Genetische Charakterisierung maligner lipomatöser Tumoren:
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2
SEITE
1. EINLEITUNG 5
1.1. REGULATION DES ZELLZYKLUS 5
1.1.1. DIE KONTROLLPUNKTE 5
1.1.2. APOPTOSE 6
1.1.3. TRANSKRIPTIONSFAKTOREN/ONKOGENE 7
1.1.4. ZYKLINE UND ZYKLIN-ABHAENGIGE KINASEN (CDK) 10
1.1.5. CDK-INHIBITOREN 'YY 10
1.1.6. T UMORSUPPRESSORGENE 11
1.2. TELOMERE UND TELOMERASEAKTIVITAET IN TUMOREN 14
1.2.1. TELOMERSTRUKTUR UND FUNKTION 14
1.2.2. TELOMERASEAKTIVITAET UND IHRE REGULATION 16
1.3. LIPOMATOESE TUMOREN 18
1.3.1. KLASSIFIKATION MALIGNER LIPOMATOESER TUMOREN _ 19
1.3.2. GRADUIERUNG MALIGNER LIPOMATOESER TUMOREN 21
1.3.3. THERAPIE 22
1.3.4. ZYTOGENETISCHE DIAGNOSTIK 23
1.4. ZIELSTELLUNG 24
2. MATERIAL UND METHODEN 26
2.1. UNTERSUCHUNGSGUT 26
2.2. MOLEKUIARGENETISCHE STANDARDTECHNIKEN 31
2.2.1. DNA-PRAEPARATION 31
2.2.2. RNA-PRAEPARATION 31
2.2.3. PCR 32
2.2.4. REVERSE TRANSKRIPTIONS-PCR 32
2.2.5. SSCP 33
2.2.6. SEQUENZIERUNG 33
2.3. NACHWEIS VON ALTERATIONEN IN TUMORSUPPRESSORGANEN 34
2.3.1. MUTATIONSANALYSE (P53, P16) 34
2.3.2. LOH-ANALYSE (P53, RB, P16) 35
2.4. NACHWEIS VON GENAMPLIFIKATIONEN 36
2.4.1. SOUTHERN BLOTTING (MDM2) 36
2.4.2. DOT BLOT (MDM2, C-MYC) 37
2.4.3. SEMIQUANTITATIVE PCR (C-MYC) 37
2.4.4. DIFFERENTIELLE PCR (MDM2) 37
2.5. BESTIMMUNG VON GENEXPRESSION 38
2.5.1. DIFFERENTIELLE RT-PCR (C-MYC, P53) 38
2.5.2. SEMIQUANTITATIVE RT-PCR (MDM2, HTRT, HTR, TP-1) 39
2.6. TELOMERLAENGEN UND TELOMERASEAKTIVITAET 41
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3
SEITE
2.6.1. DNA-FINGERPRINTING ZUM NACHWEIS VON TELOMERIAENGEN 41
2.6.2. NICHTRADIOAKTIVER TRAP-ASSAY ZUR BESTIMMUNG DER
TELOMERASEAKTIVITAET 41
2.7. NACHWEIS DER TRANSLOKATION T(12;16) 43
2.7.1. MOLEKULARGENETISCHER NACHWEIS UEBER RT-PCR 43
2.7.2. KLASSISCHE ZYTOGENETIK 44
V
2.8. P53-LMMUNHISTOCHEMIE 45
2.9. STATISTISCHE VERFAHREN 45
3. ERGEBNISSE 47
3.1. CHROMOSOMALE UMBAUTEN 47
3.1.1. TRANSLOKATION T(12;16) IN MYXOIDEN LIPOSARKOMEN _ 47
3.1.1.1. ANALYSE UEBER RT-PCR ' 48
3.1.1.2. ZYTOGENETISCHE ANALYSE 50
3.1.2. ZYTOGENETISCHE BEFUNDE DER UEBRIGEN LIPOSARKOME 52
3.1.3. DISKUSSION 53
3.2. INAKTIVIERUNG VON TUMORSUPPRESSORGENEN IN DER TUMORIGENESE VON
LIPOSARKOMEN 57
3.2.1. P53/ P16 - MUTATIONEN 57
3.2.1.1. P16-MUTATIONSFREQUENZ 57
3.2.1.2. P53-MUTATIONSFREQUENZ, MUTATIONSSPEKTRUM UND MUTATIONSTYPEN 57
3.2.1.3. KORRELATION MIT KLINISCH-PATHOLOGISCHEN FAKTOREN 61
3.2.1.4. P53-ALTERATIONEN UND IHRE PROGNOTISCHE BEDEUTUNG 62
3.2.1.5. DISKUSSION 65
3.2.2. LOESS OF HETEROZYGOSITY IN TUMORSUPPRESSORGENEN 72
3.2.2.1. P53/RB/P16-LOH - FREQUENZ, ALLELOTYPISIERUNG 73
3.2.2.2. KORRELATION MIT KLINISCH-PATHOLOGISCHEN FAKTOREN 74
3.2.2.3. KORRELATION VON P53-MUTATIONEN, P53-LOH UND P53-EXPRESSION 75
3.2.2.4. DISKUSSION 76
3.3. AKTIVIERUNG VON ONKOGENEN IN DER TUMORIGENESE VON LIPOSARKOMEN 81
3.3.1. GENAMPLIFIKATIONEN 81
3.3.1.1. MDM2/C-MYC - HAEUFIGKEIT 81
3.3.1.2. KORRELATION MIT KLINISCH-PATHOLOGISCHEN FAKTOREN 82
3.3.2. GENEXPRESSION 82
3.3.2.1. MDM2/C-MYC/P53 - HAEUFIGKEIT 82
3.3.2.2. KORRELATION MIT KLINISCH-PATHOLOGISCHEN FAKTOREN 85
3.3.3. KOEXPRESSION VON ONKOGENEN 86
3.3.4. DISKUSSION 88
3.4. TELOMERLAENGEN UND TELOMERASEAKTIVITAET IN LIPOSARKOMEN 93
3.4.1. BESTIMMUNG DER TELOMERLAENGEN (TRF) UND VERGLEICH DER DNA-
FINGERPRINT-MUSTER
93
3.4.1.1. TRF-KORRELATION MIT KLINISCH-PATHOLOGISCHEN PARAMETERN 94
4
SEITE
3.4.1.2. VERAENDERUNGEN DES DNA-FINGERPRINTMUSTERS VON LIPOSARKOMEN NACH
HYBRIDISIERUNG MIT MULTILOCUS-PROBEN 96
3.4.2. TELOMERASEAKTIVITAET IN LIPOSARKOMEN 97
3.4.2.1. HAEUFIGKEIT TELOMERASE-POSITIVER LIPOSARKOME 97
3.4.2.2. KORRELATION MIT KLINISCH-PATHOLOGISCHEN FAKTOREN 99
3.4.2.3. REGULATIONSMECHANISMEN 101
3.4.2.4. DISKUSSION 103
\
3.5. MOLEKULARGENETISCHE UNTERSUCHUNGEN NACH MIKRODISSEKTION 109
4. ZUSAMMENFASSENDE DISKUSSION 114
4.1. ABERRATIONEN IN ZELLZYKLUSGENEN ALS MOLEKULARE MARKER FUER
TUMORPROGRESSION IN LIPOSARKOMEN - KREBS DES FETTGEWEBES ALS
STOERUNG DES ZELLZYKLUS? 114
4.2. TUMORIGENESE DER LIPOSARKOME AM MODELL DER ZELLULAERETLSENESZENZ
UND IMMORTALISIERUNG 124
5. ZUSAMMENFASSUNG 131
6. ANHANG 134
6.1. LISTE DER KLINISCH-PATHOLOGISCHEN UND GENETISCHEN ORIGINALDATEN 134
6.2. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 137
6.3. VERZEICHNIS DER PRIMER, LOESUNGEN, PUFFER UND CHEMIKALIEN 138
6.4. LITERATURVERZEICHNIS 142
6.5. ERKLAERUNG DES VERFASSERS ZUR SELBSTAENDIGKEIT DER ARBEIT 164
6.6. DANGSAGUNG 165 |
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