Zellbiologische und molekulargenetische Mechanismen der Tumorentstehung bei Neurofibromatose Typ 1 (NF 1):
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Aachen
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2001
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| adam_text | Mechanismen der Tumorentstehung bei NF1 Inhaltsverzeichnis V
INHALTSVERZEICHNIS
LISTE VERWENDETER ABKÃœRZUNGEN IX
1. EINLEITUNG 1
1.1. Historischer Ãœberblick 1
1.2. Klinik der Neurofibromatose Typ1 5
1.3. Genetische Grundlagen 10
1.4. Neurofibrome 14
1.5. Zielsetzung der vorliegenden Arbeit 17
2. PATIENTEN, MATERIAL UND METHODIK 21
2.1. Untersuchungen an A/ff knockout Mäusen 21
2.1.1. Zucht von Nft knockout Mäusen 21
2.1.2. PCR Bedingungen 21
2.1.3. Herstellung von Zellkulturen aus Dorsalwurzelganglien
von Nff knockout Mäusen 22
2.1.4. Schwannzell Isolation aus embryonalen Dorsalwurzel¬
ganglien von A//7 knockout Mäusen 25
2.1.5. Herstellung von Nervenzellkulturen aus embryonalen
Dorsalwurzelganglien der Ratte 26
2.1.6. Herstellung von primären Ratten Schwannzellkulturen 27
2.1.7. Proliferationsstudien 27
VI Mechanismen der Tumorentstehung bei NF1 Inhaltsverzeichnis
2.1.8. Protein Extraktion aus kultivierten Nfl Schwannzellen
und Po Nachweis durch Western Blot 28
2.1.9. Myelinisierungs Assay 29
2.1.10. Elektronenmikroskopie 31
2.1.11. Herstellung von Fibroblasten Kulturen aus embryonalem
Gewebe von Nft knockout Mäusen 32
2.1.12. Bestimmung der Wachstumsrate von Nf1 Maus
Fibroblasten 32
2.1.13. Herstellung von Co Kulturen aus Neuronen,
Schwannzellen und Fibroblasten 33
2.1.14. Auswertung der Kulturergebnisse 34
2.2. Untersuchungen an Neurofibromen von NF1 Patienten 35
2.2.1. Isolation humaner Schwannzellen von
Multiorganspendern 35
2.2.2. Isolation humaner Schwannzellen aus Neurofibromen
von NF1 Patienten 36
2.2.3. Langzeitkultur humaner Schwannzellen 37
2.2.4. Immunzytochemischer Nachweis kontaminierender
Fibroblasten 38
2.2.5. Proliferationsstudien 39
2.2.6. Proliferation von Neurofibrom Schwannzellen
in Abwesenheit von Wachstumsfaktoren 40
2.2.7. Morphologische und immunzytochemische
Charakterisierung von Neurofibrom Schwannzellen 41
2.2.8. DNA und RNA Extraktion, NF1 Mutationsanalyse 42
2.2.9. Selektive Expansion von NFf ( / ,) Schwannzellen 43
Mechanismen der Tumorentstehung bei NF1 Inhaltsverzeichnis VII
3. ERGEBNISSE 45
3.1. Untersuchungen an A/H knockout Mäusen 45
3.1.1. Proliferationsstudien an A/ft Schwannzellen 45
3.1.2. Untersuchungen zum Einfluß der Neurofibromin
Expression auf die Myelinisierung 50
I. Po Expression in Schwannzellen 50
II. Myelinisierungsstudien 52
III. Ultrastruktureller Aufbau der Myelinscheiden 56
IV. Bestimmung des Axon Durchmessers 58
3.1.3. Untersuchungen zum Einfluß der Neurofibromin
Expression auf Proliferation und Differenzierung
von Fibroblasten 59
I. Proliferationsstudien 59
II. Untersuchung des Organisationsniveaus
gemischtzellulärer Kulturen 61
III. Faszikelbildung und Perineuralzell
differenzierung 64
IV. Elektronenmikroskopische Untersuchungen
zur Perineuralzelldifferenzierung 69
3.2. Untersuchungen an Neurofibromen von NF1 Patienten 73
3.2.1. Isolation und Langzeitkultur humaner Schwannzellen
aus Neurofibromen 73
3.2.2. Proliferationsstudien 77
3.2.3. Überprüfung der Wachstumsfaktor Abhängigkeit von
Neurofibrom Schwannzellen 80
3.2.4. Erste morphologische und immunzytochemische
Charakterisierung von Neurofibrom Schwannzellen 83
3.2.5. Schwannzellen sind die Träger einer somatischen
NF1 Mutation in Neurofibromen 85
3.2.6. Nachweis von zwei unterschiedlichen Schwannzell
VIII Mechanismen der Tumorentstehung bei NF1 Inhaltsverzeichnis
subpopulationen in Neurofibromen 88
3.2.7. Selektive Expansion von humanen NF1(+/ ) und
NF1( / ) Schwannzellen 89
4. DISKUSSION 93
4.1. Das Zusammenspiel verschiedener Zellen bei der
Neurofibrom Entstehung 94
4.2. Nf1 knockout Mäuse als Tiermodell der Neurofibromatose
Typ 1 des Menschen 100
4.3. Die Rolle von Schwannzellen bei der Neurofibrom Entstehung:
Alte Hypothesen, neue Konzepte und therapeutische
Implikationen 104
5. ZUSAMMENFASSUNG 115
6. LITERATURVERZEICHNIS 119
7. ANHANG 133
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