Infektionen mit den equinen Herpesviren des Typs 1 und 4 (EHV-1 und EHV-4) beim Pferd: Impfung, Abortgeschehen und Diagnostik
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2001
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| adam_text | Titel: Infektionen mit den equinen Herpesviren des Typs 1 und 4 (EHV-1 und EHV-4) beim Pferd
Autor: Schröer, Ulrike
Jahr: 2001
Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Einleitung 9
1.1. Problemstellung 26
2. Material und Methoden 28
2.1. Materialnachweis 28
2.2. Probengewinnung 29
2.2.1. Patientengut 29
2.2.2. Blut 29
2.2.3. Gewebe 29
2.2.4. Tupfer 29
2.3. Immunisierung der Pferde 30
2.4. Zellkultur 30
2.5. Virusvermehrung 31
2.6. Virustitration 32
2.7. Serologische Tests 32
2.7.1. Neutralisationstest (NT) 33
2.7.2. Indirekter Immunfluoreszenztest (IFT) 33
2.8. Isolierung von equinen peripheren Blutmonozyten (PBMC) 34
2.9. Aufbereitung von Tupfern 35
2.10. DNA-Isolierung 35
2.10.1. DNA-Isolierung aus PBMC, Tupfern und Milchproben 35
2.10.2. DNA-Isolierung aus Gewebeproben 36
2.11. Polymerase Kettenreaktion (PCR) 37
2.12. Analytische Gelelektrophorese 38
2.13. DNA-Sondenmarkierung mit Digoxigenin-dUTP 39
2.14. Dot Blot zur Überprüfung der Digoxigenin-markierten Sonde 40
2.15. Zytozentrifugation 41
2.16. in-situ Hybridisierung 42
2.17. Abortdiagnostik 44
2.17.1. Abklatschpräparat 44
2.17.2. Virusanzucht 45
2.17.3. Reinigung und Isolierung von Virus-DNA 45
2.17.4. Restriktionsenzymanalyse (REA) 47
Seite
2.17.5. Southern Blot 48
2.17.6. Southern Hybridisierung 49
3. Ergebnisse 52
3.1. Untersuchung von sechs Warmblutpferden eines geschlossenen 52
Bestandes auf EHV-1/-4 vor und nach der Impfung mit
Resequin® plus
3.1.1. Anamnese und klinische Untersuchung 53
3.1.2. Serologische Untersuchungen 53
3.1.3. Molekularbiologische Untersuchungen 55
3.2. Untersuchungen von Vollblutpferden in einem Gestüt auf 56
EHV-1 und EHV-4
3.2.1. Serologische und molekularbiologische Untersuchung von 123 57
Vollblutstuten in einem Gestüt vor und nach der Impfung mit
Resequin® plus, während der Trächtigkeit und im peripartalen
Zeitraum
3.2.2. Nachweis von EHV-1 zum Geburtszeitpunkt und kurz 71
postpartum - eine Fallbeschreibung
3.3. Abortdiagnostik 75
3.3.1. Untersuchung der Gewebe abortierter Fohlen auf EHV-11-4 76
mittels Abklatschpräparat, Virusanzucht und PCR
3.3.2. Spezifizierung der isolierten Virusstämme mittels Restriktions- 80
enzymanalyse und Southern Hybridisierung
3.3.3. Untersuchung der Blutproben von Mutterstuten abortierter Fohlen 84
3.4. Untersuchung von post-mortem Gewebe 86
3.4.1. Detektion von EHV-1 bei experimentell infizierten Pferden mittels 86
PCR, in-situ Hybridisierung, Immunhistochemie und Virusisolation
a) Untersuchungsergebnisse des Animal Health Trust 88
b) eigene Untersuchungen 89
3.4.2. Detektion von EHV-1 und EHV-4 bei natürlich infizierten Pferden 101
mittels PCR
4. Diskussion 108
4.1. Untersuchungen an Warm-und Vollblütern nach der Impfung 108
mit Resequin® plus
Seite
4.1.1. Humorale Immunantwort 108
4.1.2. Nachweis von EHV-1 Genom in den peripheren 110
Blutmonocyten (PBMC) nach Impfung mit Resequin® plus
4.2. Serologie und Nachweis von EHV-1 Genom während der 111
Trächtigkeit, im peripartalen Zeitraum und im Abortfal!
4.3. Beurteilung der Abortdiagnostik 115
4.4. Detektion von EHV-1 und EHV-4 in post mortem Geweben 118
4.4.1. Untersuchungen zum Zelltropismus und Infektionsweg von 118
EHV-1 beim EHV-1 induzierten Abort an Geweben experimentell
infizierter Pferde
4.4.2. Untersuchungen zum Gewebetropismus von EHV-1/-4 in 120
Geweben natürlich infizierter Pferde
5. Zusammenfassung/Summary 123
6. Literaturverzeichnis 127
7. Anhang 148
A 1 Ergebnisse der Blutuntersuchungen der Stuten der Tierklinik 149
für Fortpflanzung
A 2 Ergebnisse der Untersuchung der Gewebe abortierter Fohlen 152
mittels Abklatschpräparat, Virusanzucht und PCR
A 3 Ergebnisse der Blutuntersuchungen der Vollblutstuten während 153
der Untersuchung 1996/97 (Gruppe 1)
A 4 Ergebnisse der Blutuntersuchungen der Vollblutstuten während 159
der Untersuchung 1997/98 (Gruppe 2)
A 5 Ergebnisse der Blutuntersuchungen der Stute V29 161
B Liste der eigenen Veröffentlichungen 162
C Danksagung 163
D Lebenslauf 164
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