
MEDIEN
13
4.3.1
MEDIEN
FUER
DIE
ANZUCHT
VON
BAKTERIEN
13
4.3.2
MEDIEN
FUER
ZELLKULTUREN
13
4.3.3
MEDIENZUSAETZE
13
4.4
NUKLEINSAEUREN
13
4.4.1
OLIGONUKLEOTIDE
13
4.5
REKOMBINANTE
PLASMIDE
15
4.6
SONSTIGE
NUKLEINSAEUREN
16
4.7 ENZYME
UND
REAGENZSYSTEME
16
4.7.1
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
16
4.7.2
SONSTIGE
ENZYME
17
4.7.3
REAGENZSYSTEME
(KITS)
17
4.8 LOESUNGEN
UND
PUFFER
17
4.8.1
LOESUNGEN
FUER
DIE
REINIGUNG
VON
GST-GFP-FUSIONSPROTEINEN
18
4.8.2
REAGENZIEN
FUER
DIE
GELELEKTROPHORESE
18
4.9 REAGENZIEN
UND
LABORHILFSMITTEL
19
4.10
ANTIKOERPER
21
5.
METHODEN
22
5.1
BAKTERIENKULTUR
22
5.1.1
KULTUREN
FUER
DIE
PLASMIDISOLIERUNG
22
5.1.2
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
JE-COZI-STAEMME
22
5.1.3
TRANSFORMATION
MIT
PLASMID-DNA
22
5.2
ZELLKULTUR
23
5.2.1
TRANSFEKTION
VON
DNA
23
5.2.2
INFEKTION
MIT
ADENOVIRUS
TYP
5
24
5.2.3
HETEROKARYON-ANALYSEN
VON
AD5-INFIZIERTEN
ZELLEN
24
5.3
DNA-METHODEN
25
5.3.1
DNA-STANDARDMETHODEN
25
5.3.2
DNA-SEQUENZIERUNG
25
5.3.3
POLYMERASE-KETTENREAKTION
26
5.3.4
HYBRIDISIERUNG
KOMPLEMENTAERER
OLIGONUKLEOTIDE
26
5.3.5
HERSTELLUNG
VON
EXPRESSIONSPLASMIDEN
MITTELS
PCR
27
5.3.6
HERSTELLUNG
VON
EXPRESSIONSPLASMIDEN
MITTELS
DOPPELSTRAENGIGER
OLIGONUKLEOTIDE
28
5.4
RNA-METHODEN
29
5.4.1
STANDARDMETHODEN
29
5.4.2
ISOLIERUNG
VON
ZYTOPLASMATISCHER
RNA
29
5.4.3
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
30
5.4.4
NORTHEM-BLOT-ANALYSEN
30
5.4.5
REVERSE-TRANSKRIPTASE-PCR
30
5.4.6
SUBTRAKTIVE
HYBRIDISIERUNG
31
5.5
PROTEIN-METHODEN
33
5.5.1
HERSTELLUNG
REKOMBINANTER
GST-FUSIONSPROTEINE
33
5.5.2
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
UND
IMMUNOBLOTTING
33
5.5.3
MIKROINJEKTION
34
5.6
IMMUNFLUORESZENZ-ANALYSEN
34
6.
ERGEBNISSE
35
6.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
EIF-5A-ABHAENGIG
EXPORTIERTEN
MRNAS
35
6.2
UNTERSUCHUNG
DES
KEMEXPORTSIGNALS
VON
E4ORF6
38
6.2.1
HERSTELLUNG
EINES
REKOMBINANTEN
GST-E4-NES-GFP-FUSIONSPROTEINS
38
6.2.2
MIKROINJEKTION
DES
GST-E4-NES-GFP
FUSIONSPROTEINS
39
6.2.3
UNTERSUCHUNG
DER
LOKALISATION
UND
DES
TRANSPORTS
VON
E4ORF6-GFP
IN
LEBENDEN
ZELLEN
40
6.2.4
NUKLEOZYTOPLASMATISCHER
TRANSPORT
DES
VIRALEN
E4ORF6-PROTEINS
IN
INFIZIERTEN
ZELLEN
42
6.3
UNTERSUCHUNG
DES
NUKLEOZYTOPLASMATISCHEN
TRANSPORTS
VON
AD5
E1B-55K
44
6.3.1
UNTERSUCHUNG
DER
LOKALISATION
VON
EL
B-55K-GFP
44
6.3.2
UNTERSUCHUNG
DER
LOKALISATION
VON
ELB-55K-GFP
IN
GEGENWART
VON
P53
45
6.3.3
NUKLEOZYTOPLASMATISCHER
TRANSPORT
VON
E1B-55K-GFP
IN
LEBENDEN
ZELLEN
46
48
6.3.4
UNTERSUCHUNG
DER
ABHAENGIGKEIT
DES
E1B-55K-EXPORTS
VON
ANDEREN
PROTEINEN
6.3.5
CHARAKTERISIERUNG
VON
DOMAENEN,
WELCHE
AM
NUKLEOZYTOPLASMATISCHEN
TRANSPORT
VON
E1B-55K
BETEILIGT
SIND
49
6.3.6
NACHWEIS
DER
EXPORTAKTIVITAET
EINES
GST-EIB-NES-GFP-FUSIONSPROTEINS
50
6.3.7
UNTERSUCHUNG
DER
EXPORTAKTIVITAET
EINES
MUTIERTEN
GST-E1B-NES-GFP
FUSIONSPROTEINS
52
6.3.8
ANALYSE
DER
LOKALISATION
EINES
E1B-55K-PROTEINS
MIT
MUTIERTEM
NES
53
6.3.9
VERGLEICH
DER
AMINOSAEURESEQUENZ
VON
AD5
UND
AD
12
53
6.3.10
NUKLEOZYTOPLASMATISCHER
TRANSPORT
DES
VIRALEN
E1B-55K-PROTEINS
IN
INFIZIERTEN
ZELLEN
54
6.3.11
UNTERSUCHUNG
DER
BETEILIGUNG
VON
EIF-5A
AM
EXPORT
VON E1B-55K
56
7.
DISKUSSION
58
8.
ZUSAMMENFASSUNGEN
WEITERER
PUBLIKATIONEN
65
INHIBITION
OF
HIV-1
CLINICAL
ISOLATES
BY
PHARMACOLOGICAL
INTERFERENCE
WITH
AN
ESSENTIAL
CELLULAR
COFAKTOR
65
FUNCTIONAL
ANALYSIS
OF
THE
ADENOVIRUS
E1B-55K
COFACTOR
AP5
66
INVESTIGATION
OF
NUCLEO-CYTOPLASMIC
TRANSPORT
USING
UV-GUIDED
MICROINJECTION
67
INHIBITION
OF
CD83
CELL
SURFACE
EXPRESSION
DURING
DENDRITRIC
CELL
MATURATION
BY
INTERFERENCE
WITH
NUCLEAR
EXPORT
OF
CD83
MRNA
68
MATURE
DENTRITIC
CELIS
INFECTED
WITH
HERPES
SIMPLEX
VIRUS
TYPE
I
ARE
INHIBITED
IN
THEIR
T-CELL
STIMULATORY
CAPACITY
69
NUCLEAR
PORE
LOCALIZATION
AND
NUCLEOCYTOPLASMIC
TRANSPORT
OF
EIF-5
A:
EVIDENCE
FOR
DIRECT
INTERACTION
WITH
THE
EXPORT
RECEPTOR
CRM
1
70
9.
LITERATURVERZEICHNIS
71
10.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
79 |
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| spelling | Krätzer, Friedrich 1970- Verfasser (DE-588)12326281X aut Untersuchungen zum nukleozytoplasmatischen Transport der frühen Proteine E1B-55K und E4orf6 des humanen Adenovirus Typ 5 von Friedrich Krätzer 2001 [4], 81 S. Ill. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Erlangen-Nürnberg, Univ., Diss., 2001 Proteine (DE-588)4076388-2 gnd rswk-swf Intrazellulärer Transport (DE-588)4313701-5 gnd rswk-swf Membrantransport (DE-588)4038575-9 gnd rswk-swf Zellkern (DE-588)4067544-0 gnd rswk-swf Kernhülle (DE-588)4309987-7 gnd rswk-swf Cytoplasma (DE-588)4129692-8 gnd rswk-swf Adenovirus 5 (DE-588)4566151-0 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Adenovirus 5 (DE-588)4566151-0 s Membrantransport (DE-588)4038575-9 s Zellkern (DE-588)4067544-0 s Cytoplasma (DE-588)4129692-8 s DE-604 Kernhülle (DE-588)4309987-7 s Intrazellulärer Transport (DE-588)4313701-5 s Proteine (DE-588)4076388-2 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=009593461&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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