Histochemische und immunzytochemische Lokalisation der neuronalen Stickstoffmonoxidsynthase am Beispiel des Nucleus tegmentalis laterodorsalis der Ratte:
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1
1 EINFUEHRUNG
1.1 STICKSTOFFMONOXID - EIN BIOMOLEKUEL 2
1.2 CHARAKTERISIERUNG DER NEURONALEN STICKSTOFFMONOXIDSYNTHASE 4
1.3 ZUR IDENTITAET VON NEURONALER STICKSTOFFMONOXIDSYNTHASE UND
NEURONALER
NADPH-DIAPHORASE 5
1.4 DER NUCLEUS TEGMENTALIS LATERODORSALIS 6
1.5 FRAGESTELLUNG 6
2 MATERIAL UND METHODEN
2.1 CHEMIKALIEN UND GERAETE 7
2.2 VERSUCHSTIERE _ 8
2.3 PERFUSIONSFIXATION 8
2.4 HERSTELLUNG DER VIBRATOMSCHNITTE 8
2.5 LICHTMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN 9
2.5.1 DIAPHORASE-HISTOCHEMIE 9
2.5.2 IMMUNZYTOCHEMISCHE METHODE 10
2.5.3 KOMBINATION VON ABC-TECHNIK UND BSPT-REAKTION 12
2.6 ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN 12
2.6.1 DIAPHORASE-HISTOCHEMIE 12
2.6.2 IMMUNZYTOCHEMISCHE METHODE 13
2.6.3 KOMBINATION VON BSPT-REAKTION UND ABC-TECHNIK 13
2.6.4 AUFBEREITUNG DER HISTOLOGISCHEN SCHNITTE FUER DIE
ELEKTRONENMIKROSKOPIE 13
2.6.4.1 OSMIERUNG 13
2.6.4.2 DEHYDRATATION UND KONTRASTIERUNG DER SCHNITTE 13
2.6.4.3 FLACHEINBETTUNG 14
2.6.44 ULTRAMIKROTOMIE
1 14
2.6.5 ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG DER BEFUNDE 14
3 ERGEBNISSE
3.1 LICHTMIKROSKOPISCHE DARSTELLUNG DER NEURONALEN STICKSTOFFMONOXID
SYNTHASE IM NUCLEUS TEGMENTALIS LATERODORSALIS 15
3.1.1 HISTOCHEMISCHE DARSTELLUNG DER NADPH-DIAPHORASE 15
3.1.1.1 NBT-REAKTION 15
3.1.1.2 BSPT-REAKTION 15
3.1.1.2.1 EINFLUSS UNTERSCHIEDLICHER BSPT-KONZENTRATIONEN 15
3.1.1.2.2 EINSATZ VON TRITON X-100 ZUR OPTIMIERUNG DER BSPT-REAKTION 15
3.1.2 IMMUNZYTOCHEMISCHE DARSTELLUNG DER NEURONALEN
STICKSTOFFMONOXIDSYNTHASE 16
3.1 3 KOMBINATION VON ABC-TECHNIK UND BSPT-REAKTION 16
3.2 ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE LOKALISATION DER NEURONALEN STICKSTOFF
MONOXIDSYNTHASE 17
3.2.1 HISTOCHEMISCHE DARSTELLUNG DER NADPH-DIAPHORASE IM NUCLEUS
TEGMENTALIS LATERODORSALIS DURCH DIE BSPT-REAKTION 17
3.2.1.1 EINFLUSS UNTERSCHIEDLICHER BSPT-KONZENTRATIONEN AUF DIE NACHWEIS
BARKEIT DER NADPH-DIAPHORASE UND DEREN ZELLULAERE VERTEILUNG 18
3.2.1.2 EINFLUSS DER TRITONKONZENTRATION AUF BSPT-REAKTION UND
STRUKTURERHALTUNG 18
3.2.2 UNTERSUCHUNG BSPT-POSITIVER NEURONE IM CORPUS STRIATUM 19
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.2 IMMUNZYTOCHEMISCHE LOKALISATION DER NEURONALEN STICKSTOFFINONOXID-
SYNTHASE IM NUCLEUS TEGMENTALIS LATERODORSALIS 19
3.2.4 KOMBINATION VON ABC-TECHNIK UND BSPT-REAKTION 20
3.2.5 VARIATION DES VERWENDETEN ANTI-NNOS-ANTIKOERPERS 20
4 DISKUSSION
4.1 VERGLEICH DER TETRAZOLIUMSALZE NBT UND BSPT ZUR DARSTELLUNG DER
NADPH -DIAPHORASE 39
4.2 KOLOKALISATION VON NADPH-DIAPHORASE UND NEURONALER STICKSTOFF-
MONOXIDSYNTHASE AM BEISPIEL DES NUCLEUS TEGMENTALIS LATERODORSALIS 40
4.2.1 FIXATIONSBEDINGTE INAKTIVIERUNG DER NICHT MIT NOS ASSOZIIERTEN
DIAPHORASEAKTIVITAET 41
4.2.2 EINFLUSS UNTERSCHIEDLICHER BSPT-KONZENTRATIONEN AUF DIE HISTO-
CHEMISCHE DARSTELLUNG DER NADPH-DIAPHORASE 43
4.2.3 BEDEUTUNG VON TRITON X-100 FUER DIE BSPT-REAKTION 43
4.2.4 NADPH-DIAPHORASE-AKTIVITAET IM CORPUS STRIATUM 44
4.3 ULTRASTRUKTURELLE LOKALISATION DER NEURONALEN
STICKSTOFFMONOXIDSYNTHASE 44
4.3.1 BSPT-FORMAZAN ALS MARKER EINER MEMBRANAL LOKALISIERTEN
NEURONALEN STICKSTOFFMONOXIDSYNTHASE 45
4.3.2 ZYTOSOLISCH LOKALISIERTES DAB-PRODUKT - ARTEFAKT ODER HINWEIS AUF
EINE ZYTOSOLISCHE FORM DER NEURONALEN STICKSTOFFMONOXIDSYNTHASE ? 46
4.3.3 KOMBINATION VON BSPT-REAKTION UND ABC-TECHNIK 49
4.4 BSPT-FORMAZAN IN GLIAZELLEN UND ENDOTHELZELLEN 49
4.5 SCHLUSSFOLGERUNGEN 50
5 ZUSAMMENFASSUNG
51
6 LITERATURVERZEICHNIS
52
DANKSAGUNGEN
65
ERKLAERUNG NACH PROMOTIONSORDNUNG
66
THESEN
67
DARSTELLUNG DES BILDUNGSWEGES
69 |
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