Regulation von Reninsekretion und Reningenexpression in kultivierten isolierten juxtaglomerulären Zellen: funktionelle Rolle von Kalium-, Chlorid- und Calciumkanälen als Steuerungsmechanismen auf zellulärer Ebene ; Beteiligung des Stickstoffmonoxidsystems an der Kontrolle der Reninfreisetzung
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
I. EINLEITUNG. 1
II.
MATERIAL UND METHODEN. 15
1. ZELLKULTUR AUS JUXTAGLOMERULAEREN ZELLEN VON MAEUSENIEREN. 15
1.1 TIERE. 15
1.2 ISOLIERUNG JUXTAGLOMERULAERER ZELLEN . 15
1.3 PRIMAERKULTUR JUXTAGLOMERULAERER ZELLEN. 16
2. BESTIMMUNG DER RENINSEKRETION AUS KULTIVIERTEN JUXTAGLOMERULAEREN
ZELLEN. 17
2.1 ANSETZEN DER ZELLKULTUREN UND ZUGABE DER ZU TESTENDEN SUBSTANZEN. 17
2.2 BESTIMMUNG DER RENINAKTIVITAET DURCH RADIOIMMUNOASSAY (RIA). 17
2.2 BERECHNUNG DER RENINSEKRETION. 18
3. BESTIMMUNG DER RENIN MRNA EXPRESSION DURCH QUANTITATIVE RT-PCR
UNTER VERWENDUNG EINES INTERNEN STANDARDS. 19
3.1 ANSETZEN DER ZELLKULTUREN UND ZUGABE DER ZU TESTENDEN SUBSTANZEN. 19
3.2 LYSE DER KULTIVIERTEN ZELLEN. 19
33 REVERSE TRANSKRIPTASE REAKTION. 19
3.4 POLYMERASE-KETTENREAKTION. 20
3.5 AUFTRENNUNG DER DNA FRAGMENTE DURCH GELELEKTROPHORESE. 21
3.6 AUSWERTUNG. 22
4. BESTIMMUNG DER RENIN MRNA EXPRESSION DURCH QUANTITATIVE RT-PCR
BEI VORAUSGEHENDER ISOLIERUNG DER RNA . 23
4.1 ANSETZEN DER ZELLKULTUREN UND ZUGABE DER ZU TESTENDEN SUBSTANZEN. 23
4.2 ISOLIERUNG DER RNA . 23
4.3 REVERSE TRANSKRIPTASE REAKTION . 23
4.4 POLYMERASE-KETTENREAKTION. 24
4.5 AUFTRENNUNG DER DNA FRAGMENTE DURCH GELELEKTROPHORESE. 24
4.6 AUSWERTUNG . 24
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/961183101
II
INHALTSVERZEICHNIS
5. BESTIMMUNG DER CAMP KONZENTRATION IN KULTIVIERTEN JUXTAGLOMERULAEREN
ZELLEN. 25
5.1 ANSETZEN DER ZELLKULTUREN UND ZUGABE DER ZU TESTENDEN SUBSTANZEN. 25
5.2 EXTRAKTION VON CAMP AUS DEN ZELLEN. 25
5.3 BESTIMMUNG DER CAMP KONZENTRATION DURCH RADIOIMMUNOASSAY. 26
6. STATISTIK. 27
III.
ERGEBNISSE. 28
1. EINFLUSS VON AKTIVATOREN UND INHIBITOREN VERSCHIEDENER TYPEN VON
KALIUMKANAELEN UND VON CHLORIDKANALBLOCKERN AUF RENINSEKRETION UND
RENINGENEXPRESSION. 28
1.1 BEEINFLUSSUNG DER RENINSEKRETION. 28
1.1.1 EINFLUSS AUF DIE BASALE RENINSEKRETION. 28
1.1.2 VERAENDERUNG DER DURCH ERHOEHTES CAMP STIMULIERTEN RENINSEKRETION
. 38
1.2 EINFLUSS AUF DIE BASALE UND DIE DURCH ERHOEHTES CAMP STIMULIERTE
RENINGENEXPRESSION. 43
1.3 EINFLUSS VON KALIUMKANALBLOCKEM AUF DEN INTRAZELLULAEREN CAMP SPIEGEL.
48
2.
BETEILIGUNG VON STICKSTOFFMONOXID UND CGMP AN DER STEUERUNG DER
RENINSEKRETION IN JG-ZELLEN. 52
2.1 EINFLUSS VERSCHIEDENER NO-DONOREN AUF DIE BASALE RENINSEKRETION. 52
2.2 INTERAKTION VON KALIUMKANALBLOCKEM UND NO-DONOREN . 54
2.3 MECHANISMEN DER INTRAZELLULAEREN SIGNALUEBERTRAGUNG BEI EINER
BEEINFLUSSUNG
DER RENINFREISETZUNGSRATE AUS KULTIVIERTEN JUXTAGLOMERULAEREN ZELLEN
DURCH
NO-DONOREN - BETEILIGUNG VON A KINASE UND G KINASE. 59
2.4 WIRKUNGEN DES ATRIALEN NATRIURETISCHEN PEPTIDS (ANP) AUF KULTIVIERTE
JG-ZELLEN . 62
2.4.1 EINFLUSS AUF DIE BASALE RENINSEKRETION. 62
2.4.2 WIRKUNG AUF DIE DURCH CAMP STIMULIERTE RENINSEKRETION . 63
2.5 EFFEKTE EINER BLOCKADE DER PHOSPHODIESTERASE III DURCH MILRINON AUF
DIE
RENINSEKRETION UND RENINGENEXPRESSION BEI KULTIVIERTEN JG-ZELLEN. 64
INHALTSVERZEICHNIS
III
3.
EINFLUSS EINER BLOCKADE VON T-TYP UND L-TYP CALCIUMKANAELEN AUF DIE
RENINSEKRETION. 66
3.1 EINFLUSS AUF DIE BASALE RENINSEKRETION. 66
3.2 AUSWIRKUNGEN EINER ERNIEDRIGTEN EXTRAZELLULAEREN CALCIUMKONZENTRATION
DURCH ZUGABE VON EGTA AUF DIE RENINSEKRETION .
67
IV. DISKUSSION.]. 69
1. EINFLUSS VON KALIUM- UND CHLORIDKANAELEN AUF DIE RENINSEKRETION.
69
1.1 BETEILIGUNG VON KALIUMKANAELEN AN DER STEUERUNG DER RENINSEKRETION
UND
RENINGENEXPRESSION AN JUXTAGLOMERULAEREN ZELLEN.
69
1.2 EFFEKTE EINER BLOCKADE VON CHLORIDKANAELEN AUF DIE BASALE
RENINSEKRETION
BEI PRIMAERKULTUREN AUS ISOLIERTEN JG-ZELLEN.
72
2. BETEILIGUNG VON STICKSTOFFMONOXID UND CGMP AN DER STEUERUNG DER
RENINSEKRETION AUF ZELLULAERER EBENE.
73
2.1 VERAENDERUNG DER RENINSEKRETION DURCH NO-DONOREN. 73
2.2 WIRKUNG VON KALIUMKANALBLOCKEM AUF DIE DURCH NO-DONOREN STIMULIERTE
RENINSEKRETION. 73
2.3 BETEILIGUNG DER CGMP ABHAENGIGEN G KINASE UND DES CAMP/A KINASE-
SYSTEMS BEI DER STEUERUNG DER RENINSEKRETION. 74
2.4 WIRKUNG VON ATRIALEM NATRIURETISCHEM PEPTID AUF DIE RENINSEKRETION
BEI KULTIVIERTEN JG-ZELLEN. 76
2.5 BETEILIGUNG DER PHOSPHODIESTERASE III (PDEIII) AN DER STEUERUNG DER
RENINSEKRETION. 77
3.
EFFEKTE VON T-TYP UND L-TYP CALCIUMKANALBLOCKERN AUF DIE
RENINSEKRETION.
78
V. ZUSAMMENFASSUNG.
79
VI. LITERATURVERZEICHNIS
81 |
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| topic_facet | Hochschulschrift Zellkultur Sekretion Genregulation Renin Renin-Angiotensin-System Juxtaglomerulärer Apparat |
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