Eine neue Mangan-Ribonucleotidreduktase: Untersuchungen an dem Enzym aus Bacillus subtilis
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
RIBONUCLEOTIDREDUKTASEN
UND
IHRE
COFAKTOREN
.
1
1.2
GEN
UND
AMINOSAEURESEQUENZEN
DER
RIBONUCLEOTIDREDUKTASEN.
7
1.3
REAKTIONSMECHANISMUS
UND
REGULATION
.
8
1.4.
INHIBITOREN
DER
RIBONUCLEOTIDREDUKTASEN
.
10
1.5.
BACILLUS
SUBTILIS
ALS
UNTERSUCHUNGSOBJEKT
.
12
1.6.
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
14
2.
EXPERIMENTELLER
TEIL
.
16
2.1
ALLGEMEINE
METHODEN
.
16
2.2
KULTUR
UND
AUFSCHLUSS
VON
BACILLUS
SUBTILIS
.
17
2.3
METHODEN
DER
ENZYMANREICHERUNG
.
19
2.3.1
STREPTOMYCINSULFAT-FAELLUNG
.
19
2.3.2
AMMONIUMSULFAT-FAELLUNG
.
19
2.3.3
ACETON-FAELLUNG
.
19
2.4.4
POLYETHYLENGLYKOL-FAELLUNG
.
20
2.3.5
ULTRAFILTRATION
.
20
2.3.6
FAELLUNG
BEI
NIEDRIGER
LONENSTAERKE
.
20
2.3.7
BINDUNG
AN
CM-CELLULOSE
IM
BATCH-VERFAHREN
.
21
2.3.8
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
.
21
2.4
ANALYTISCHE
METHODEN
.
24
2.4.1.
ENZYMTEST
DER
RIBONUCLEOTIDREDUKTASE
MIT
3
H-MARKIERTEN
SUBSTRATEN
.
24
ABBAU
HITZESTABILER
PROTEINE
DURCH
PRONASE
.
25
ABBAU
DER
NUCLEOTIDE
ZU
NUCLEOSIDEN
.
25
HPLC-TRENNUNG
UND
RADIOAKTIVITAETSMESSUNG
.
25
2.4.2
BESTIMMUNG
DES
METALLGEHALTS
MIT
ICP-MS
.
26
2.4.3
KAPILLAR-ELEKTROPHORESE
.
27
3.
ERGEBNISSE
.
28
3.1
METHODEN
DER
ENZYMANREICHERUNG
AUS
ROHEXTRAKTEN
.
28
3.1.1
AMMONIUMSULFAT-FAELLUNG
.
28
3.1.2
ACETON-FAELLUNG
.
29
3.1.3
POLYETHYLENGLYKOL-FAELLUNG
.
29
3.1.4
BEHANDLUNG
MIT
CM-CELLULOSE
.
32
3.1.5
ULTRAFILTRATION
.
33
3.1.6
VERAENDERUNG
DER
LONENSTAERKE
.
34
3.2
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
DER
ENZYMREINIGUNG
.
35
3.2.1
CHROMATOGRAPHIE
AM
ANIONENAUSTAUSCHER
UNO-Q6
.
35
3.2.2
MOLEKULARSIEBCHROMATOGRAPHIE
AN
SUPEROSE
12
.
36
3.2.3
CHROMATOGRAPHIE
AN
RESOURCE
Q
.
37
3.2.4
ZUSAMMENFASSENDE
DARSTELLUNG
DER
VERSCHIEDENEN
REINIGUNGSMETHODEN
.
38
3.3
INHIBITOREN
DER
RIBONUCLEOTIDREDUKTASE
.
40
3.3.1
EDTA
.
40
3.3.2
HYDROXYHARNSTOFF
.
.
.
41
3.4
SUBSTRATSPEZIFITAET
.
42
3.5
ABHAENGIGKEIT
DER
ENZYMAKTIVITAET
VON
WEITEREN
KOMPONENTEN
.
44
3.5.1
EINFLUSS
VON
MAGNESIUMIONEN
.
44
3.5.2
EINFLUSS
VON
COENZYM
B12
.
45
3.5.3
EINFLUSS
DER
PROTEINMENGE
AUF
DIE
ENZYMAKTIVITAET
.
46
3.6
BESTIMMUNG
DES
METALLGEHALTS
DURCH
ICP-MS
.
47
3.7
VERSUCHE
ZUR
VERBESSERUNG
DER
RIBONUCLEOTIDREDUKTASE-ANALYTIK
.
49
4.
DISKUSSION
.
54
4.1.
MANGAN
UND
EISEN
IN
METALLOENZYMEN
.
54
4.2.
MANGAN-RIBONUCLEOTIDREDUKTASEN
(KLASSE
IV)
.
55
4.3
IST
DIE
BACILLUS
SUBT/7/S-RIBONUCLEOTIDREDUKTASE
EIN
MANGANENZYM?
.
57
4.4
PERSPEKTIVEN
.
60
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
61
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
63 |
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