In-vitro-Produktion von Schweineembryonen: Studien zu deren Verwendbarkeit für den Gentransfer
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
2.
LITERATURUEBERSICHT
2.1
IN
VITRO
MATURATION
3
2.2
IN
VITRO
FERTILISATION
7
23
IN
VITRO
KULTUR
10
2.4
HAUPTPROBLEME
BEI
DER
IN
VITRO
PRODUKTION
VON
SCHWEINEEMBRYONEN
2.4.1
BILDUNG
DES
MAENNLICHEN
VORKEMS
12
2.4.2
POLYSPERMIE
15
2.4.3
FRAGMENTATION
20
23
ULTRASTRUKTURUNTERSUCHUNG
ZUR
QUALITAETSBEURTEILUNG
VON
EMBRYONEN
24
2.6
ERSTELLUNG
TRANSGENER
TIERE
2.6.1
VORKEMINJEKTION
(PI)
26
2.6.2
RETROVIREN
ALS
VEKTOREN
29
2.6.3
SPERMIENVERMITTELTER
GENTRANSFER
32
2.6.4
EMBRYONALE
STAMMZELLEN
UND
KLONIERUNG
34
2.7
EMBRYOTRANSFER
BEIM
SCHWEIN
36
3.
MATERIAL
UND
METHODE
3.1
IN
VITRO
PRODUKTION
VON
SCHWEINEEMBRYONEN
3.1.1
GEWINNUNG
DER
SCHLACHTHOFOVARIEN
38
3.1.2
GEWINNUNG
DER
EIZELLEN
AUS
DEN
SCHLACHTHOFOVARIEN
38
3.1.3
REIFUNG
DER
EIZELLEN
38
3.1.4
VORBEREITUNG
DER
EIZELLEN
FUER
DIE
BEFRUCHTUNG
39
3.1.5
VORBEREITUNG
DES
EBERSPERMAS
FUER
DIE
BEFRUCHTUNG
39
3.1.6
BEFRUCHTUNG
DER
EIZELLEN
40
3.1.7
KULTUR
DER
EMBRYONEN
40
INHALTSVERZEICHNIS
3.2 PRODUKTION
DER
EX
VIVO
SCHWEINEEMBRYONEN
41
3.3
BEURTEILUNG
DER
REIFUNG
DER
EIZELLEN
UND
ENTWICKLUNG
DER
EMBRYONEN
3.3.1
MORPHOLOGISCHE
BEURTEILUNG
41
3.3.2
ORCEIN-FAERBUNG
42
3.3.3
HOECHST-FAERBUNG
43
3.4 BESTIMMUNG
DER
ULTRASTRUKTUR
VON
SCHWEINEBLASTOZYSTEN
43
3.5 MIKROINJEKTION
DER
EMBRYONEN
3.5.1
VORBEREITUNG
DER
IVF-EMBRYONEN
44
3.5.2
TECHNIK
DER
MIKROINJEKTION
45
3.6
TRANSFER
DER
EMBRYONEN
3.6.1
VORBEREITUNG
DER
EMPFAENGERSAUEN
45
3.6.2
TECHNIK
DES
ENDOSKOPISCHEN
EMBRYOTRANSFERS
46
3.6.3
TRAECHTIGKEITSUNTERSUCHUNG
47
3.7 UNTERSUCHUNG
DER
FERKEL
AUF
INTEGRATION
DES
KONSTRUKTES
MITTELS
POLYMERASE
CHAIN
REACTION
47
3.8
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
48
4.
VERSUCHSAUFBAU
4.1 REIFUNG
VON
SCHWEINEEIZELLEN
50
4.2 VERSUCHE
ZUR
POLYSPERMIE
50
4.3 UNTERSUCHUNGEN
ZUR
IN
VITRO
KULTUR
VON
IN
VITRO
PRODUZIERTEN
SCHWEINEEMBRYONEN
51
4.3.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ULTRASTRUKTUR
VON
IN
VITRO
PRODUZIERTEN
SCHWEINEEMBRYONEN
52
4.4 MIKROINJEKTION
VON
IN
VITRO
PRODUZIERTEN
SCHWEINEEMBRYONEN
53
4.5
IN
VITRO
KULTUR
DER
INJIZIERTEN
UND
NICHT
INJIZIERTEN
EMBRYONEN
55
4.6
EMBRYOTRANSFER
DER
INJIZIERTEN
EMBRYONEN
56
5.
ERGEBNISSE
5.1
REIFUNG
VON
SCHWEINEEIZELLEN
57
5.2
VERSUCHE
ZUR
POLYSPERMIE
60
INHALTSVERZEICHNIS
53
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
IN
VITRO
KULTUR
VON
IN
VITRO
PRODUZIERTEN
SCHWEINEEMBRYONEN
63
5.3.1
UNTERSUCHUNG
DER
ULTRASTRUKTUR
VON
IN
VITRO
PRODUZIERTEN
SCHWEINEEMBRYONEN
66
5.4
MIKROINJEKTION
VON
IN
VITRO
PRODUZIERTEN
SCHWEINEEMBRYONEN
70
55
IN
VITRO
KULTUR
DER
INJIZIERTEN
UND
NICHT
INJIZIERTEN
EMBRYONEN
5.5.1
IN
VITRO
KULTUR
DER
INJIZIERTEN
UND
NICHT
INJIZIERTEN
EINZELLER
73
5.5.2
IN
VITRO
KULTUR
DER
KONTROLLGRUPPEN
76
5.5.3
IN
VITRO
KULTUR
DER
INJIZIERTEN
FRAGMENTIERTEN
UND
NICHT
INJIZIERTEN
FRAGMENTIERTEN
EMBRYONEN
79
5.5.4
IN
VITRO
KULTUR
DER
INJIZIERTEN
POLYSPERMEN
EMBRYONEN
80
5.5.5
VERGLEICH
DER
IN
VITRO
ENTWICKUNG
DER
INJIZIERTEN
EMBRYONEN
UND
DER
KONTROLLGRUPPEN
81
5.6
EMBRYOTRANSFER
DER
INJIZIERTEN
EMBRYONEN
84
6.
DISKUSSION
6.1
REIFUNG
VON
SCHWEINEEIZELLEN
85
6.2
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
POLYSPERMIE
87
63
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
IN
VITRO
KULTUR
VON
IN
VITRO
PRODUZIERTEN
SCHWEINEEMBRYONEN
90
6.3.1
UNTERSUCHUNG
DER
ULTRASTRUKTUR
VON
IN
VITRO
PRODUZIERTEN
SCHWEINEEMBRYONEN
95
6.4 MIKROINJEKTION
VON
IN
VITRO
PRODUZIERTEN
SCHWEINEEMBRYONEN
97
65
IN
VITRO
KULTUR
DER
INJIZIERTEN
UND
NICHT
INJIZIERTEN
EMBRYONEN
6.5.1
IN
VITRO
KULTUR DER
INJIZIERTEN
UND
NICHT
INJIZIERTEN
EINZELLER
100
6.5.2
IN
VITRO
KULTUR
DER
KONTROLLGRUPPEN
105
6.5.3
IN
VITRO
KULTUR
DER
INJIZIERTEN
FRAGMENTIERTEN
UND
NICHT
INJIZIERTEN
107
FRAGMENTIERTEN
EMBRYONEN
6.5.4
IN
VITRO
KULTUR DER
INJIZIERTEN
POLYSPERMEN
EMBRYONEN
108
6.5.5
VERGLEICH
DER
IN
VITRO
ENTWICKUNG
DER
INJIZIERTEN
EMBRYONEN
UND
DER
KONTROLLGRUPPEN
110
6.6
EMBRYOTRANSFER
DER
INJIZIERTEN
EMBRYONEN
111
INHALTSVERZEICHNIS
7.
ZUSAMMENFASSUNG
113
8.
SUMMARY
115
9.
LITERATURVERZEICHNIS
117
10.
MEDIEN
UND
LOESUNGEN
158 |
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