Orale Immunisierung gegen klassische Schweinepest beim Schwarzwild: laborexperimentelle und Feldstudien
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Herdecke
GCA-Verl.
2001
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Autor: Steyer, Heike
Jahr: 2001
Inhaltsverzeichnis
Seite
1. EINLEITUNG 1
2. LITERATUR 3
2.1. Klassische Schweinepest bem Schwarzwild 3
2.1.1. Kurzer historischer Abriß 3
2.1.2. Pathogenese 5
2.1.3. Epidemiologie 8
2.1.3.1. Virusreservoire 8
2.1.3.2. Übertragungswege 9
2.1.3.3. Epidemiologisch relevante Einflußgrößen 11
2.2. Biologie des Wildschweins 13
2.2.1. Verbreitung / Vorkommen 13
2.2.2. Biotop 14
2.2.3. Sozialstruktur 14
2.2.4. Aktionsraum 15
2.2.5. Ernährung 17
2.3. MAßNAHMEN ZUR BEKÄMPFUNG DER KSP 18
2.3.1. Gesetzliche Grundlagen der Bekämpfung 18
2.3.2. orale Immunisierung (o.I.) beim Schwarzwild 20
2.3.2.1. Grundsätzliche Anforderungen an die o.I. 20
2.3.2.2. o.I. außerhalb Deutschlands 22
2.3.2.3. o.I. in Deutschland (mit Ausnahme Mecklenburg-Vorpommern) 23
2.4. Immunisierung des Schwarzwildes in Mecklenburg-Vorpommern 24
2.4.1. Immunisierungs verfahren 24
2.4.2. Impfvirus 27
2.4.3. Köderauslageverfahren 29
2.4.3.1. Handauslage 29
2.4.3.2. Flugauslage 29
2.4.3.3. Köderauslage mit Vorkirrung 30
2.4.3.4. Köderauslage ohne Vorkirrung 31
2.4.4. Köderplatzanzahl und Köderdichte 31
2.4.5. Auslagezeitpunkt 33
3. MATERIAL
3.1. Zellinien 34
3.2. Virusstämme 35
3.3. Chemikalien 35
3.4. Seren und Konjugate 36
3.5. Enzyme 37
3.6. Antibiotika 37
3.7. Lösungen und Puffer 37
3.8. Zellkulturmedien 39
3.9. Testkits 39
3.10. Geräte 39
3.11. Verbrauchsmaterialien 40
4. METHODEN 42
4.1. Feldstudien 42
4.1.1. Untersuchungsgebiet und -Zeitraum 42
4.1.2. Virusgehalt der eingesetzten Impfstoffchargen 44
4.1.3. Immunisierungs verfahren 45
4.1.3.1. Handauslage 45
4.1.3.2. Flugauslage 48
4.1.4. Probengewinnung und-Versand 49
4.2. Laborexperimentelle Studien zur Oralen Immunisierung 50
4.2.1. Versuchstiere 50
4.2.2. Nachweis der Unschädlichkeit der Oralvakzine 50
4.2.2.1. Tiere und Haltungsbedingungen 50
4.2.2.2. Versuchsablauf 50
4.2.3. Untersuchungen zur Ausscheidung von Vakzine- und Challengevirus 51
4.2.3.1. Tiere und Haltungsbedingungen 51
4.2.3.2. Versuchsablauf 51
4.2.4. Untersuchungen zur transplazentaren KSPV-Übertragung
oral vakzinierter Sauen 53
4.2.4.1. Tiere und Haltungsbedingungen 53
4.2.4.2. Versuchsablauf 53
4.3. Angewandte Untersuchungsmethoden 54
4.3.1. Probenaufbereitung 54
4.3.1.1. Herstellung von Organsuspension 54
4.3.1.2. Knochenmarkausstrich 55
4.3.1.3. Vollblutgewinnung 55
4.3.1.4. Buffy coat-Isolierung 55
4.3.1.5. Serumgewinnung 56
4.3.1.6. Nasentupfer 56
4.3.1.7. Kottupfer 56
4.3.1.8. Harnproben 57
4.3.1.9. Kolostrumaufarbeitung 57
4.3.2. KSPV-Nachweis in der Zellkultur 57
4.3.2.1. Zellkultivierung 57
4.3.2.2. Virusvermehrung in PKis-Zellkulturen 58
4.3.2.3. Virusanzüchtung in Mikrotiterplatten (Zellinie PK15) 58
4.3.2.4. Virusanzüchtung in Mikrotiterplatten (Zellinie EFN-R) 59
4.3.3. Nachweissysteme für KSPV bzw. -Antigen 59
4.3.3.1. CHEKIT CSF-Virus IIEUSA 59
4.3.3.2. Indirekter Immunperoxidase-Monolayer-Assay (IPMA) 60
4.3.3.3. Indirekter Immunfluoreszenztest zum KSPV-Nachweis im Knochenmark 61
4.3.3.4. RT-PCR 62
4.3.3.4.1. RNA-Isolierung 62
4.3.3.4.2. Reverse Transkription und Amplifikation 63
4.3.3.4.3. Gelelektrophorese 64
4.3.4. Untersuchung und Beurteilung der eingesandten Wildschweine 65
4.3.5. Nachweis von Antikörpern 68
4.3.5.1. Ceditest CTB (Complex-Trapping-Blocking) CSFV ELISA 68
4.3.5.2. Indirekter Immunfluoreszenztest (KFT) 69
4.4. Statistische Auswertung 70
IV
5. ERGEBNISSE 71
5.1. FELDVERSUCH 0.1. GEGEN KSP BEIM SCHWARZWILD 71
5.1.1. Kirrplatzgröße in den Untersuchungsgebieten 71
5.1.2. Untersuchungsergebnisse auf KSPV-spezifische Antikörper 75
5.1.2.1. Landkreis Ostvorpommern 75
5.1.2.2. Landkreis Güstrow 76
5.1.2.3. Landkreis Müritz 79
5.1.2.4. Landkreis Mecklenburg-Strelitz 81
5.1.2.5. Landkreis Nordvorpommern 84
5.1.2.5.1. Untersuchungsgebiet Forstamt Schuenhagen 84
5.1.2.5.2. Untersuchungsgebiet Darß 84
5.1.2.5.3. Untersuchungsgebiet Hegering Barth 86
5.1.3. Untersuchungsergebnisse auf KSPV bzw.-Artigen 86
5.13.1. Landkreis Ostvorpommern 86
5.1.3.2. Landkreis Güstrow 87
5.1.3.3. Landkreis Müritz 9°
5.1.3.4. Landkreis Mecklenburg-Strelitz 93
5.1.3.5. Landkreis Nordvorpommern 95
5.1.3.5.1. Untersuchungsgebiet Forstamt Schuenhagen 95
5.1.3.5.2. Untersuchungsgebiet Darß 97
5.1.3.5.3. Untersuchungsgebiet Hegering Barth 98
5.1.4. Vergleich verschiedener Detektionssysteme zum Nachweis von KSPV bzw.
-Artigen 101
5.1.5. Darstellung des Streckenanteils der einzelnen Altersklassen in den
Auslagegebieten 102
5.2. Laborexperimentelle Untersuchungen 05
5.2.1. Nachweis der Unschädlichkeit der Oralvakzine 105
5.2.1.1. Klinische Symptome 105
5.2.1.2. KSPV-Nachweis 106
5.2.1.3. Entwicklung der Antikörper 107
5.2.2. Untersuchungen zur Ausscheidung von Vakzine- und Challengevirus 107
5.2.2.1. Klinische Symptome 107
5.2.2.2. Pathologisch-anatomische Befunde 109
5.2.2.3. Nachweis von Impf- bzw. Challengevirus 110
5.2.2.4. Antikörperentwicklung 111
5.2.3. Untersuchungen zur transplazentaren KSPV-Übertragung
oral vakzinierter Sauen 112
5.2.3.1. Untersuchungsergebnisse der Sauen 112
5.2.3.1.1. Klinisches Bild 112
5.2.3.1.2. Ergebnisse der serologischen und virologischen Untersuchung 113
5.2.3.1.3. Pathologisch-anatomische Befunde 113
5.2.3.2. Untersuchungsergebnisse der Ferkel 113
5.2.3.2.1. Klinische Symptome 113
5.2.3.2.2. Pathologisch-anatomische Untersuchungen 114
5.2.3.2.3. Ergebnisse der serologischen und virologischen Untersuchung 115
6. DISKUSSION 119
6.1. Feldversuch o.I. gegen KSP beim Schwarzwild 119
6.1.1. Auswertung der Entwicklung der Seroprävalenz und Virusinzidenz
den einzelnen Untersuchungsgebieten 119
6.1.1.1. Landkreis Ostvorpommern 119
6.1.1.2. Landkreis Güstrow 120
6.1.1.3. Landkreis Müritz 123
6.1.1.4. Landkreis Mecklenburg-Strelitz 125
6.1.1.5. Landkreis Nord Vorpommern 126
6.1.1.5.1. Untersuchungsgebiet Forstamt Schuenhagen 126
6.1.1.5.2. Untersuchungsgebiet Darß 128
6.1.1.5.3. Untersuchungsgebiet Hegering Barth 129
6.1.2. Zusammenfassende Diskussion der Untersuchungsgebiete im Feldversuch
der o.I. des Schwarzwildes 131
6.1.3. Vergleich verschiedener Detektionssysteme zum Nachweis von KSPV bzw.
-Antigen 140
6.2. Laborexperimentelle Untersuchungen 142
6.2.1. Nachweis der Unschädlichkeit der Oralvakzine 142
6.2.2. Untersuchungen zur Ausscheidung von Vakzine- und Challengevirus 144
6.2.3. Untersuchungen zur transplazentaren KSPV-Übertragung
VI
oral vakzinierter Sauen 146
7. ZUSAMMENFASSUNG 150
8. SUMMARY 154
9. LITERATURVERZEICHNIS 157
Anlagen
Danksagung
Lebenslauf
Selbständigkeitserklärung
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