Differenzierung verschiedener Herkünfte des Schwammspinners Lymantria dispar anhand genetischer Polymorphismen und Sensitivitätsuntersuchungen gegenüber Bacillus thuringiensis:
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DIFFERENZIERUNG VERSCHIEDENER HERKUENFTE DES SCHWAMMSPINNERS
LYMANTRIA DISPAR ANHAND GENETISCHER POLYMORPHISMEN UND
SENSITIVITAETSUNTERSUCHUNGEN GEGENUEBER BACILLUS THURINGIENSIS
VON DER GEMEINSAMEN NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET
DER TECHNISCHEN UNIVERSITAET CAROLO-WILHELMINA
ZU BRAUNSCHWEIG
ZUR ERLANGUNG DES GRADES EINER
DOKTORIN DER NATURWISSENSCHAFTEN
(DR. RER. NAT.)
GENEHMIGTE
D I S S E R T A T I ON
VON
ELKE GRASER
AUS BREMERVOERDE
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
I. EINLEITUNG 1
1.1. EPIDEMISCHE AUSBREITUNG VON LYMANTRIA DLSPAR 2
1.2. DIFFERENZIERUNG VON L. OFEPAA-HERKUENFTEN 4
1.3. EINSATZBEREICH VON RAPD-PCR UND ITS-RFLP IM ZUSAMMENHANG
MIT DER DIFFERENZIERUNG VON VERSCHIEDENEN SCHWAMMSPINNER- HERKUENFTEN 5
1.4. ANTAGONISTEN DES SCHWAMMSPINNERS L DISPAR UNTER BESONDERER
BETRACHTUNG DES BIOINSEKTIZIDES BACILLUS THURINGIENSIS 9
1.5. ZIELSETZUNG DER ARBEIT 15
II. MATERIAL UND METHODEN 17
2.1. ORGANISMEN 17
2.1.1. HERKUNFT DER SCHWAMMSPINNER (L DISPAI) 17
2.1.2. ENTWICKLUNGSSTAND DER L. OFEPAA-EINSENDUNGEN 17
2.1.3. KONSERVIERUNG DER L DISPAR-PROBEN 17
2.1.4. BACILLUS THURINGIENSIS 18
2.2. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 18
2.2.1. OLIGONUKLEOTIDE 18
2.2.1.1. RANDOM-PRIMER FUER DIE RAPD-PCR-ANALYSE 18
2.2.1.2. RIBOSOMALE PRIMER 21
2.3. DNA-POLYMERASEN 21
2.4. RESTRIKTIONSENZYME 22
2.5. DNA-PRAEPARATION AUS SCHWAMMSPINNERMATERIAL 22
2.5.1. DNA-PRAEPARATION NACH DELLAPORTA (1983) 23
2.5.2. DNA-PRAEPARATION MIT DEM QIAAMP-TISSUE-KIT
(QIAGEN) 24
IMAGE 3
2.5.3. KONTROLLE DER DNA-QUALITAET ,.,.... 24
2.5.4. LAGERUNG DER DNA 25
2.5.5. KONZENTRATIONSBESTIMMUNG DER DNA-PRAEPARATIONEN 25
2.5.6. GELELEKTROPHORETISCHE TRENNUNG VON DNA 25
2.5.6.1. ELEKTROPHORETISCHE TRENNUNG VON DNA IN
AGAROSEGELEN 25
2.5.6.2. TRENNUNG VON DNA-FRAGMENTEN IN NICHT DENATURIER- ENDEN
POLYACRYLAMID-GELEN 26
2.5.7. SILBERFAERBUNG VON DNA AUS PAA-GELEN 27
2.5.8. RESTRIKTIONSSPALTUNG VON DNA 28
2.5.9. EXTRAKTION VON DNA AUS AGAROSEGELEN 28
2.5.10. PCR-TECHNIKEN 29
2.5.10.1. RAPD-PCR 29
2.5.10.2. SPEZIFISCHE PCR :. 30
2.5.11. AUSWERTUNG DER DNA-FRAGMENTMUSTER 31
2.5.12. ITS-RFLP (INTERNAL TRANSCRIBED SPACER-RESTRICTIOEN
FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM) 32
2.5.13. SSCP (SINGLE STRAND CPNFORMATIPN POLYMORPHISM) 33
2.5.14. DNA-SEQUENZIERUNG 33
2.6. LABORZUCHT VON L DISPAR 33
2.6.1. WEIZENKEIMDIAET ZUR AUFZUCHT VON X. DISPAR -, 34
2.6.2. BONITURDER RAUPEN 36
2.7. APPLIKATION VON B. THURINGIENSIS AUF L. DISPAR 36
2.7.1, MIKROSKOPISCHER NACHWEIS VON B. THURINGIENSIS IN
BEHANDELTEN L OFEPA/RLARVEN ......-.......; 38
2.7.2. HISTOLOGISCHER NACHWEIS VON B. THURINGIENSIS 38
: * ] - . *
ERGEBNISSE 41
3.1. DIFFERENZIERUNG VON SCHWAMMSPINNERHERKUENFTEN ANHAND
GENETISCHER POLYMORPHISMEN , 41
3.1.1. DIFFERENZIERUNG DURCH RAPD-PCR-ANALYSE 41
IMAGE 4
3.1.1.1. HERKUNFT DER SCHWAMMSPINNERPROBEN 41
3.1.1.2. ETABLIERUNG DER DNA-PRAEPARATIONSMETHODEN 42
3.1.1.3. INFORMATIVE PRIMER FUER DIE RAPD-PCR-ANALYSE 44
3.1.1.4. RAPD-FRAGMENTMUSTER UNTERSCHIEDLICH ENG
VERWANDTER SCHWAMMSPINNER 44
3.1.1.5. EINGRENZUNG DES ANWENDUNGSBEREICHES DER
RAPD-PCR 45
3.1.1.6. STATISTISCHE AUSWERTUNG DER RAPD-MUSTER 47
3.1.1.7. CLUSTERANALYSEN 48
3.1.1.8. ABHAENGIGKEIT DER DISTANZEN VON DER ANZAHL
AUSGEWERTETER MERKMALE 48
3.1.1.9. VERGLEICH EUROPAEISCHER UND ASIATISCHER HERKUENFTE.. 50
3.1.1.10. CLUSTERANALYSE EINER WESTRUSSISCHEN VERDACHTS- POPULATION 55
3.1.1.11. CLUSTERANALYSE VON JAPANISCH/EUROPAEISCHEN
HYBRIDEN 58
3.1.2. ERGEBNISSE DER ITS-RFLP-UNTERSUCHUNGEN 59
3.1.2.1. TEILSEQUENZIERUNG DER ITS-REGION VON L. DISPAR
UND DEFINITION VON ARTSPEZIFISCHEN PCR-PRIMERN ... 59
3.1.2.2. SSCP-ANALYSE EINER ZUSAETZLICHEN MAELLL-
RESTRIKTIONSSCHNITTSTELLE 61
3.1.2.3. UNTERSCHEIDUNG VON SCHWAMMSPINNERHERKUENFTEN
DURCH ITS-RFLP- UND SSCP-ANALYSE 63
3.2. UNTERSUCHUNGEN ZUR UNTERSCHIEDLICHEN SENSITIVITAET VERSCHIEDENER
SCHWAMMSPINNERPOPULATIONEN GEGENUEBER B. THURINGIENSIS 69
3.2.1. ETABLIERUNG VON LABORZUCHTEN AUS VERSCHIEDENEN L DISPAR-
HERKUENFTEN 69
3.2.2. VORVERSUCHE ZUR APPLIKATION VON B. THURINGIENSIS AUF
L. D/SPARZUR ENTWICKLUNG EINES WIRKSAMKEITSTESTS 71
3.2.3. UEBERPRUEFUNG DER VITALITAET BEI DEN L DISPAR- NACHZUCHTEN 1997 73
IMAGE 5
3.2.4. OPTIMIERUNG DER APPLIKATIONSTECHNIK UND BESTIMMUNG DER
KEIMZAHL DER B. /.-SPORENSUSPENSION 74
3.2.5. WIRKSAMKEIT VERSCHIEDENER B. /.-KONZENTRATIONEN
AUF L. DISPAR 75
3.2.6. BONITURPARAMETER WAEHREND DER DOSIS-WIRKUNGSANALYSE 76
3:2.7. DOSIS-WIRKUNGSBEZIEHUNG VON B. /.-BEHANDELTEN L DISPAR- LARVEN 78
3.2.8. UEBERPRUEFUNG DER TODESURSACHE 81
3.2.8.1. VERAENDERUNGEN DES DARMEPITHELS UNTER AE/.-EINFLUSS. 83
IV. DISKUSSION 88
4.1. MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR DIFFERENZIERUNG VON
SCHWAMMSPINNEM VERSCHIEDENER HERKUENFTE 88
4.1.1. RAPD-PCR-ANALYSE UND CLUSTERANALYSEN 88
4.1.2. ITS-RFLP-UNTERSUCHUNGEN UND SSCP-ANALYSEN 95
4.2. SENSITIVITAET VON L OFEPAA-HERKUENFTEN GEGENUEBER B. THURINGIENSIS...
100
4.2.1: BEOBACHTUNGEN UND PROBLEME BEI L. OFEPAA-ZUCHTEN 100
4.2.2. AUSSAGEN DER VORVERSUCHE MIT OBERFLAECHIG ANGEWANDTEM
TOXIN 102
4.2.3. AUSSAGEN DER DOSIS/WIRKUNGSVERSUCHE 103- 4.2.4. HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN DER AEA-WIRKUNG:IM
DARMEPITHEL VON L DISPAR 107
4:2.5. SCHLUSSFOLGERUNGEN BEZUEGLICH DER URSACHEN FUER DIE
SCHWAMMSPINNER-MASSENVERMEHRUNG. 1991 -1995 108
V. ZUSAMMENFASSUNG 110
VI. LITERATURVERZEICHNIS 11 2
VII. ANHANG 127
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| spelling | Graser, Elke 1966- Verfasser (DE-588)122781759 aut Differenzierung verschiedener Herkünfte des Schwammspinners Lymantria dispar anhand genetischer Polymorphismen und Sensitivitätsuntersuchungen gegenüber Bacillus thuringiensis von Elke Graser 2000 [6], 126, [11] S. Ill., graph. Darst. : 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Braunschweig, Techn. Univ., Diss., 2000 Polymorphismus (DE-588)4130554-1 gnd rswk-swf Molekulargenetik (DE-588)4039987-4 gnd rswk-swf Bacillus thuringiensis (DE-588)4124942-2 gnd rswk-swf Schwammspinner (DE-588)4180314-0 gnd rswk-swf Hessen - Schwammspinner - China - Bacillus thuringiensis Hessen - Schwammspinner - Tatarstan - Polymorphismus - Molekulargenetik China (DE-588)4009937-4 gnd rswk-swf Tatarstan (DE-588)4314332-5 gnd rswk-swf Hessen (DE-588)4024729-6 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Hessen (DE-588)4024729-6 g Schwammspinner (DE-588)4180314-0 s Tatarstan (DE-588)4314332-5 g Polymorphismus (DE-588)4130554-1 s Molekulargenetik (DE-588)4039987-4 s DE-604 China (DE-588)4009937-4 g Bacillus thuringiensis (DE-588)4124942-2 s GBV Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=009406500&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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