Genetische und molekularbiologische Untersuchungen diffuser Astrozytome:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.2 THEORETISCHER HINTERGRUND 2
1.2.1 HISTORISCHER UEBERBLICK 2
1.2.2 SPEZIFISCHE EIGENSCHAFTEN UND KLASSIFIKATIONEN DIFFUSER
ASTROZYTOME 3
1.3 ONKOGENESE 4
1.4 APOPTOSE ALS EIN ZELLULAERER REGULATIONSMECHANISMUS 4
1.5 ANALYSE CHROMOSOMALER ALTERATIONEN 6
1.5.1 ZYTOGENETISCHE UNTERSUCHUNG 6
1.5.2 MOLEKULARZYTOGENETISCHE METHODEN 6
1.5.3 VALIDITAET UND INTERPRETATION DER GENETISCHEN ANALYSE 7
1.6 GENETISCHE VERAENDERUNGEN BEI ASTROZYTOMEN 7
1.6.1 ONKOGENESE 8
1.6.2 INAKTIVIERUNG VON TUMOR-SUPPRESSOR-GENEN (TSG) 9
2 PROBLEMSTELLUNG 10
3 MATERIAL UND METHODEN 12
3.1 ANALYSE DER BCL2-EXPRESSION AUF PROTEINEBENE 13
3.1.1 ZELLKULTUREN 15
3.1.2 VORBEREITUNG VON WESTEMBLOTTING UND ELISA 15
3.1.3 W ESTEMBLOTTING 17
3.14 BCL2-SANDWICH-IMMUNOASSAY 18
3.2 ANALYSE DER EXPRESSION VON GENEN DER BCL2-FAMILIE AUF MRNA-EBENE 18
3.2.1 TUMORPROBEN UND AUSWERTUNG 21
3.3 GENETISCHE UNTERSUCHUNGEN 26
3.3.1 KULTIVIERUNG IN GEWEBEKULTURFLASCHEN (MONOLAYER) 26
3.3.2 IN-SITU-KULTIVIERUNGSTECHNIK 27
3.3.3 ZYTOGENETISCHE ANALYSE MITTELS GTG-BAENDERUNG 28
II
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.3.4 INTERPHASE-FISH (I-FISH) 29
3.3.5 MULTICOLOR-FISH (M-FISH) 30
3.3.6 SPECTRAL KARYOTYPING (SKY) 32
3.3.7 COMPARATIVE GENOMIC HYBRIDIZATION (CGH) 33
3.3.8 TELOMER-SONDE 3Q 35
3.4 STATISTISCHE BEARBEITUNG 35
4 RESULTATE 36
4.1 BCL2-PROTEINEXPRESSION BEI INTRAKRANIELLEN TUMOREN 36
4.1.1 WESTEMBLOT 36
4.1.2 BCL2-SANDWICH-IMMUNOASSAY 38
4.2 EXPRESSION VON GENEN DER BCL2-FAMILIE AUF MRNA-EBENE 43
4.3 GENETISCHE UNTERSUCHUNGEN 47
4.3.1 ZYTOGENETISCHE ANALYSE 47
4.3.2 INTERPHASE-FISH (I-FISH) 53
4.3.3 MULTICOLOR-FISH (M-FISH) 57
4.3.4 SPECTRAL KARYOTYPING (SKY) 57
4.3.5 COMPARATIVE GENOMIC HYBRIDIZATION (CGH) 58
5 DISKUSSION 60
5.1 BCL2-PROTEINEXPRESSION 60
5.2 EXPRESSION DER GENE DER BCL2-FAMILIE AUF MRNA-EBENE 63
5.3 VERGLEICH DER EXPRESSIONEN DER GENE DER BCL2 - FAMILIE AUF PROTEIN -
65
UND MRNA-EBENE
5.4 GENETISCHE UNTERSUCHUNGEN 66
5.4.1 NUMERISCHE ALTERATIONEN 68
5.4.2 STRUKTURELLE ALTERATIONEN 71
5.4.3 AUSSAGEKRAFT DER ZYTOGENETISCHEN UND MOLEKULARZYTOGENETISCHEN
VERFAHREN 76
5.4.4 HYPOTHESEN ZUR ONKOGENESE VON ASTROZYTOMEN 77
5.4.5 EXPRESSION APOPTOTISCH RELEVANTER GENE UND CHROMOSOMALER
ALTERATIONEN 79
M
SCHLUSSFOLGERUNGEN
LITERATURVERZEICHNIS
ANHANG
THESENPAPIER ZUR HABILITATIONSSCHRIFT |
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