Untersuchungen zur Rolle von CD8 bei der Aktivierung von gamma-delta-T-Zellen der Ratte:
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INHALT
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG. 4
1.1 NATUERLICHES UND ADAPTIVES IMMUNSYSTEM.4
1.2 AUFGABEN VON T ZELLEN. 6
1.3 THYMISCHE REIFUNG.10
1.4 DIE ANTIGENE DER T ZELLEN.13
1.4.1 MHC-RESTRINGIERTE ANTIGENERKENNUNG VON A/SS T ZELLEN.14
1.4.2
NICHT KLASSISCH MHC-RESTRINGIERTE ANTIGENERKENNUNG VON A/SS T ZELLENLS
1.4.3 DIE ANTIGENERKENNUNG DER Y/OET ZELLEN.16
1.5 T ZELLAKTIVIERUNG.19
1.6 CD4 UND CD8.
R.
.21
1.7 DIE ROLLE VON CD8 BEI DER AKTIVIERUNG VON Y/8 T ZELLEN DER RATTE.24
2 MATERIAL UND METHODEN.27
2.1 MATERIAL.27
2.1.1 VERBRAUCHSMATERIAL.27
2.1.2 CHEMIKALIEN, REAGENZIEN.27
2.1.3 PUFFER UND LOESUNGEN.27
2.1.4 KITS.29
2.1.5 GERAETE.29
2.1.6 SEROLOGISCHE REAGENZIEN UND ZYTOKINE.29
2.1.7 OLIGONUKLEOTIDE. 31
2.1.8
ENZYME.33
2.1.9 VERSUCHSTIERE UND ZELLINIEN.33
2.2 METHODEN.34
2.2.1 ZELLULAERE TECHNIKEN. 34
2.2.1.1 GEWINNUNG VON LYMPHOZYTEN AUS MILZ, LYMPHKNOTEN UND
THYMUS.34
2.2.1.2 ERYTHROZYTENLYSE MIT AMMONIUMCHLORID.34
2.2.1.3 T ZELLREINIGUNG DURCH NYLONWOLLPASSAGE.34
2.2.1.4 REINIGUNG UND AKTIVIERUNG VON T ZELLEN DURCH PANNING.35
2.2.1.5 AKTIVIERUNG VON T ZELLEN MIT PMA UND IONOMYCIN.36
2.2.1.6 REINIGUNG VON CD8ASS UND CD8AA POSITIVEN UND CD8
NEGATIVEN T ZELLEN.37
2.2.1.7 LEBENDZELLZAHLBESTIMMUNG UEBER TRYPANBLAU-AUSSCHLUSS.37
2.2.1.8 ZELLANALYSE IM DURCHFLUSSZYTOMETER.38
1
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALT
2.2.1.9 INTRAZELLULAERE FAERBUNG.38
2.2.1.10 BESTIMMUNG DER ZYTOTOXIZITAET.39
2.2.2
MOLEKULARE TECHNIKEN.40
2.2.2.1 GEWINNUNG VON RNA UND GDNA.40
2.2.2.2 REVERSE TRANSKRIPTION VON RNA.40
2.2.2.3 PCR.40
2.2.2.3.1 KOMPETITIVE PCR.41
2.2.23.2 SEMIQUANTITATIVE PCR.42
2.2.2.4 NOMENKLATUR DER DV-SEGMENTE:.42
2.2.23 KLONIERUNG VON PCR-PRODUKT.42
2.2.2.6 SEQUENZIERUNG. 43
2.2.2.7 SPEKTRATYP-ANALYSEN.43
2.2.2.8 IMMUNPRAEZIPITATION.44
2.2.2.9 IMMUNBLOT.45
2.2.2.10 DETEKTION VON KINASE-AKTIVITAET.46
3 ERGEBNISSE.47
3.1 KOREZEPTOR-EXPRESSION AUF A/SS UND Y/8 T ZELLEN DER MILZ.47
3.2 CD8-VERMITTELTE SIGNALE BEI Y/S T ZELLEN.49
3.2.1 CD8-ASSOZIIERTE P56ICK-KINASEAKTIVITAET.50
3.2.2 CD8-VERMITELTE SIGNALE BEI INTAKTEN Y/8 T ZELLEN.52
3.3 ANALYSE DER CDR3-LAENGEN DER TCR5-KETTEN ALS KRITERIUM FUER
KLASSISCHE MHC-RESTRIKTION.54
3.3.1 DV105 UND ADV7-GENSEGMENTE IN DER RATTENMILZ.54
3.3.1.1 IDENTIFIZIERUNG UND SEQUENZANALYSE VON EINEM DV105- UND
FUENF ADV7-GENSEGMENTEN DER RATTE.54
3.3.1.2 ANALYSE DER DV-PROTEINSEQUENZEN AUF EIN MOTIV FUER DIE
WECHSELWIRKUNG VON CD8 UND TCR.60
3.3.1.3 EXPRESSION DER (A)DV-GENSEGMENTE IN CD8-SUBPOPULATIONEN
VON Y/5 T ZELLEN.61
3.3.2
CDR3-LAENGENVERTEILUNG BEI TCRSS UND TCROE.62
3.3.3 CDR3OE-LAENGEN VON CD8AA UND CD8ASS POSITIVEN SOWIE CD8 NEGATIVEN
Y/8 T ZELLEN.65
3.3.4
CDR38-LAENGENVERTEILUNG BEI Y/8 T ZELLEN VON RATTE UND MAUS.67
3.3.5 CDR3-LAENGENVERTEILUNG VON UNSELEKTIERTEN Y/8 T ZELLEN.67
3.3.6 HAEUFIGKEIT VON ADV7 UND DV105 IN DER RATTENMILZ.71
3.4 MODULATION VON CD8SS NACH AKTIVIERUNG
IN VITRO.72
3.4.1 MODULATION VON CD8SS AUF GEREINIGTEN, CD8ASS POSITIVEN T ZELLEN.72
3.4.2 BEEINFLUSSUNG DER CD8SS MRNA DURCH DIE MODULATION.74
2
INHALT
3.4.3
CD8SS-MODULATION NACH VERSCHIEDENEN AKTIVIERUNGSPROTOKOLLEN.75
3- 4.4 EINFLUSS DER STAERKE DES AKTIVIERUNGSSIGNALS AUF DIE MODULATION.78
3.5 FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG DER CD8-SUBPOPULATIONEN.80
3.5.1 IFN-Y-PRODUKTION.
3.5.2 ZYTOLYTISCHE FAEHIGKEITEN.81
3.5.3 EXPRESSION DER MEMBRANREZEPTOREN CD2, NKR-P1A UND DES IL-15-
REZEPTORS
.82
4 DISKUSSION.87
4.1 VERGLEICH VON CD8 AUF OT/SS UND Y/8 T ZELLEN.87
4- 2 TCR-STUKTURDATEN SPRECHEN GEGEN EINE KLASSISCHE MHC I-RESTRIKTION.
.91
4.3 MODULATION DER CD8SS-KETTENEXPRESSION.94
4.4 DIE MOEGLICHE ROLLE VON CD8 BEI DER AKTIVIERUNG VON Y/8 T ZELLEN DER
RATTE.
5.1 ZUSAMMENFASSUNG.106
5.2 ABSTRACT.108
6 LITERATUR.HO
7 ABKUERZUNGEN.124
8 LEBENSLAUF.126
9 PUBLIKATIONSLISTE.128
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