Sphingomyelinreiche Mikrodomänen am Golgi-Apparat:
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I EINLEITUNG
1
1. DIE KOMPARTIMENTIERUNG DER EUKARYONTENZELLE.1
2. VESIKULAERER MEMBRANTRANSPORT.2
3. SEKRETORISCHER WEG.4
4. MEMBRANDOMAENEN, SIGNALTRANSDUKTION UND MEMBRANTRANSPORT.6
5. HETEROTRIMERE G-PROTEINE AM GOLGI-APPARAT.7
6. AUFGABENSTELLUNG DER DOKTORARBEIT:.9
II ERGEBNISSE.10
1. HETEROTRIMERE G-PROTEINE IN CAVEOLAE-AEHNLICHEN MIKRODOMAENEN.10
2. IDENTIFIZIERUNG DER GIC-PROTEINE. 16
2.1 IDENTIFIZIERUNG DER GIC-LIPIDE.18
3. CHARAKTERISIERUNG DER GIC-KOMPONENTEN.19
3.1 EINFUEHRUNG.19
3.2 ANREICHERUNG VON FLOTILLIN IM GIC.19
3.3 ANREICHERUNG DER HETEROTRIMEREN G-PROTEINE IN GIC.20
3.4 TOPOLOGIE VON FLOTILLIN.21
4. IMMUNOCYTOCHEMISCHE LOKALISIERUNG VON GIC-KOMPONENTEN.24
5. ZYKLISIERUNG IM FRUEHEN SEKRETORISCHEN WEG.28
6. ZYKLISIERT FLOTILLIN-1 IM SPAETEN SEKRETORISCHEN WEG?.31
7. DIE EIGENSCHAFTEN DER MIKRODOMAENE GIC.34
7.1 MIKRODOMAENEN IM ER-MILLIEU.34
7.2 CHOLESTEROL ALS STRUKTURELLE KOMPONENTE.38
8. LOW-DENSITY KOMPLEXE VON FLOTILLIN OHNE TRITONEXTRAKTION VON
ZELLFRAKTIONEN.40
8.1 SEGREGATION VON FLOTILLIN AUS COPI-VESIKEL.40
8.2 AKKUMULATION VON FLOTILLIN IN LOW-DENSITY STRUKTUREN DES GOLGI.42
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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III DISKUSSION
44
1. EINLEITUNG.44
2. CHARAKTERISIERUNG DER GIC-KOMPONENTEN.45
3. DIE LOKALISIERUNG DER GIC-PROTEINE IN DER ZELLE.47
4. DIE CHARAKTERISIERUNG DES GIC ALS MIKRODOMAENE.48
5. DIE SEGREGATION VON GIC AUS COPI-VESIKELN.50
IV ZUSAMMENFASSUNG.52
V MATERIALIEN.
54
1. INHIBITOREN.54
2. SONSTIGES.54
3. ANTIKOERPER.
54
4. MOLEKULARGEWICHTS-STANDARDS.55
5. GERAETE.56
VI METHODEN.
57
1. ZELLKULTUR.
57
1.1 KULTIVIERUNG VON ZELLEN.57
1.2 AUFTAUEN, EINFRIEREN UND PASSAGIEREN VON ZELLEN.57
2. PROTEINBESTIMMUNG.58
2.1 LOWRY-BESTIMMUNG.58
2.2 BCA-BESTIMMUNG.59
3. PROTEIN-FAELLUNG.59
3.1 TCA-FAELLUNG.59
3.2 CHLOROFORM-METHANOL-FAELLUNG.60
4. SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESG'NACH LAEMMLI.60
5. ANFAERBUNG VON PROTEINEN IN SDS-GELEN.61
5.1 COOMASSIE-FAERBUNG.61
5.2 SILBER-FAERBUNG.61 |
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