Entwicklung einer direktionalen Tiefgefriermethode für Pferdesperma im Vergleich zur Konservierung im Gefrierautomaten:
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2001
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| adam_text | Titel: Entwicklung einer direktionalen Tiefgefriermethode für Pferdesperma im Vergleich zur Konservierung
Autor: Klus, Nataly
Jahr: 2001
INHALTSVERZEICHNIS
1. Einleitung....................................................................................................................... 11
2. Literaturübersicht....._____......___.__..___......___............___.....___...................__...... 12
2.1.DasSpennivim..............................................................................................................12
2.1.1. Morphologie des Spenniums......................................................................................12
2.1.1.1. Spermienkopf..........................................................................................................12
2.1.1.2. Spermienschwanz....................................................................................................14
2.2. Spermienreifung............................................................................................................14
2.2.1. Posttestikuläre Spermienreifung.................................................................................14
2.2.2. Seminalplasmaproteine..............................................................................................15
2.2.3. Kapazhation...............................................................................................................16
2.2.4. Akrosomreaktion........................................................................................................17
2.3. Verarbeitung von Pferdespermien zur Tiefgefrierug......................................................18
2.3.1. Zentrifogation............................................................................................................18
2.3.2. Verdünnerzusammensetzung......................................................................................19
2.3.3. Kryoprotektiva...........................................................................................................20
2.3.3.1. Glycerin..................................................................................................................20
2.3.3.2. Eidotter...................................................................................................................22
2.3.3.3. Zucker.....................................................................................................................23
2.3.3.4. Alternative Kryoprotektiva......................................................................................23
2.3.3.5. Beeinflussung der Zusammensetzung der Spennienmembran..................................24
2.4. Einfluß der Temperatur auf das Spennium....................................................................25
2.4.1. Kälteschock...............................................................................................................25
2.4.2. Strukturveränderungen der Spermien beim Einfrieren und Auflauen..........................27
2.5. Einfluß der Osmolalität auf die Spermien......................................................................31
2.5.1. Zellvolumetrie............................................................................................................31
2.5.2. Der hypoosmotische Schwellungstest (Hos)...............................................................32
2.6. Tiefgefrierverfahren......................................................................................................33
2.6.1. Tiefgefrierung über Stickstoffdampf...........................................................................33
2.6.2. Tiefgefrierautomat.....................................................................................................33
2.6.3. Die direktionale Gefrierung........................................................................................34
INHALTSVERZEICHNIS
3. Eigene Untersuchungen.................................................................................................35
3.1. Material und Methode...................................................................................................35
3.2. Versuchstiere................................................................................................................38
3.3. Gewinnung der Ejakulate..............................................................................................38
3.4. Untersuchung der Ejakulate..........................................................................................38
3.5. Aufbereitung.................................................................................................................39
3.6. Konfektionierung..........................................................................................................39
3.7. Anpassungszeit vor der Tiefgefiierung..........................................................................39
3.8. Gefrierverfahren............................................................................................................40
3.9. Auftauen.......................................................................................................................46
3.10. Halteproben................................................................................................................46
3.11. Untersuchungsparameter.............................................................................................46
3.11.1.Motilität...................................................................................................................46
3.11.2. Morphologie............................................................................................................47
3.11.3. ZeUvolumetrie..........................................................................................................49
3.12. Statistische Methoden zur Auswertung der Ergebnisse................................................51
4. Ergebnisse......................................................................................................................52
4.1. Versuchsabschnitt 1.......................................................................................................52
4.1.1. Die direktionale Gefrierung........................................................................................52
4.1.1.1. Vergleich der Auftaumotilität der Spermien innerhalb der Gradienten.....................54
4.1.1.2. Vergleich der Auftaumotilität der Spermien zwischen den drei Gradienten..............56
4.1.1.3. Morphologische Parameter der aufgetauten Spermien des Gradienten.........................
Th 5°C-* Tc -50°C,............................................................................................................57
4.1.2. Einfluß der Kühlraten des Tiefgefrierautomaten (60°C/min und 25°C/min) auf die
Spermaqualität.....................................................................................................................58
4.1.3. Vergleich der Tiefgefriermethoden.............................................................................59
4.1.3.1. Vergleich der aufgetauten Spermaproben der Kühlrate 60°C/min bzw. 25oC/min mit
allen Parametern der direktionalen Gefrierung bezüglich der Motilität.................................59
4.1.3.2. Morphologischer Vergleich der aufgetauten Spermien der Kühlrate 60cC/min mit
dem Gradienten Th 5°C- Tc -50°C der direktionalen Gefrierung.......................................61
4.1.3.3. Morphologischer Vergleich der aufgetauten Spermien der Kühlrate 25°C/min mit
dem Gradienten Th 5°C— Tc -50°C der direktionalen Gefrierung.......................................62
4.1.4. Einfluss des Gradienten Th 5°C-» Tc -50°C (Geschwindigkeit 0,4 und 3,0 mm/s) auf
die Spermaqualität...................................... ........63
INHALTSVERZEICHNIS
4.1.4. Prüfling der Spermienmotilität von 13 Pferden auf intraindividuelle Unterschiede.....64
4.1.6. Prüfung der Spermienmotilität von 13 Pferden auf interindividuelle Unterschiede......65
4.2. Versuchsabschnirt II.....................................................................................................68
4.2.1. Einfluß von zwei Lagerungstemperaturen auf die Spermaqualität...............................68
4.2.1.1. Motilität..................................................................................................................68
4.2.1.2. Morphologie...........................................................................................................70
4.2.1.3. Zellvolumetrie.........................................................................................................71
4.2.2. Einfluß der Kühlraten auf die Spermaqualität.............................................................72
4.2.2.1. Motilität..................................................................................................................72
4.2.2.2. Morphologie...........................................................................................................73
4.2.2.3. Zellvolumetrie.........................................................................................................73
4.2.3. Einfluß der Kühlraten auf die Spermaqualität in den untersuchten Temperaturbereichen
.........................................................................................................................75
4.2.3.Motilität......................................................................................................................75
4.2.3.2. Morphologie...........................................................................................................77
4.2.3.3. Zellvolumetrie.........................................................................................................79
4.2.4. Vergeichder Spermaqualität der 4 Programme...........................................................81
4.2.4.1. Motilität..................................................................................................................81
4.2.4.2. Morphologie...........................................................................................................82
4.2.4.3. Zellvolumetrie.........................................................................................................83
5. Diskussion......................................................................................................................86
6. Zusammenfassung .....¦.••¦.........•¦.•¦.¦¦¦•¦¦....•..¦»•¦...¦•..•¦.¦.¦¦..¦..•¦•.¦..••¦.... .........»..».*»•.».. ¦. 99
7. Summary.......................................................................................................................101
8. Literaturverzeichnis.....................................................................................................103
9. Anhang_________________________________________________________124
|
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