Wirkung von partikulären Umweltnoxen auf die Immunabwehr monozytärer Zellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 2000 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
PARTIKELN
IN
DER
ATEMLUFT
.
1
1.2
DER
RESPIRATIONSTRAKT
DES
MENSCHEN
.
2
1.2.1
MORPHOLOGIE
UND
FUNKTION
.
2
1.2.2
PARTIKELDEPOSITION
IM
RESPIRATIONSTRAKT
.
3
1.3
ABWEHRMECHANISMEN
.
4
1.3.1
ABWEHRZELLEN
.
5
1.3.2
IMMUNOLOGISCHE
FUNKTIONEN
DER
ALVEOLARMAKROPHAGE
IN
DER
LUNGE
.
8
1.4
ABWEHRSTRATEGIEN
VON
MAKROPHAGEN
UND
MONOZYTEN
.
10
1.4.1
ZYTOSKELETT
.
10
1.4.2
PHAGOZYTOSE
.
11
1.4.3
OXIDATIVER
BURST
.
12
1.4.4
GENEXPRESSION
.
14
1.5
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
16
2.
ERGEBNISSE
.
17
2.1
DAS
ZYTOSKELETT
DER
J774A.1
MAUSMAKROPHAGEN
.
17
2.2
PHAGOZYTOSE
.
20
2.2.1
KINETIK
DER
PHAGOZYTOSE
.
20
2.2.2
BEDEUTUNG
DES
ZYTOSKELETTS
FTIR
DIE
PHAGOZYTOSE
.
21
2.2.3
BEDEUTUNG
DER
OBERFLAECHENREZEPTOREN
FUER
DIE
PHAGOZYTOSE
.
28
2.3
OXIDATIVER
BURST
.
35
2.4
WIRKUNG
FEINER
UND
ULTRAFEINER
PARTIKELN
AUF
DAS
ZYTOSKELETT
VON
MAKROPHAGEN
-
ZYTOMAGNETOMETRISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
41
2.5
WIRKUNG
VON
ZYTOSKELETTNOXEN
SOWIE
FEINER
UND
ULTRAFEINER
PARTIKELN
AUF
DIE
GENEXPRESSION
.
55
2.5.1
EINFLUSS
VON
CYTOCHALASIN
D,
COLCHICIN
UND
EC90
AUF
DIE
EXPRESSION
VON
ZYTOKINEN
.
55
2.5.2
SCREENING
VON
GENEN,
DEREN
EXPRESSION
DURCH
ZYTOSKELETTNOXEN
UND
PARTIKELN
VERAENDERT
IST,
MIT
HILFE
DER
EXPRESSIONSARRAY-TECHNIK
.
56
3.
DISKUSSION
.
68
3.1
MODELL
DES
ALVEOLARMAKROPHAGEN
.
68
3.2
ZYTOSKELETT
UND
PHAGOZYTOSE
.
68
3.2.1
UNTERSUCHUNGEN
MIT
DEM
KONFOKALEN
LASER-SCANNING-MIKROSKOP
(CLSM)
.
68
3.2.2
UNTERSUCHUNGEN
MIT
DEM
DURCHFLUSSZYTOMETER
.
71
3.3
OXIDATIVER
BURST
.
75
3.4
ZYTOMAGNETOMETRISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
WIRKUNG
VON
FEINEN
UND
ULTRAFEINEN
PARTIKELN
AUF
DAS
ZYTOSKELETT
.
79
3.5
CDNA-EXPRESSIONS-ARRAY-TECHNIK
.
84
4.
ZUSAMMENFASSUNG
.
92
I
NHALTSVERZEICHNIS
5.
EXPERIMENTELLER
TEIL
.
.
.
_
.
95
5.1
MATERIAL
.
95
5.1.1
REAGENZIEN
.
95
5.1.2
LOESUNGEN
UND
MEDIEN
.
97
5.1.3
LOESUNGSGEMISCHE
FUER
DIE
POLYMERASEKETTENREAKTION
.
100
5.1.4
ZELLKULTURMATERIAL
UND
REAGENZGEFAESSE
.
101
5.1.5
ANTIKOERPER
UND
FLUORESZENZMARKIERTE
ANTIKOERPER
.
101
5.1.6
PARTIKELN
.
102
5.1.7
GERAETE
.
103
5.2
ZELLKULTUR
.
104
5.2.1
SEPARATION
VON
PERIPHEREN
MONOZYTAEREN
ZELLEN
AUS
DEM
BLUT
(PBMC)
.
104
5.2.2
GEWINNUNG
VON
ALVEOLARMAKROPHAGEN
VOM
MENSCHEN
UND
VOM
HUND
.
104
5.2.3
GEWINNUNG
VON
PLEURAMAKROPHAGEN
VOM
MENSCHEN
.
105
5.2.4
J774A.1
MAUSMAKROPHAGEN
.
105
5.2.5
MONO
MAC
6
(MM6)
.
105
5.2.6
INSTILLATIONSEXPERIMENTE
BEI
WKY-RATTEN
.
106
5.2.7
VITALITAETSTEST
MIT
TRYPANBLAU
.
106
5.3
ZYTOSKELETTMARKIERUNG
.
106
5.3.1
KULTIVIERUNG
J774A.
1
AUF
DECKGLAESCHEN
.
106
5.3.2
HERSTELLUNG
FRISCHER
FORMALDEHYDLOESUNG
.
107
5.3.3
MARKIERUNG
VON
AKTIN
(MIKROFILAMENTE)
.
107
5.3.4
MARKIERUNG
VON
TUBULIN
(MIKROTUBULI)
.
107
5.3.5
DOPPELMARKIERUNG
VON
AKTIN
(MIKROFILAMENTE)
UND
TUBULIN
(MIKROTUBULI)
.
108
5.4
PARTIKELN
.
108
5.4.1
BAKTERIEN
.
108
5.4.2
FLUORESZENZMARKIERUNG
UND
OPSONIERUNG
VON
SCHAFERYTHROZYTEN
.
109
5.4.3
POLYSTYROLLATEX-PARTIKELN
.
109
5.4.4
OPSONIERUNG
VON
ZYMOSAN
.
110
5.5
KONFOKALE
LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE
.
110
5.6
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
110
5.7
PHAGOZYTOSEMESSUNG
.
111
5.7.1
PHAGOZYTOSEMESSUNG
MIT
DEM
FLUORESZENZMIKROSKOP
UND
DEM
CLSM
.
111
5.7.2
PHAGOZYTOSEMESSUNG
MIT
HILFE
DES
DURCHFLUSSZYTOMETERS
.
112
5.8
MESSUNG
DES
OXIDATIVEN
BURSTS
IM
DURCHFLUSSZYTOMETER
.
112
5.9
ZYTOMAGNETOMETRIE
.
113
5.9.1
HERSTELLUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
SPHAERISCHEN
FERROMAGNETISCHEN
FE
3
O
4
-PARTIKELN
.
114
5.9.2
VORBEHANDLUNG
DER
ZELLEN
.
-
114
5.9.3
ZYTOMAGNETOMETER
.
114
5.9.4
MESSPRINZIP
.
116
5.9.5
ROTATION
DER
FERROMAGNETISCHEN
FE
3
O
4
-PARTIKELN
UND
DAMIT
DER
PHAGOSOMEN
.118
5.10
REVERSE
POLYMERASEKETTENREAKTION
(RT-PCR)
.
119
5.10.1
ISOLIERUNG
DER
GESAMT-RNA
.
119
I
NHALTSVERZEICHNIS
5.10.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
120
5.10.3
PCR
.
120
5.10.4
GEL-ELEKTROPHORESE
.
120
5.10.5
PRIMER
.
121
5.11
GENEXPRESSIONS-ARRAYS
.
121
5.11.1
RNA-ISOIIERUNG
UND
AUFREINIGUNG
.
122
5.11
2
REINHEITSBESTIMMUNG
IMAGAROSEGEL
.
123
5.11.3
DNASEL-VERDAU
.
123
5.11.4
RNA-ISOLIERUNG
UND
AUFREINIGUNG
NACH
DEM
DNASEL-VERDAU
.
123
5.11.5
PRUEFUNG
DER
RNA
AUF
DNA-KONTAMINATION
DURCH
PCR
.
124
5.11.6
REVERSE
TRANSKRIPTION
IN
CDNAMIT
RADIOAKTIVER
MARKIERUNG
.
125
5.11.7
HYBRIDISIERUNG
AUF
DIE
ATLAS
CDNA-MEMBRAN
.
126
5.11.8
VERSUCHSAUSWERTUNG
.
126
5.12
STATISTIK
.
127
6.
ABKUERZUGEN
.
128
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
129
8.
ANHANG
ZU
DEN
ERGEBNISSEN
.
140
8.1
CDNA-EXPRESSIONS-ARRAY(CLONTECH)
.
140
8.1.1
ATLAS
CDNA-EXPRESSIONS-ARRAY
HUMAN,
588
GENE
CYTOCHALASIN
D
UND
COLCHICIN
.
140
8.1.2
ATLAS
CDNA-EXPRESSIONS-ARRAY
HUMAN
1.2,1.176
GENE
P90,
EC
90
UND
SDR
.
145 |
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