Signaltransduktion im glatten Muskel:
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2001
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| Beschreibung: | Berlin, Humboldt-Univ., Diss., 2001 |
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2
-
1
1NHALTSVERZEICHNIS
1 INHALTSVERZEICHNIS 2
2 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 4
3 VORWORT 5
4 EINLEITUNG 6
4.1 DIE MORPHOLOGIE UND DIE PROTEINE DER MYOFILAMENTE DER GLATTEN
MUSKULATUR 6
4.1.1 AKTIN 7
4.1.2 TROPOMYOSIN 7
4.1.3 CALDESMON 7
4.1.4 CALPONIN 8
4.1.5 CALMODULIN 8
4.1.6 MYOSIN 8
4.1.7 SARKOPLASMATISCHES RETIKULUM 9
4.2 DER MECHANISMUS DER KONTRAKTION DER GLATTEN MUSKULATUR 10
4.2.1 GLEITFILAMENTTHEORIE UND QUERBRUECKENZYKLUS 10
4.3 DIE REGULATION DER KONTRAKTION DER GLATTEN MUSKULATUR 11
4.3.1 DIE PHOSPHORYLIERUNG DER REGULATORISCHEN LEICHTEN KETTEN DES
MYOSINS (LC
2O) 11
4.3.1.1 DIE MYOSIN LEICHTE KETTEN KINASE (MLCK) 11
4.3.1.2 DIE MYOSIN LEICHTE KETTEN PHOSPHATASE (MLCP) 11
4.3.1.3 KOPPLUNG ZWISCHEN LCARPHOSPHORYLIERUNG UND KRAFT 12
4.3.2 AGONISTEN MODULIEREN DIE CA
2+-SENSITIVITAET DER MYOFILAMENTE 14
4.3.3 DIE BETEILIGUNG VON G-PROTEINEN 14
4.3.3.1 HETEROTRIMERE G-PROTEINE 14
4.3.3.2 MONOMERE GTPASEN 15
4.3.4 DER EINFLUSS DER TYROSINPHOSPHORYLIERUNG 16
4.3.4.1 REZEPTOREN MIT TYROSINKINASEAKTIVITAET 17
4.3.4.2 ZYTOPLASMATISCHE TYROSINKINASEN 17
4.4 GRUNDZUEGE DER UNTERSUCHUNG GLATTER MUSKULATUR 17
4.4.1 DER PERMEABILISIERTE MUSKEL 18
4.4.1.1 PERMEABILISIERUNG MIT AE-ESCIN 18
4.4.1.2 PERMEABILISIERUNG MIT AE-TOXIN 19
4.4.2 MOEGLICHKEITEN DER EINFLUSSNAHME AUF DIE MODULATION DER KONTRAKTION
19
4.4.2.1 EXOENZYM C3 AUS C. BOTULINUM 19
4.4.2.2 TOXIN B 20
4.4.2.3 PERTUSSIS TOXIN , 21
5 HERLEITUNG DER AUFGABENSTELLUNG 23
5.1 ZIELPROTEINE DER TYROSINPHOSPHORYLIERUNG 23
5.2 DIE BETEILIGUNG KLEINER G-PROTEINE 24
5.3 BETEILIGUNG PERTUSSISTOXIN SENSITIVER G PROTEINE 25
6 MATERIAL UND METHODEN 27
6.1 ZIELPROTEINE DER TYROSINPHOSPHORYLIERUNG 27
6.1.1 DIE PRAEPARATION DER GLATTEN MUSKULATUR 27
6.1.2 PERMEABILISIERUNG MIT -ESCIN 29
6.1.3 LOESUNGEN FUER PERMEABILISIERTE PRAEPARATE 29
6.1.4 DIE VERSUCHSAPPARATUR 31
6.1.5 DIE GEWINNUNG VON PROBEN IN EINEM DEFINIERTEN AKTIVIERUNGSZUSTAND
32
6.1.6 DIE AUFBEWAHRUNG GEWONNENER PROBEN 33
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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-
3
-
6.1.7 DIE AUFBEREITUNG DER PROBEN 33
6.1.8 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 34
6.1.9 DIE AUFTRENNUNG DER PROBEN MITTELS GELELEKTROPHORESE 35
6.1.10 WESTERNBLOT 37
6.1.11 ANTIKOERPERINKUBATION 37
6.1.11.1 ERSTANTIKOERPERINKUBATION 38
6.1.11.2 ZWEITANTIKOERPERINKUBATION 38
6.1.12 ENHANCED CHEMILUMINESCENCE 38
6.1.13 AUSWERTUNG DER ROENTGENFILME 39
6.2 UNTERSUCHUNGEN MIT EXOENZYM C3 UND TOXIN B 40
6.2.1 DIE PRAEPARATION DER GLATTEN MUSKULATUR 40
6.2.2 PERMEABILISIERUNG MIT -ESCIN 42
6.2.3 VERSUCHSPROTOKOLLE 43
6.2.3.1 DER EINFLUSS VON C3 43
6.2.3.2 DER EINFLUSS VON TOXIN B 44
6.2.3.3 DER EINFLUSS VON C3 UND TOXIN B 45
6.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR ROLLE VON PERTUSSISTOXIN SENSITIVEN G PROTEINEN
46
6.3.1 DIE PRAEPARATION DER GLATTEN LAENGSMUSKULATUR AUS DEM LLEUM VON
RATTEN 46
6.3.2 VERSUCHSPROTOKOLL ~ 46
6.4 STATISTIK 47
6.5 BEZUGSQUELLENNACHWEIS 48
7 ERGEBNISSE 50
7.1 ZIELPROTEINE DER TYROSINPHOSPHORYLIERUNG 50
7.1.1 CHARAKTERISIERUNG DER GLATTMUSKULAEREN PRAEPARATE 50
7.1.2 DIE BESTIMMUNG DER TYROSINPHOSPHORYLIERUNG 52
7.1.3 DIE TYROSINPHOSPHORYLIERUNG VERSCHIEDENER PROTEINE 55
7.2 DIE ROLLE VON RHO BEI DER KONTRAKTION DER A. FEMORALIS 58
7.2.1 CHARAKTERISIERUNG DER GLATTMUSKULAEREN PRAEPARATE 58
7.2.2 DER EINFLUSS VON C3 60
7.2.3 DER EINFLUSS VON TOXIN B 62
7.2.3.1 DER EINFLUSS VON TOXIN B AUF INTAKTE PRAEPARATE 62
7.2.3.2 DER EINFLUSS VON TOXIN B AUF PERMEABILISIERTE PRAEPARATE 63
7.2.4 ZUSAMMENFASSUNG DER EINZELNEN ERGEBNISSE 67
7.3 BETEILIGUNG PERTUSSISTOXIN SENSITIVER G PROTEINE 67
7.3.1 DER EINFLUSS VON PERTUSSISTOXIN 69
8 DISKUSSION 72
8.1 CHARAKTERISIERUNG DER UNTERSUCHUNGSMODELLE 72
8.2 ZIELPROTEINE DER TYROSINPHOSPHORYLIERUNG 74
8.3 DIE BEDEUTUNG VON RHO FUER DER KONTRAKTION VON ARTERIEN 79
8.3.1 WIRKUNG VON TOXIN B UND C3 AUF DIE SUBMAXIMALE, CA
2+-AKTIVIERTE KRAFT 80
8.3.2 DER EINFLUSS VON TOXIN B UND C3 AUF DIE PHENYLEPHRIN INDUZIERTE
CA2+-SENSITIVIERUNG 81
8.4 UNTERSUCHUNGEN ZUR ROLLE VON PERTUSSISTOXIN SENSITIVEN G PROTEINEN
86
9 ZUSAMMENFASSUNG 88
10 LITERATURVERZEICHNIS 91
11 T ABELLARISCHER LEBENSLAUF 102
12 DANKSAGUNG 103
13 ERKLAERUNG AN EIDES STATT
104 |
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