Die Kontrolle von Morphogenese und Zellpolarität in Epithelien von Drosophila melanogaster:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
|
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
ALLGEMEINE
EINLEITUNG.
.
1
II.
DIE REGULATION
DER
SERRATE-EXPRESSION
.
4
2.1
EINLEITUNG
.
4
2.1.1
DER
GRUNDLEGENDE
MECHANISMUS
DER
MUSTERBILDUNG
.
4
2.1.2
DIE
ANLAGE
DER
IMAGINALSCHEIBEN
IN
DROSOPHILA.
.
S
2.1.3
DIE
SIGNALPROZESSE
ENTLANG
DER
ANTERO-POSTERIOREN
GRENZE
.
6
2.1.4
DIE
SIGNALPROZESSE
ENTLANG
DER
DORSO-VENTRALEN
GRENZE
.
7
2.1.5
DIE
INDUKTION
DER
PROXIMO-DISTALEN
ACHSE
.
9
2.1.6
SERRATE
IST
EIN
MITGLIED
DER
DSL-PROTEMFAMILIE
.
9
2.1.7
SERRATE
IST
IM
EMBRYO
UND
IN
IMAGINALSCHEIBEN
EXPRIMIERT
.
11
2.1.8
DER
VERLUST
VON
SERRATE
HAT
PLEIOTROPE
EFFEKTE
.
12
2.1.9
AUFGABENSTELLUNG
.
14
2.2
ERGEBNISSE
.
15
2.2.1
DIE
IDENTIFIZIERUNG
CIS-REGULATORISCHER
ELEMENTE
DES
GENS
SERRATE
.
15
2.2.2
CIS-REGULATORISCHE
ELEMENTE
DER
EXPRESSION
IM
EMBRYO
.
17
2.2.3
CIS-REGULATORISCHE
ELEMENTE
FUER
DIE
LARVALE
EXPRESSION.
.
19
2.2.4
NUR
DAS
GENOMISCHE
FRAGMENT
II-9.5
SPIEGELT
EIN
ENDOGENES
SERRATE-EXPRESSIONSMUSTER
WIDER
.
21
2.2.5
DER
DWR
REFLEKTIERT
FRUEHE
ASPEKTE
DER
SERRATE-EXPRESSION
.
23
2.2.6
DIE
INDUKTION
DES
DWR
IST
ABHAENGIG
VON
APTEROUS
.
24
2.2.7
DIE
UEBEREXPRESSION
VON
APTEROUS
IM
EMBRYO
IST
LETAL
.
27
2.2.8
DELTA
ABER
NICHT
FRINGE,
BEEINFLUSST
DIE
DWR-EXPRESSION
.
29
2.2.9
AN
DER
REPRESSION
DES
DWR
SIND
NUBBIN
UND
HIIRAGI
BETEILIGT.
32
2.2.10
IN
NUB
1
SIND
DWR
UND
SERRATE-EXPRESSION
MODULIERT
.
33
2.2.11
DER
HRG*
1
-
UND
SER^-PHAENOTYP
HABEN
EINE
AEHNLICHE
URSACHE.
.
35
2.2.12
ZUR
RETTUNG
DURCH
EINE
DWR-GAL4-AKTIVATORLINIE
.
37
2.3
DISKUSSION
.
40
2.3.1
ZUR
METHODE
DER
FACZ-REPORTERGENKONSTRUKTE
.
40
2.3.2
DIE
ISOLIERUNG
VON
REGULATORELEMENTEN
FUER
DIE
EMBRYONALE
EXPRESSION
IST
VOLLSTAENDIG
.
42
2.3.3
NEUE
REGULATORELEMENTE
FUER
AUGEN
UND
BEINEXPRESSION
.
43
2.3.4
DER
DWR
ENTHAELT
REGULATORELEMENTE
DER
FRUEHEN
SERRATE
EXPRESSION
.
44
2.3.5
APTEROUS
IST
EIN
GENERELLER
AKTIVATOR
DES
DWR
.
46
2.3.6
DIE
UEBEREXPRESSION
VON
APTEROUS
FUHRT
ZU
INTERESSANTEN
PHAENOTYPEN
.
47
2.3.7
DIE
AUFREGULIERUNG
DES
DWR
AN
DER
D/V
GRENZE
IST
DELTA-ABHAENGIG
.
48
2.3.8
NUBBIN
SCHWAECHT
DAS
SERRATE-SIGNAL
AB.
.
50
2.3.9
IN
HRG
P1
-MUTANTEN
WIRD
DER
DWR
AUCH
VENTRAL
AKTIVIERT
.
51
2.3.10
ZUR
HERSTELLUNG
DER
DWR-GAL4-AKTIVATORLINIE
.
5
2
2.3.11
EIN
MODELL
FUER
DIE
REGULATION
DER
FRUEHEN
SERRATE-EXPRESSION.
.
52
2.4
ZUSAMMENFASSUNG
.
54
III.
DIE CHARAKTERISIERUNG
DES
STARDURT-LOKUS
.
56
3.1
EINLEITUNG
.
56
3.1.1
EPITHELZELLEN
SIND
ENG
ASSOZIIERT
UND
POLAR
AUFGEBAUT
.
56
3.1.2
ZELLPOLARITAET
BESITZT
IN
EPITHELZELLEN
MEHRERE
ASPEKTE
.
57
3.1.3
ZELL-ZELL-KONTAKTSTRUKTUREN
HABEN
DIVERSE
AUFGABEN
.
57
3.1.4
TIGHT
JUNCTIONS
DIENEN
ALS
PERMEABILITAETSBARRIEREN
.
58
3.1.5
HAFTVERBINDUNGEN
MACHEN
EPITHELIEN
ZU
STRUKTURELLEN
EINHEITEN
.
58
3.1.5
GAP
JUNCTIONS
ERMOEGLICHEN
ZELL-ZELL-KOMMUNIKATION.
.
59
3.1.7
IN
DROSOPHILA
GIBT
ES
PRIMAERE
UND
SEKUNDAERE
EPITHELIEN.
.
60
3.1.8
DROSOPHILA
BESITZT
ANDERE
ZELL-ZELL-VERBINDUNGEN
ALS
VERTEBRATEN
.
60
3.1.9
DIE
BILDUNG
DER
ZA
IN
DROSOPHILA
ERFOLGT
SCHRITTWEISE
.
61
3.1.10
SIND
CRUMBS
UND
STARDUST
ELEMENTE
EINES
SIGNALWEGES?
.
61
3.1.11
DIE
ZYTOPLASMATISCHE
DOMAENE
VON
CRUMBS
IST
FUNKTIONELL
BEDEUTSAM
.
62
3.1.12
BAZOOKA
TRAEGT
ZUR
ERHALTUNG
APIKO-BASALER
POLARITAET
BET
.
63
3.1.13
DIE
KLONIERUNG
VON
STARDUST
-
WAS
BISHER
GESCHAH.
.
64
3.1.14
AUFGABENSTELLUNG.
.
65
3.2
ERGEBNISSE
.
66
3.2.1
DIE
MOLEKULARE
KARTIERUNG
DES
STARDUST-LOKUS.
.
66
3.2.2
DIE
ANALYSE
DER
CDNA
C2.3
.
69
3.2.3
DIE
ANALYSE
DER
CDNA
C0.35
.
71
3.2.4
DIE
LETALE
P-ELEMENT-LINIE
463
IST
EIN
SMRDUSL-ALIEL
.
73
3.2.5
C12.1
FAELLT
IN
DAS
INSERTIONSFRAGMENT
ALLER
P-ELEMENTE
.
78
3.2.6
CPDZL
KODIERT
FUER
EIN
PROTEIN
MIT
PDZ-DOMAENE
.
80
3.2.7
AUSSCHALTUNG
VON
PDZ1
DURCH
RNAI
FUEHRT
ZU
EINEM
SDF
-PHAENOTYP.
.
84
3.2.8
DIE
HERSTELLUNG
EINES
PDZL-SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS
.
86
3.2.9
ZUR
ISOLIERUNG
WEITERER
CDNA'S
DES
STARDUST-LOKUS
.
87
3.2.10
IST
STARDUST
EIN
MITGLIED
DER
MAGUK-PROTEINFAMILIE?
.
88
3.2.11
MAGUK1
UND
CRUMBS-TRANSKRIPT
SIND
AEHNLICH
EXPRIMIERT
.
91
3.2.12
DAS
MAGVK1
-TRANSKRIPT
WIRD
ALTERNATIV
GESPLEISST
.
93
3.2.13
ZUR
IN
WTRO-TRANSKRIPTION/TRANSLATION
VON
CMAGVKL
.
94
3.2.14
MAGUK1
UND
CRUMBS
INTERAGIEREN
IM
HEFE-ZWEI-HYBRID
SYSTEM
.
95
3.2.15
C01B7.4
UND
C01B7.5:
DIE
STARDUST-ORTHOLOGEN
AUS
C.
ELEGANS?
.
96
3.2.16
EIN
VERGLEICH
ALLER
ISOLIERTEN
CDNA'S
.
99
3.3
DISKUSSION
.
102
3.3.1
DER
STARDUST-LOKUS
IST
KOMPLEX
ORGANISIERT
.
102
3.3.2
DIE
CPDZJ-CDNA:
DURCH
RNAI
EIN
GUTER
KANDIDAT
FUER
STARDUST
.103
3.3.3
HINWEISE
DAFUER,
DASS
CMAGVKL
DAS
STARDUST-GEN
REPRAESENTIERT
.106
3.3.4
CPDZL
UND/ODER
CMAGVKL
=
STARDUST
1
!
.
111
3.3.5
EIN
KURZER
BLICK
IN
DIE
ZUKUNFT
.
113
3.4
ZUSAMMENFASSUNG
.
115
IV.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
116
4.1
CHEMIKALIEN
UND
SONSTIGE
MATERIALIEN
.
116
4.1.1
BAKTERIENSTAEMME
.
117
4.1.2
VEKTOREN,
COSMIDE
UND
GENOMISCHE
K-PHAGEN.
.
117
4.1.2.1
VEKTOREN
.
117
4.1.2.2
COSMIDE
.
118
4.1.2.3
GENOMISCHE
X-PHAGEN
.
119
4.1.3
CDNA
UND
GENOMISCHE
BANKEN.
.
119
4.1.3.1
CDNA-BANKEN
.
119
4.1.3.2
GENOMISCHE
BANKEN
.
120
4.1.4
OLIGONUKLEOTIDE
.
120
4.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
122
4.2.1
HERSTELLUNG
ELEKTROKOMPETENTER
BAKTERIEN
.
122
4.2.2
TRANSFORMATION
ELEKTROKOMPETENTER
BAKTERIEN
.
123
4.2.3
ISOLIERUNG
VON
DNA
.
123
4.2.3.1
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
.
123
4.2.3.2
PRAPARATION
VON
COSMID-DNA
.
124
4.2.3.3
PRAPARATION
VON
PHAGEN-DNA
.
125
4.2.3.4
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
DROSOPHILA
.
125
4.2.4
ISOLIERUNG
VON
RNA
.
126
4.2.4.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
.
126
4.2.4.2
ISOLIERUNG
VON
POLYA
+
-RNA
.
127
4.2.5
SICHTEN
VON
CDNA
UND
GENOMISCHEN
BANKEN
.
127
4.2.5.1
SICHTEN
VON
PLASMID-CDNA-BANKEN.
127
4.2.5.2
SICHTEN
VON
GENOMISCHEN/CDNA-PHAGEN-BANKEN
.
128
4.2.6
SOUTHERN-TRANSFER
.
129
4.2.6.1
SOUTHERN-TRANSFER
VON
GENOMISCHER
DNA
.
129
4.2.6.2
SOUTHEM-T
RANSFER
VON
PLASMID-DNA
(
'QUICK-BLOT').
130
4.2.7
NORTHERN-TRANSFER
.
130
4.2.8
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-SONDEN
.
131
4.2.9
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
RNA-SONDEN
.
131
4.2.10
HYBRIDISIERUNG
UND
AUTORADIOGRAPHIE
.
131
4.2.10.1
HYBRIDISIERUNG
VON
DNA-SONDEN
.
132
4.2
10.2
HYBRIDISIERUNG
VON
RNA-SONDEN
.
132
4.2.11
PCR
(POLYMERASE-KETTENREAKTION)
.
132
4.2.11.1
STANDARD-PCR
.
133
4.2.11.2
RT-PCR
.
133
4.2.11.3
573
'-RACE
.
134
4.2.12
PLASMID-RESCUE
.
135
4.2.12.1
PRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
.
136
4.2.12.2
RESTRIKTIONSSPALTUNG
GENOMISCHER
DNA
.
136
4.2.12.3
LIGATION
UND
TRANSFORMATION
IN
KOMPETENTE
BAKTERIEN
.
136
4.2.13
DIE
HERSTELLUNG
DER
VERWENDETEN
PLASMID-KONSTRUKTE
.
137
4.2.13.1
DAS
DWR-GAL4-AKTIVATORKONSTRUKT
.
137
4.2.13.2
DAS
V-1.9-GAL4-AKTIVATOIKONSTRUKT.
138
4.2.13.3
DAS
PUAS-AP-EFFEKTORICONSTRUKT
.
138
4.2.13.4
DIE
AZCZ-REPORTERGENKONSTRUKTE
PC
AB
W
-II-3
.6
UND
PCAB
70
-H-5.9
.
138
4.2.13.5
DIE
KONSTRUKTE
PACT2-CAFAG(7AE7
UND
PGBT9-CRH
LOM
ZUR
EXPRESSION
IN
DER
HEFE
.
139
4.3
MIKROMANIPULATION
VON
DROSOPHILA
MELANOGASTER.
.
141
4.3.1
KEIMBAHNTRANSFORMATION
.
141
4.3.1.1
HERSTELLUNG
DES
INJEKTIONSMIXES.
141
4.3.1.2
HERSTELLUNG
DER
INJEKTIONSKAPILLAREN
.
141
4.3.1.3
MIKROINJEKTION
.
142
4.3.1.4
ISOLIERUNG
UND
BALANCIERUNG
TRANSGENER
FLIEGEN
.
143
4.3.2
RNAI
(RNA-INTERFERENZ)
.
143
4.3.2.1
HERSTELLUNG
DER
DSRNA
MITTELS
PCR
.
143
4.3.2.2
MIKROINJEKTION
.
144
4.3.2.3
KUTIKULAPRAEPARATION
.
144
4.4
GENETISCHE
METHODEN
.
145
4.4.1
FLIEGENZUCHT
.
145
4.4.2
FLIEGENSTAEMME,
CHROMOSOMEN
UND
ALLELE
.
145
4.4.2.1
BALANCER-CHROMOSOMEN
.
145
4.4.2.2
MUTANTE
FLIEGENSTAEMME
.
146
4.4.2.3
ZOCZ-REPORTERLINIEN
.
147
4.4.2.4
GAL4-AKTIVATORLINIEN
.
148
4.4.2.5
UAS-EFFEKTORLINIEN
.
149
4.4.3
DAS
GAL4/UAS-SYSTEM
.
149
4.5
HISTOLOGISCHE
METHODEN
.
151
4.5.1
VERWENDETE
ANTIKOERPER
.
151
4.5.2
ANTIKOERPERFAERBUNG
AN
EMBRYONEN
.
152
4.5.3
ANTIKOERPERFARBUNG
AN
IMAGINALSCHEIBEN.
.
.153
4.5.3.1
NACHWEIS
MIT
EINEM
HRP-GEKOPPELTEN
ANTIKOERPER
.
153
4.5.3.2
IMMUNOFLUORESZENZ
.
154
4.5.4
X-GAL-FAERBUNG
AN
EMBRYONEN
.
.154
4.5.5
X-GAL-FAERBUNG
AN
IMAGINALSCHEIBEN
.
.155
4.5.6
IN
SITA-HYBRIDISIERUNG
AN
EMBRYONEN
.
.155
4.5.6.1
DNA/RNA
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG.
156
4.5.6.2
RNA/RNA
IN
SIM-HYBRIDISIERUNG
.
157
4.5.7
IN
SITA-HYBRIDISIERUNG
AN
IMAGINALSCHEIBEN.
.
158
4.5.8
BRDUE-FAERBUNG
AN
IMAGINALSCHEIBEN
.
158
4.5.9
PRAEPARATION
EMBRYONALER
KUTIKULA
.
159
4.6
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
.
160
4.6.1
ERZEUGUNG
EINES
PDZL-SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS.
.
160
4.6.1.1
HERSTELLUNG
DES
PDZL-GST-FUSIONSPROTEINS
.
160
4.6.1.2
IMMUNISIERUNG
VON
RATTEN
MIT
DEM
PDZ1-GST-
FUSIONSPROTEIN
.
162
4.6.2
ERZEUGUNG
EINES
MAGUKL-SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERS.
.
162
4.6.3
HERSTELLUNG
VON
EMBRYONENEXTRAKTEN
.
163
4.6.4
SDS-PAGE-GELELEKTROPHORESE
UND
WESTERN-BLOTTING
.
163
4.6.5
IN
VFRRO-TRANSKRIPTIONS-/TRANSLATIONSREAKTION
.
164
V.
LITERATUR
.
165
VI.
ANHANG
.
179
6.
1
ABKUERZUNGEN
.
179
6.2
SEQUENZEN
.
180
6.2.1
DIE
NUKLEOTIDSEQUENZ
VON
C0.35
.
180
6.2.2
DIE
NUKLEOTIDSEQUENZ
DES
400BP-RESCUE-FRAGMENTES
.
180
6.2.3
DIE
NUKLEOTIDSEQUENZ
DER
3KB-RESCUE-FRAGMENTE
.
180
6.2.3.1
DIE
NUKLEOTIDSEQUENZ
DES
3KB-RESCUE-FRAGMENTES(T3)
.
180
6.2.3.2
DIE
NUKLEOTIDSEQUENZ
DES
3KB-RESCUE-FRAGMENTES(T7)
.
181
6.2.4
DIE
NUKLEOTIDSEQUENZ
DER
CDNA
CL2.1
.
181
6.2.5
DIE
NUKLEOTIDSEQUENZ
DES
ESTS:200F9T
.
182
6.2.6
DER
ORF
DES
ESTS:200F9S
.
182
6.2.7
DIE
PROTEINSEQUENZ
VON
C01B7.5
.
183
6.2.8
DIE
SEQUENZANALYSE
VON
CPDZL/3'RACE
.
183
6.2.8.1
DER
ORF
VON
CPDZL/3'NCE
.
183
6.2.8.2
EIN
SEQUENZVERGLEICH
VON
PDZ1
MIT
C01B7.5
.
185
6.2.9
DIE
PROTEINSEQUENZ
VON
C01B7.4
.
185
6.2.10
DIE
PROTEINSEQUENZ
VON
PALSL
.
186
6.2.11
DIE
SEQUENZANALYSE
VON
CMAGVKL
.
.
186
6.2.11.1
DER
ORF
VON
CMAGUKL
.
186
6.2.11.2
EIN
SEQUENZVERGLEICH
DER
PDZ-DOMAENEN
VON
MAGUK1
UND
PALSL
.
192
6.2.11.3
EIN
SEQUENZVERGLEICH
DER
SH3-DOMAENEN
VON
MAGUK1
UND
PALSL
.
192
6.2.11.4
EIN
SEQUENZVERGLEICH
DER
GUKC-DOMAENEN
VON
MAGUK1
UND
PALSL
.
193
6.2.11.5
EIN
SEQUENZVERGLEICH
DER
PDZ-DOMAENEN
VON
MAGUK1
UND
C01B7.4
.
193
6.2.11.6
EIN
SEQUENZVERGLEICH
DER
SH3-DOMAENEN
VON
MAGUK1
UND
C01B7.4
.
193
6.2.11.7
EIN
SEQUENZVERGLEICH
DER
GUKC-DOMAENEN
VON
MAGUK1
UND
C01B7.4
.
194 |
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