Struktur- und Funktionsanalyse muriner 7D-Cadherin-Gene:
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2000
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IN
INHALTSVERZEICHNIS
TITEL
I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
~
VI
1
EINLEITUNG
1
1.1
FUNKTION
DER
ZELLADHAESION
IN
MULTIZELLULAEREN
ORGANISMEN
1
1.2
ZELLADHAESIONSMOLEKUELE
2
13
CADHERINE
5
1.4
ORGANISATION
DER
CADHERIN-GENE
9
13
7D-CADHERINE
11
1.6
LI-CADHERIN-EXPRESSION
13
1.7
ZIELSETZUNG
17
2
MATERIAL
UND
METHODEN
18
2.1
MATERIAL
18
2.1.1
GERAETE
.
18
2.1.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
18
2.1.3
REAGENTIEN
.
19
2.1.4
HAEUFIG EINGESETZTE PUFFERLOESUNGEN
UND
MEDIEN
.
20
2.1.5
ENZYME
.
20
2.1.6
REAKTIONSKITS
.
21
2.1.7
ANTIKOERPER
.
21
2.1.8
OLIGONUKLEOTIDE
.
21
2.1.9
GROESSEN-ZMOLEKULARGEWICHTSSTANDARDS
FUER
NUKLEINSAEUREN
UND
PROTEINE
.
22
2.1.10
PLASMID-VEKTOREN UND
DNA-BIBLIOTHEKEN
.
22
2.1.11
BAKTERIENSTAEMME
UND
ZELLINIEN
.
23
23
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
24
2.2.1
DNA-REINIGUNG
.
24
2.2.2
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
.
25
2.2.3
REINIGUNG VON
MARKIERTER
DNA
.
25
2.2.4
NUKLEINSAEURE-GELELEKTROPHORESE
.
26
2.2.5
RESTRIKTIONSENDONUKLEASE-VERDAU
VON
DNA
.
27
2.2.6
5'-DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA
.
28
2.2.7
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
28
2.2.8
LIGATION
VON
DNA
.
34
2.2.9
E.
COZI-TRANSFORMATION
.
34
2.2.10
ERSTELLEN
VON KOMPETENTEN
BAKTERIENZELLEN
.
36
2.2.11
ANLEGEN
VON
BAKTERIEN-GEFRIERKULTUREN
.
37
2.2.12
AUSPLATTIEREN
VON
LAMBDA-PHAGEN
.
37
2.2.13
DNA
PRAEPARATIONEN
AUS
BAKTERIEN
UND
PHAGEN
.
38
2.2.14
GESAMT-RNA-ISOLIERUNG
AUS
GEWEBE
.
40
2.2.15
ISOLIERUNG
VON
POLY(A)
+
-RNA
.
41
2.2.16
QUANTIFIZIERUNG VON
NUKLEINSAEUREN
.
41
2.2.17
5
'
-
UND
3'-RACE-PCR-REAKTION
.
42
2.2.18
RADIOAKTIVE MARKIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
.
42
2.2.19
PRIMER-EXTENSION
.
42
2.2.20
DNA-SEQUENZIERUNG
NACH
SANGER
ET
AL.
(1977)
.
43
2.2.21
HERSTELLUNG
DIGOXIGENIN-MARKIERTER
NUKLEINSAEUREN
.
44
IV
2.2.22
HYBRIDISIERUNGEN
.
47
2.2.22.1
SOUTHERN-BLOT
.
47
2.2.22.2
PLAQUE-HYBRIDISIERUNG
.
48
2.2.22.3
PI
UND
COSMTD-HYBRIDISIERUNG
.
49
2.2.22.4
NORTHERN-BLOT
.
49
2.2.23
DETEKTION
VON
DIG-MARKIERTEN
NUKLEINSAEURESONDEN
.
50
23
PROTEINCHEMISCHE
UND
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
51
2.3.1
HERSTELLUNG
VON
PROTEIN-LYSATEN
AUS
MURINEM
DARMGEWEBE
.
51
2.3.2
HERSTELLUNG
VON
PROTEIN-LYSATEN
AUS
ZELLKULTUREN
.
51
2.3.3
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
PROTEINEN
.
51
2.3.4
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
52
2.3.5
COOMASSIEFAERBUNG
VON
PROTEINEN
.
53
2.3.6
PROTEINTRANSFER
AUF
NITROZELLULOSE-MEMBRANEN
(WESTERN-BLOT)
.
53
2.3.7
PONCEAU-FAERBUNG
VON
PROTEINEN
.
53
2.3.8
IMMUNFAERBUNG
VON
PROTEINEN
AUF
NITROZELLULOSE-MEMBRANEN
.
53
2.4 IMMUNHISTOLOGISCHE
UND
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
54
2.4.1
ZELLKULTUR
VON
DUENNDARMCARCINOMZELLEN
STC-1
.
54
2.4.2
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
.
55
2.4.3
TRANSFEKTION
VON
DUENNDARM-CARCINOMZELLEN
.
55
2.4.4
ANALYSE
DER
GFP-EXPRESSION
.
55
2.4.5
INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ
VON
MURINEN
DUENNDARM-CARCINOMZELLEN
.
56
3
ERGEBNISSE
57
3.1
KLONIERUNG
UND
GENSTRUKTUR
DES
MURINEN
LI-CADHERINS
57
3.1.1
KLONIERUNG
VON LI-CADHERIN-GENBEREICHEN
MIT
HILFE
EINER
LAMBDA-PHAGEN-BIBLIOTHEK.
58
3.1.2
SCREENING
EINER
P
1
-PHAGENBIBLIOTHEK
.
66
3.1.3
VOLLENDUNG
DER
KLONIERUNG
DES
LI-CADHENN-GENS
ANHAND
EINER
COSMID-BIBLIOTHEK
.
70
3.1.4
BESTIMMUNG
DES
TRANSKRIPTIONSSTARTPUNKTES
.
74
3.1.4.1
ISOLIERUNG
VON
MURINER
DARM-RNA
UND
NORTHEM-BLOT
.
74
3.1.4.2
5'-RACE-PCR
.
76
3.1.4.3
PRIMER-EXTENSION
.
78
3.1.4.4
FESTLEGUNG
DES
TRANSKRIPTIONSSTARTPUNKTES
.
81
3.1.5
GENSTRUKTUR
.
82
3.2
INITIALE
CHARAKTERISIERUNG
DES
MURINEN
LL-CADHERIN-PROMOTORS
84
3.2.1
SUBKLONIERUNG
EINES
2,8
KB
PROMOTORBEREICHS
UND
AUFBAU
EINES
REPORTERGENKONSTRUKTS
MITEGFP
.
86
3.2.2
CHARAKTERISIERUNG
EINES
IN
VIRRO-ZELLSYSTEMS
.
88
3.2.3
LL-CADHERIN-PROMOTOR
GESTEUERTE GFP-EXPRESSION
.
90
3.3
KONSTRUKTION
EINES
TARGETING-VEKTORS
91
3.3.1
PRINZIP
EINES
TARGETING-VEKTORS
.
91
3.3.2
AUSWAHL
DES
ZIELBEREICHS
FUER
DEN
TARGETING-VEKTOR
IM
LI-CADHERIN-GEN
.
93
ZUSAMMENBAU
EINES
TARGETING-VEKTORS
FUER
DAS
LI-CADHERIN-GEN
.
96
3.4
KSP-CADHERIN
98
3.4.1
KLONIERUNG
DER
MAUS-KSP-CADHERIN-CDNA
.
98
3.4.2
KLONIERUNG
DER
HUMANEN
KSP-CADHERIN-CDNA
.
98
3.4.3
VERGLEICH
DER
KSP-CADHERIN-AMINOSAEURESEQUENZEN
VERSCHIEDENER
SPEZIES
.
99
3.4.4
KLONIERUNG
DES
MAUS-KSP-CADHERIN-GENS
.
100
3.5
PHYLOGENETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
AN
7D-CADHERINEN
W3
3.5.1
VERGLEICH
DER
LI
UND KSP-CADHERIN-GENSTRUKTUREN
.
103
3.5.2
GENOMISCHE
LOKALISIERUNG
VON
MAUS-LI-UND
KSP-CADHERIN
.
105
V
4
DISKUSSION
108
4.1
GENSTRUKTUR
DES
LI-CADHERINS
110
4.1.1
BESONDERHEITEN
DES
MURINEN
LI-CADHERIN-GENS
.
110
4.1.2
RESUEMEE
DER
ANGEWANDTEN
KLONIERUNGSTECHNIKEN
.
112
4.2
KONSTRUKTION
EINES
LI-CADHERIN-TARGETING-VEKTORS
116
4-3
UNTERSUCHUNG
DES
LL-CADHERIN-PROMOTORS
117
4.3.1
TRANSKRIPTIONSSTARTPUNKT
.
117
4.3.2
FUNKTIONELLER
NACHWEIS
DES
LL-CADHERIN-PROMOTORS
.
118
4.4
KLONIERUNG
DES
KSP-CADHERIN-GENS
121
4.5
PHYLOGENETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
AN
7D-CADHERINEN
123
4.5.1
CHROMOSOMALE
LOKALISIERUNG
DER
7D-CADHERINE
.
123
4.5.2
HERKUNFT
DER
ZUSAETZLICHEN
DOMAENEN
VON
LI
UND
KSP-CADHERIN
.
123
5
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
128
6
SUMMARY
AND
FUTURE
PERSPECTIVES
130
7
LITERATURVERZEICHNIS
132
8
ANHANG
142
VEROEFFENTLICHUNGEN
142
LEBENSLAUF
143'
DANKSAGUNG
144 |
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| spelling | Jung, René 1969- Verfasser (DE-588)122789431 aut Struktur- und Funktionsanalyse muriner 7D-Cadherin-Gene vorgelegt von René Jung 2000 VIII, 144 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Berlin, Freie Univ., Diss., 2001 Maus - Cadherine - Gen - Struktur-Aktivitäts-Beziehung Maus - Cadherine - Genklonierung Maus (DE-588)4169148-9 gnd rswk-swf Struktur-Aktivitäts-Beziehung (DE-588)4183784-8 gnd rswk-swf Gen (DE-588)4128987-0 gnd rswk-swf Cadherine (DE-588)4314135-3 gnd rswk-swf Genklonierung (DE-588)4123275-6 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Maus (DE-588)4169148-9 s Cadherine (DE-588)4314135-3 s Genklonierung (DE-588)4123275-6 s DE-604 Gen (DE-588)4128987-0 s Struktur-Aktivitäts-Beziehung (DE-588)4183784-8 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=009406512&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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