Neue Aspekte der Reaktivität vaskulärer Endothelzellen und Perizyten im Rahmen koagulatorischer und antikoagulatorischer Prozesse: experimentelle Studien in Gewebekulturen
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN
18
2.1
CHEMIKALIEN
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
.
18
2.1.1
ZELLKULTUR
UND
ZELLISOLIERUNG
.
18
2.1.2
MATERIALIEN
FUER
HISTOLOGISCH-MIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
19
2.1.3
MATERIALIEN
FUER
PHOTOMETRISCHE
MESSUNGEN
.
20
2.1.4
REAGENZIEN
ZUR
BESTIMMUNG
VON
GEWEBEFAKTOR-AKTIVITAET
.
20
2.1.5
REAGENZIEN
ZUR
BESTIMMUNG
VON
PROTHROMBINASE-AKTIVITAET
21
2.1.6
REAGENZIEN
ZUR
BESTIMMUNG
VON
GEWEBSPLASMINOGENAKTI
VATOR
.
21
2.2
LOESUNGEN
.
21
2.2.1
LOESUNGEN
FUER
DIE
ZELLKULTIVATION
UND
-ISOLATION
.
21
2.2.2
LOESUNGEN
FUER
HISTOLOGISCH-MIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
23
2.2.3
ANSAETZE
ZUR
BESTIMMUNG
VON
GEWEBEFAKTOR-AKTIVITAET
.
24
2.2.4
ANSAETZE
ZUR
BESTIMMUNG
VON
PROTHROMBINASE-AKTIVITAET
.
.
26
2.2.5
ANSAETZE
ZUR
BESTIMMUNG
VON
GEWEBSPLASMINOGENAKTIVATOR
26
2.3
GERAETE
.
27
2.3.1
ZELLKULTUR
UND
ZELLISOLIERUNG
.
27
2.3.2
MIKROSKOPIE
.
28
2.3.3
PHOTOMETRIE
.
28
2.4
METHODEN
.
28
2.4.1
ISOLIERUNG
MAKROVASKULAERER
ENDOTHELZELLEN
.
28
2.4.2
ISOLIERUNG
MIKROVASKULAERER
ENDOTHELZELLEN
UND
PERIZYTEN
.
30
2.4.3
VERMEHRUNG
DER
ZELLEN
IN
GEWEBEKULTUR
.
32
2.4.4
REINIGUNG
MAKROVASKULAERER
PRIMAERKULTUREN
.
33
INHALTSVERZEICHNIS
II
2.4.5
ANLAGE
STANDARDISIERTER
ZELLKULTUREN
FUER
VERSUCHS
ZWECKE
.
34
2.4.6
KRYOPRAESERVIERUNG
VON
ZELLEN
.
35
2.4.7
ZELLZAHLBESTIMMUNG
.
35
2.4.8
MIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
36
2.4.9
QUANTITATIVER
NACHWEIS
VERSCHIEDENER
PROKOAGULATORISCHER
BZW.
PROFIBRINOLYTISCHER
AKTIVITAETEN
.
37
2.4.10
STATISTIK
.
42
3
ERGEBNISSE
44
3.1
GEWEBEKULTUR
.
44
3.1.1
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
MAKROVASKULAERER
ENDO
THELZELLEN
.
44
3.1.2
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
ENDOTHELZELLEN
UND
PERIZYTEN
AUS
KORONAREN
MIKROGEFAESSEN
.
50
3.1.3
VERBESSERUNG
ALLGEMEINER
ZELLKULTURMETHODIK
.
53
3.2
VORBEREITUNGEN
FUER
GERINNUNGSANALYTISCHE
VERSUCHE
.
55
3.3
BESTIMMUNG
FUNKTIONELL
WIRKSAMER
GEWEBEFAKTORAKTIVITAETEN
.
57
3.3.1
MESSUNGEN
IN
PERIZYTENKULTUREN
.
57
3.3.2
MESSUNGEN
IN
KULTUREN
VON
ENDOTHELZELLEN
MAKROVASKULAE
REN
URSPRUNGS
.
66
3.3.3
BESTIMMUNG
DER
GEWEBEFAKTORAKTIVITAET
IN
KULTUREN
VON
ENDOTHELZELLEN
MIKROVASKULAEREN
URSPRUNGS
.
68
3.4
BESTIMMUNG
FUNKTIONELL
WIRKSAMER
PROTHROMBINASE-AKTIVITAETEN
.
71
3.4.1
MESSUNGEN
IN
PERIZYTENKULTUREN
.
71
3.4.2
MESSUNGEN
IN
KULTUREN
VON
ENDOTHELZELLEN
MAKROVASKULAE
REN
URSPRUNGS
.
71
3.5
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
VON
FREIEM
PLASMINOGENAKTIVATOR
DES
GEWEBETYPS
.
75
3.5.1
MESSUNGEN
IN
ENDOTHELKULTUREN
.
75
3.5.2
MESSUNGEN
IN
PERIZYTENKULTUREN
.
78
4
DISKUSSION
79
4.1
ISOLIERUNG,
IDENTIFIZIERUNG
UND
ZUECHTUNG
VON
ENDOTHELZELLEN
UND
PERIZYTEN
.
79
INHALTSVERZEICHNIS
III
4.2
BETRACHTUNGEN
ZUR
EINGESETZTEN
GERINNUNGSANALYTIK
.
81
4.2.1
VORZUEGE
UND
ALLGEMEINE
ANWENDUNG
COLORIMETRISCHER
TEST
VERFAHREN
.
81
4.2.2
SPEZIELLE
GESICHTSPUNKTE
BEI
DER
FUNKTIONELLEN
BESTIMMUNG
VON
GEWEBEFAKTORAKTIVITAET
.
82
4.2.3
FUNKTIONELLE
BESTIMMUNG
VON
PROTHROMBINASE-AKTIVITAET
85
4.2.4
FUNKTIONELLE
BESTIMMUNG
VON
FREIEN
GEWEBSPLASMINOGEN
AKTIVATOR-KONZENTRATIONEN
.
85
4.3
GRUNDLEGENDES
STRUKTURPRINZIP
PROTHROMBOGENER
MEMBRANKOM
PLEXE
IM
LICHTE
NEUER
LITERATURERKENNTNISSE
.
87
4.4
ZELLULAERE
LOKALISATION
DES
GEWEBEFAKTORS
.
88
4.4.1
EVIDENZEN
FUER
EINE
PRAEFERENZIELLE
EXPRESSION
KONSTITUTIV
VOR
HANDENEN
GEWEBEFAKTORS
AUF
DEN
PERIZYTEN
.
88
4.4.2
EINFLUSS
ENTZUENDLICHER
MEDIATOREN
AUF
DIE
FUNKTIONELLE
EX
PRESSION
VON
GEWEBEFAKTORAKTIVITAET
.
96
4.5
LOKALE
VERSTAERKUNG
VON
GERINNUNGSVORGAENGEN
DURCH
ENDOTHELIALE
UND
PERIZYTAERE
PROTHROMBINASE-AKTIVITAET
.
107
4.6
VERGLEICH
FIBRINOLYTISCHER
AKTIVITAETEN
VON
ENDOTHELZELLEN
UND
PERI
ZYTEN:
AKKUMULATION
VON
FREIEM
GEWEBSPLASMINOGENAKTIVATOR
IM
KULTURMEDIUM
.
114
5
ZUSAMMENFASSUNG
119
LITERATURVERZEICHNIS
123
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
152
DANKSAGUNG
154
LEBENSLAUF
155 |
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