Polymerase-Kettenreaktion (PCR): das Methodenbuch
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| Language: | German |
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Heidelberg [u.a.]
Spektrum, Akad. Verl.
2001
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| Item Description: | 2. Aufl. u.d.T.: Müller, Hans-Joachim: PCR - Polymerase-Kettenreaktion |
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HANS-JOACHIM MULLER POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) DAS METHODENBUCH
SPEKTRUM AKADEMISCHER VERLAG HEIDELBERG BERLIN INHALTSVERZEICHNIS
DANKSAGUNG V VORWORT VII 1 EINLEITUNG 1 1.1 PRINZIP DER
POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 1 1.2 DNA-POLYMERASEN 3 1.3 PCR-PUFFER 4
1.4 MGCL 7 UND MGSO 4 4 1.5 NUCLEOTIDE 4 1.6 PCR-BESCHLEUNIGER 5 1.7
INHIBITOREN 5 1.8 OLIGONUCLEOTIDE 6 1.9 PCR-MATNZE 7 1.10
PCR-THERMOCYCLER 7 LITERATUR 8 2 ALLGEMEINE PCR-PARAMETER 9 2.1
REAKTIONSANSATZE 9 2.2 THERMOCYCLER-PROFILE 10 2.3 PCR-KONTAMINATIONEN
10 2.4 PCR-KONTROLLEN 10 2.5 ALLGEMEINES TROUBLESHOOTING 11 3 PCR ALS
DETEKTIONSMETHODE 13 3.1 EINLEITUNG 13 3.2 SENSITIVITAT 13 3.3
DNA-POLYMERASEN 14 4 PCR ALS KLONIERUNGSMETHODE 15 4.1 LESEGENAUIGKEITEN
15 4.2 PROOFREADING-POLYMERASEN 16 LITERATUR 17 5 PCR FUR DIE
STANDARD-KLONIERUNG 18 5.1 VORBEREITUNG DER PCR-AMPLIRLKATE FUR DEN
RESTRIKTIONSVERDAU 18 5.2 RESTRIKTIONSVERDAU 19 5.2.1 HYDROLYSE DES
PCR-AMPLIFIKATES 19 5.2.2 HYDROLYSE DES VCKTORS 19 5.2.3
DEPHOSPHORYLIERUNG DES VEKTORS 19 5.2.4 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 20 5.3
LIGATION 21 5.3.1 STICKY-END-LIGATION 21 5.3.2 BLUNT-END-LIGATION 22 M
INHALTSVERZEICHNIS 5.4 TRANSFORMATION VON BAKTERIEN 23 5.4.1 HERSTELLUNG
CACL 2 -KOMPETENTER E.COLI-ZELLEN 23 5.4.2 TRANSFORMATION 23 5.4.3
ANALYSE REKOMBINANTER KLONE 24 5.4.3.1 UBERIMPFEN DER UBERNACHTKULTUREN
25 5.4.3.2 MINI-PLASMIDPRAPARATION 25 5.4.3.3 RESTRIKTIONSVERDAU DER
ISOLIERTEN PLASMIDE 26 LITERATUR 26 6 T/A-CLONING 27 6.1 HERSTELLUNG DER
PCR-FRAGMENTE 28 6.2 LIGATION DES PCR-FRAGMENTES MIT EINEM T-VEKTOR 28
6.3 ANFUGEN VON A- ODER T-UBERHANGEN AN LINEARISIERTE DNA-FRAGMENTE 29
LITERATUR 30 7 LIGASEUNABHANGIGE KLONIERUNG (LIC) 31 7.1 GENERIERUNG DER
5-UBERHANGE 32 7.1.1 3'-EXONUCLEASEHYDROLYSE DES LIC-VEKTORS 32 7.1.2
3'-EXONUCLEASEHYDROLYSE DES PCR-PRODUKTES 32 7.2 HYBRIDISIERUNG DER
KOMPATIBLEN ENDEN 32 LITERATUR 33 8 UNG-KLONIERUNG 34 8.1 GENERIERUNG
DER 3'-UBERHANGE 35 8.2 HYBRIDISIERUNG DER KOMPATIBLEN ENDEN 35
LITERATUR 36 9 SURF-KLONIERUNG 37 LITERATUR 38 10 MEGAPRIME-PCR 39 10.1
AMPLIFIKATION DES GENSPEZIFISCHEN FRAGMENTES A 40 10.2 AMPLIFIKATION DES
FRAGMENTES B 41 10.3 REINIGUNG DER PCR-PRODUKTE 41 10.4 VERSCHMELZUNG
DER PCR-FRAGMENTE A UND B 42 LITERATUR 42 11 RT-PCR 43 11.1
ZWEIPUFFER-RT-PCR 44 11.2 EINPUFFER-RT-PCR 45 11.2.1 AMV UND T 11.2.2
TY/I-DNA-POLYMERASE 47 11.2.2.1 ZWEISCHRITT/EINPUFFER-RT-PCR 47 11.2.2.3
EINSCHRITT/EINPUFFER-RT-PCR 48 LITERATUR 50 12RACE-PCR 51 12.1 RT-PCR
DES 3'-ENDES 52 12.2 RT-PC:R DES 5'-ENDES 54 12.3 ANFUGEN CINES
POLY(DG)- ODER POLY(DT)-LMKERS 55 12.4 HERSTELLUNG DES
FULL-LENGTH-PCR-FRAGMENTES 56 LITERATUR 56 INHALTSVERZEICHNIS 13
QUANTITATIVE PCR 57 13.1 HERSTELLUNG VON QPCR-STANDARDS 58 13.2
DURCHFUHRUNG DER QPCR 59 13.3 AUSWERTUNG DER QPCR 60 LITERATUR 60
14REAL-TIME-PCR 61 14.1 TAQMAN*-SYSTEM 63 14.2 MOLECULAR-BEACONS-SYSTEM
65 14.3 SCORPIONS "'-SYSTEM 67 14.4 FRET*-SYSTEM 69 14.5
SYBRGREEN*-DETEKTION 71 LITERATUR 73 15 COLONY-PCR 74 LITERATUR 75 16
PCR ZUR MUTATIONSANALYSE 76 16.1 AUFFINDEN VON MUTATIONEN 76 16.2
HERSTELLEN VON MUTANTEN 78 LITERATUR 79 17 NESTED-PCR 80 LITERATUR 82 18
DOP-PCR 83 LITERATUR 85 19ALU-(IRS)-PCR 86 LITERATUR 88 20
PCR-OPTIMIERUNG 89 20.1 HOTSTART-PCR 89 20.2 GRADIENTEN-PCR 92 20.3
TOUCHDOWN-PCR 92 20.4 EINSATZ VON DMSO UND FORMAMID 93 20.5
PUFFEROPTIMIERUNGEN 95 20.5.1 PUFFEROPTIMIERUNG OHNE GRADIENTEN-PCR 95
20.5.2 PUFFEROPTIMIERUNG MIT GRADIENTEN-PCR 97 LITERATUR 99 21
1-SEKUNDEN-PCR 100 LITERATUR 103 22 LONG-DISTANCE-PCR 104 LITERATUR 106
23 GENOMTYPISIERUNG MIT DER PCR 107 23.1 RAPD-PCR 107 23.2 HLA-KLASSE
II-TYPISIERUNG 109 23.3 ARMS-PCR 111 23.4 MULTIPLEX-PCR 114 LITERATUR
116 INHALTSVERZEICHNIS 24 DIFFERENTIAL-DISPLAY-PCR 117 24.1
FESTPHASEN-CDNA-SYNTHESE 119 24.1.1 KOPPLUNG DER OLIGONUCLEOTIDE AN DIE
POLYSTYRENE-PARTIKEL 119 24.1.2 ISOLIERUNG DER POLYA-RNA 119 24.1.3
CDNA-SYNTHESE 120 24.2 DURCHFUHRUNG DER DIFFERENTIAL-DISPLAY-PCR 121
24.3 ANALYSE DER ERHALTENEN DD-PCR-AMPLIFIKATE 122 24.4 BLOTTING-ANALYSE
122 LITERATUR 124 ABKURZUNGEN 125 FIRMENVERZEICHNIS 128
INTERNET-ADRESSEN RUND UM DIE PCR 130 INDEX 131 |
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