Identifikation von Signalweginteraktionspartnern des Zelladhäsionsmoleküls Muc18/MCAM/CD146:
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INHALTSVERZEICHNIS V
INHALTSVERZEICHNIS
1. ZUSAMMENFASSUNG 1
2. EINLEITUNG 2
2.1 DAS MALIGNE MELANOM 2
2.2 DER T UMORPROGRESSIONSMARKER MUC 18/MC AM/CD 146 4
3. MATERIAL 8
3.1 ZELLLINIEN UND TRANSFEKTANDEN 8
3.2 ANTIKOERPER 9
3.3 ENZYME 13
3.4 BAKTERIEN 14
3.5 PLASMIDE 14
3.6 GROESSENSTANDARDS 15
3.7 CHEMIKALIEN 15
3.8 KOMMERZIELLE ANALYSESYSTEME (KITS) 18
3.9 GRUNDSTOFFE FUER KULTURMEDIEN 18
3.10 VERBRAUCHSMATERIAL 19
3.11 GERAETE 19
3.12 PUFFER UND STAMMLOESUNGEN 21
3.13 KULTURMEDIEN 24
4. METHODEN 25
4.1 ZELLKULTUR 25
4.1.1 EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN 25
4.1.2 ZELLEMTE 25
4.1.3 MYKOPLASMENTEST ' 26
4.2 PROTEINCHEMIE 26
4.2.1 PRAEPARATION VON ZELLLYSATEN 26
4.2.2 STIMULATION VON ZELLEN 27
4.2.2.1 MIT PMA (PHORBOL-12-MYRISTAT-L 3-ACETAT) 27
4.2.2.2 MIT ANTIKOERPERN 27
4.2.3 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION NACH LOWRY 28
4.2.4 IMMUNPRAEZIPITATION 28
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS VII
5. ERGEBNISSE 43
5.1 CHARAKTERISIERUNG DER VERSCHIEDENEN MUC 18-ANTIKOERPER 43
5.2 CALCIUM-EINSTROM NACH MUCL8-KREUZVEMETZUNG AUF ZELLEN 46
5.3 VERAENDERUNGEN IM TYROSINPHOSPHORYLIERUNGSMUSTER NACH KREUZVEMETZUNG
52
VONMUCL8
5.3.1 PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS VON MUC 18 52
5.3.2 NEU PHOSPHORYLIERTE PROTEINE IM ZELLLYSAT NACH MUC 18-STIMULATION
53
5.4 IDENTIFIKATION VON DURCH MUCL 8-STIMULATION NEU AUFTRETENDEN
PHOSPHOPROTEINEN 57
5.4.1 EXPRESSION VON SIGNALWEG-PROTEINEN 57
5.4.2 PHOSPHORYLIERUNG VON SIGNALWEGPROTEINEN DURCH MUC
18-KREUZVEMETZUNG 60
5.4.2.1 PHOSPHORYLIERUNG VON PL30CAS/PL05CASL NACH MUCL 8-STIMULATION 60
5.4.2.2 PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS VON FAK NACH KREUZVEMETZUNG VON MUCL 8
62
5.4.2.3 PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS VON FYN NACH KREUZVEMETZURIF VON MUCL8
63
5.5 KOIMMUNPRAEZIPITATION VON SIGNALWEGPROTEINEN MIT MUC 18 65
5.5.1 KOIMMUNPRAEZIPITATION VON PL30CAS/PL05CASL NACH MUCL 8-STIMULATION
65
5.5.2 VERSUCH DER KOIMMUNPRAEZIPITATION VON FAK NACH MUC 18-STIMULATION
70
5.5.3 VERSUCH DER KOIMMUNPRAEZIPITATION VON FYN NACH MUCL 8-STIMULATION
71
5.5.4 VERSUCH DER KOIMMUNPRAEZIPITATION VON PAXILLIN NACH MUC
18-STIMULATION 73
5.5.5 KOIMMUNPRAEZIPITATION VON NCK MIT MUCL8 74
5.6 ZUSAMMENFASSUNG DER VERSUCHE ZU PHOSPHORYLIERUNG UND
KOIMMUNPRAEZIPITATION 76
5.7 AKTIVIERUNG VON TRANSKRIPTIONSFAKTOREN NACH KREUZVEMETZUNG VON MUCL
8 77
5.7.1 CAMP-RESPONSIVES ELEMENT (CRE) 77
5.7.2 PIC277AAP2, EIN KONSTRUKT AUS DEM ICAM-1-PROMOTOR 78
5.7.3 ERMITTLUNG DES RESPONSIVEN ELEMENTS AUS DEM ICAM-1 -PROMOTOR 80
5.7.4 WEITERE GETESTETE KONSTRUKTE 82
6. DISKUSSION / 83
6.1 PARTIELLE IDENTIFIZIERUNG DES MUC 18-SIGNALWEGES 86
6.2 AKTIVIERUNG VON TRANSKRIPTIONSFAKTOREN DURCH MUC 18 93
6.3 DER SIGNALKOMPLEX UM MUC 18 94
7. LITERATURVERZEICHNIS 95
ABKUERZUNGEN 104
PUBLIKATIONEN 107
LEBENSLAUF 108 |
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