Die Bedeutung des evolutionär konservierten ERWNVN-Motivs im Propeptid vom humanen Cathepsin-S für Faltung, Transport, Reifung, Phosphorylierung und die Sezernierung:
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE 1
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
_
I
1. EINLEITUNG
_
2
1. 2 VERBREITUNG UND BEKANNTE FUNKTIONEN VON CATHEPSIN S_2
L 3 SYNTHESE, TRANSPORT UND AKTIVIERUNG IN DER ZELLE_3
1.4 PRIMAERSTRUKTUR DES HUMANEN PROCATHEPSIN S_4
1.5 DAS ZIEL DIESER ARBEIT:_8
2. MATERIALIEN UND METHODEN
_
10
2.1 MATERIALIEN: _
10
2.2 GERAETE 13
2.3. METHODEN _13
3. ERSEBNISS
E
_
23
3.1. MUTAGENESE, SELEKTION, LIGATION UND UMKLONIERUNG DER CDNA-FRAGMENTE
: _25
3.1.1 ERGEBNISSE DER PCR-REAKTIONEN ZUR MUTAGENESE:_27
3.1.2 NICHTEXPONENTIELLE DNA-AMPIIFIKATION_~_30
3.1.3 TEMPLATEVERDAU, LIGATION UND TRANSFORMATION:_31
3.1.4 KONTROLLE DER KORREKTEN INSERTGROESSE, KLONIEREN DER MUTIERTEN CDNA
IN DEN VEKTOR PCDNA3 BZW. 3.1
_32
3.1.5 SEQUENZIERUNG DER CDNA_ 34
3.1.6 KLONIERUNG DER CDNA IN DEN EUKARYOTENEXPRESSIONSVEKTOR_34
3.2 EXPRESSION VON HCS IN 293 ZELLEN _36
3.2.1 NACHWEIS VON HCS IN DEN TRANSFIZIERTEN ZELLEN_38
3.3 UNTERSUCHUNG ZUM ZEITLICHEN VERLAUF VON MODIFIKATIONEN, REIFUNG UND
SEKRETION_45
3.3.1 IMMUNOPRAEZIPITATION VON 35S-MARKIERTEM CATHEPSIN S AUS DEN ZELLEN
UND IN DEN KULTURMEDIEN_45
3.3.2 PHOSPHOYLIERUNGSSTATUS DER HCS-FORMEN_ 51
3.3.3 HCS MIT DEM AUSTAUSCH DES AKTIVEN C139-RESTS WIRD IN DER ZELLE
PROZESSIERT_53
3.5 ZUSAMMENFASSENDE TABELLARISCHE UEBERSICHT DER ERGEBNISSE DER_56
EXPRESSIONMUSTER VON HCS 56
4. DISKUSSION
_'
57
4.1 BEKANNTE FUNKTIONEN DER PROPEPTIDE VON PROTEASEN_57
4.1.1 INHIBITORFUNKTION UND AKTIVIERUNG: _ 57
4.1.2 FUNKTION ALS SORTIERUNGSSIGNAL 58
4.1.3 FUNKTION ALS INTRAMOLEKULARES CHAPERON: _59
4.2 EINORDNUNG DER RESULTATE_^_60
5. LITERATURVERZEICHNIS
_
67
6. ANLASEN
75
6.1 ABKUERZUNGEN:_ 75
6.2 ANLAGE 1 . 76
6.3 ANLAGE 2 77
PUBLIKATIONEN 78
DANKSAGUNG_ 79
SELBSTAENDIGKEITSERKLAERUNG _ 80
LEBENSLAUF_ 81
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