Vergleichende Untersuchung der immunogenen Eigenschaften von inaktivierten Pockenviren:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
2
LITERATURUEBERSICHT
.3
2.1
POCKENVIREN
.
3
2.1.1
ALLGEMEINE
EIGENSCHAFTEN
VON
POCKENVIREN
.
3
2.1.1.1
GEFLUEGELPOCKENVIREN
(GPV)
.
8
2.1.1.2
MODIFIZIERTE-VACCINIAVIREN-ANKARA
(MVA)
.
10
2.1.1.3
PARAPOX-OVIS-VIREN
.
14
2.1.2
YYESCAPE
"
-MECHANISMEN/IMMUNMODULATION
DURCH
POCKENVIREN
.
17
2.1.3
DERZEIT
BEKANNTE
IMMUNOGENE
EIGENSCHAFTEN
VON
POCKENVIREN
.
27
2.2
DAS
IMMUNSYSTEM
DES
SCHWEINS
.
30
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
34
3.1
MATERIAL
.
34
3.1.1
ANTIBIOTIKA
.
34
3.1.2
ANTIKOERPER,
ANTISEREN
UND
KONJUGATE
.
34
3.1.2.1
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
PORCINE
LEUKOZYTEN
.
34
3.1.2.2
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
GEGEN
PORCINE
ZYTOKINE
.
34
3.1.2.3
KONJUGATE
.
35
3.1.3
CHEMIKALIEN
.
36
3.1.4
GERAETE
.
37
3.1.5
PUFFER,
LOESUNGEN
UND
MEDIEN
.
39
3.1.5.1
PUFFER
.
39
3.1.5.2
LOESUNGEN
.
40
3.1.5.3
MEDIEN
.
40
3.1.6
RADIOAKTIVE
SUBSTANZEN
.
41
3.1.7
TESTKITS
.
41
3.1.8
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
42
3.1.9
VIREN/PLACEBO
.
43
3.1.9.1
VIREN
.
43
3.1.9.2
PLACEBOCHARGEN
.
45
3.1.10
ZELLEN/
ZELLINIEN
.
46
3.1.11
ZYTOKINE
.
47
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.2
METHODEN
.
48
3.2.1
KLINISCHE
UND
DIAGNOSTISCHE
METHODEN
.
48
3.2.1.1
KLINISCHE
UEBERWACHUNG
DER
FUER
DIE
VERSUCHE
EINGESETZTEN
TIERE
.
48
3.2.1.2
BLUTGEWINNUNG
.
48
3.2.1.3
ERSTELLUNG
EINES
BLUTBILDES
.
49
3.2.1.3.1
BESTIMMUNG
DER
GESAMTLEUKOZYTENZAHL
.
49
3.2.1.3.2
MESSUNG
DES
HAEMATOKRITS
.
50
3.2.1.3.3
ERMITTLUNG
DES
PLASMAPROTEINGEHALTES
.
50
3.2.2
VIROLOGISCHE
METHODEN
.
51
3.2.2.1
KULTIVIERUNG
VON
ADHAERENTEN
ZELLEN
.
51
3.2.2.2
VIRUSANZUCHTZ-VERMEHRUNG
.
51
3.2.2.3
VIRUSEMTE
.
52
3.2.2.4
VIRUSTITRATION
.
52
3.2.2.5
VIRUSKONZENTRIERUNG
.
53
3.22.6
VIRUSINAKTIVIERUNG
.
53
3.22.7
ENTFERNUNG
TOXISCHER
RUECKSTAENDE
.
53
3.2.2.8
HERSTELLUNG
DER
PLACEBOKONTROLLEN
.
54
323
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
.
54
3.23.1
ISOLIERUNG/STIMULATION
VON
PORCINEN
LEUKOZYTEN
.
-
54
3.23.1.1
ISOLIERUNG
MONONUKLEAERER
LEUKOZYTEN
.
54
3.23.1.2
BESTIMMUNG
DER
ANZAHL
LEBENDER
ZELLEN
.
54
3.2.3.13
EINFRIEREN
VON
ZELLEN
.
55
3.23.1.4
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
.
55
3.23.1.5
STIMULATION
VON
MONONUKLEAEREN
LEUKOZYTEN
MIT
VER
SCHIEDENEN,
INAKTIVIERTEN
POCKENVIREN
.
55
3232
CHARAKTERISIERUNG
VON
LEUKOZYTENPOPULATIONEN
MIT
HILFE
DER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
56
3.23.2.1
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSEN
.
56
3.23.2.2
EINFARBENIMMUNFLUORESZENZ
.
57
3.23.2.3
ZWEIFARBENIMMUNFLUORESZENZ
.
58
3.23.2.4
DREIFALBENIMMUNFLUORESZENZ
.
58
3.23.2.5
AUSWERTUNG
DER
DURCHFLUSSZYTOMETRIEDATEN
.
59
INHALTSVERZEICHNIS
IN
3.233
FUNKTIONELLE
TESTS
ZUM
NACHWEIS
DER
WIRKUNG
VERSCHIEDENER
INAKTIVIERTER
POCKENVIRUSSTAEMME
.
60
3.233.1
BESTIMMUNG
DER
SPONTANEN
ZYTOLYTISCHEN
AKTIVITAET
.
60
3.233.2
BESTIMMUNG
DER
PHAGOZYTOSERATE
UND
-AKTIVITAET
.
61
3.2.3.33
MESSUNG
DER
ZELLPROLIFERATION
.
62
3.2.33.4
ZYTOKINNACHWEISE
.
63
3.233.4.1
BESTIMMUNG
DES
INTERLEUKIN-2-GEHALTES
IN
ZELLKULTURUEBER
STAENDEN
.
63
3.2.33.4.2
BESTIMMUNG
DER
INTERFERON-A-GEHALTES
IN
ZELLKULTURUEBER
STAENDEN
.
64
3.233.4.3
BESTIMMUNG
DER
INTERFERON-Y-KONZENTRATION
IN
ZELLKULTUR
UEBERSTAENDEN
.
65
4
ERGEBNISSE
.
67
4.1
KLINISCHE
EIGNUNG
DER
VERSUCHSTIERE
.
67
43
ANALYSE
DER
FUER
DIE
VERSUCHE
VERWENDETEN
(INAKTIVIERTEN)
POCKENVIREN
.
67
4.2.1
UNTERSUCHUNG
DER
STIMULATORISCHEN
KAPAZITAET
VON
VERSCHIEDENEN
(INAKTIVIERTEN)
POCKENVIREN
.
69
4.2.2
AUSWAHLKRITERIEN
FUER
DIE
NAEHER
CHARAKTERISIERTEN
POCKENVIREN
.
72
4.2.3
BESTIMMUNG
DER
OPTIMALEN
STIMULATORISCHEN
KAPAZITAET
AUSGEWAEHLTER
POCKENVIREN
.
73
43
ANALYSE
DER
WIRKUNG
INAKTIVIERTER
POCKENVIREN
AUF
DAS
UNSPEZIFISCHE
INUNUNSYSTEM
.
75
4.3.1
UNTERSUCHUNG
DER
SPONTANEN
ZYTOLYTISCHEN
AKTIVITAET
.
75
43.1.1
EINFLUSS
VON
INAKTIVIERTEN
POCKENVIREN
AUF
DIE
SPONTANE
ZYTOLYTISCHE
AKTIVITAET
.
75
43.1.2
VERGLEICH
DER
AKTIVITAET
NATUERLICHER
KILLERZELLEN
VON
VERSCHIE
DENEN
HEREN
UNTER
DEM
EINFLUSS
VON
INAKTIVIERTEN
POCKENVIREN
.
78
4.3.2
UNTERSUCHUNG
DER
PHAGOZYTOSE
.
80
43.2.1
UNTERSUCHUNG
DER
PHAGOZYTOSERATE
UND
-AKTIVITAET
VERSCHIEDENER
ZELLPOPULATIONEN
.
81
IV
INHALTSVERZEICHNIS
43.2.2
EINFLUSS
VON
INAKTIVIERTEN
POCKENVIREN
AUF
DIE
PHAGOZYTOSERATE
.
83
4.3.23
VERGLEICH
DER
PHAGOZYTOSERATE
VERSCHIEDENER
TIERE
UNTER
DEM
EINFLUSS
VON
INAKTIVIERTEN
POCKENVIREN
.
86
4.4
ANALYSE
DER
WIRKUNG
INAKTIVIERTER
POCKENVIREN
AUF
DAS
SPEZIFISCHE
IMMUNSYSTEM
.
88
4.4.1
UNTERSUCHUNG
DER
PROLIFERATION
VON
MONONUKLEAEREN
LEUKOZYTEN
.
89
4.4.1.1
NACHWEIS
DER
POCKENVIRUSINDUZIERTEN
PROLIFERATION
.
89
4.4.1.2
VERGLEICH
DER
KINETIK
.
90
4.4.13
ANALYSE
DER
STIMULATORISCHEN
KAPAZITAET
VON
INAKTIVIERTEN
POCKEN
VIREN
INNERHALB
EINER
TIERPOPULATION
.
92
4.4.13
MIKROSKOPISCHE
ANALYSE
DER
STIMULIERTEN
ZELLEN
.
94
4.4.2
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
POCKENVIRUSSTIMULIERTEN
ZELLFRAKTION(EN)
.
97
4.4.2.1
NACHWEIS
EINER
AKTIVIERUNG
VON
POCKENVIRUSSTIMULIERTEN
PBMC.
97
4.4.2.2
IDENTIFIZIERUNG
DER
POCKENVIRUSSTIMULIERTEN
ZELLFTAKTION(EN)
/-POPULATION(EN)
.100
4.4.2.2.1
EXPRESSION
DER
DIFFERENZIERUNGSANTIGENE
CD4
UND
CD8
AUF
RUHENDEN
PBMC
DES
SCHWEINS
.100
4.4.2.2.2
CHARAKTERISIERUNG
DES
PHAENOTYPS
POCKENVIRUSSTIMULIERTER
ZELLEN
.102
4.4.2.23
VERGLEICH
DES
PHAENOTYPS
POCKENVIRUSAKTIVIERTER,
CD25-POSITIVER
PBMC
.
104
4.4.23
VERGLEICH
DER
ZELLZAHLEN
POCKENVIRUSAKTIVIERTER
UND
RUHENDER
PBMC
.
106
4.4.2.4
KINETIK
DER
CD4/CD25-EXPRESSION
.
108
43.2.5
KINETIK
DER
CD4/MHCII-EXPRESSION
.
113
4.4.3
UNTERSUCHUNG
DER
ZYTOKINFREISETZUNG
UNTER
DEM
EINFLUSS
VON
INAKTIVIERTEN
POCKENVIREN
.
117
4.43.1
UNTERSUCHUNG
DER
IFN-A-SEKRETION
.
117
4.43.1.1
EINFLUSS
VON
INAKTIVIERTEN
POCKENVIREN
AUF
DIE
IFN-A
SEKRETION
.
117
4.43.1.2
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
IFN-A-SEKRETION
.
119
4.4.3.13
VERGLEICH
DER
IFN-A-FREISETZUNG
BEI
VERSCHIEDENEN
INHALTSVERZEICHNIS
V
TIEREN
.
121
4.4.3.2
ANALYSE
DER
IL-2-/IL-4-FREISETZUNG
.
123
4.4.3.2.1
EINFLUSS
VON
INAKTIVIERTEN
POCKENVIREN
AUF
DIE
IL-2-SEKRETION
123
4.4.3.2.2
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
IL-2-FREISETZUNG
.
125
4.4.3.2.3
VERGLEICH
DER
IL-2-SEKRETION
BEI
VERSCHIEDENEN
TIEREN
.
125
4.4.3.3
UNTERSUCHUNG
DER
IFN-Y-SEKRETION
.
128
4.4.3.3.1
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
IFN-Y-FREISETZUNG
.
128
4.4.3.3.2
VERGLEICH
DER
IFN-Y-SEKRETION
INNERHALB
EINER
TIERPOPULATION
130
4.5
ABSCHLIESSENDE
UNTERSUCHUNGEN
.
132
4.5.1
UEBERSICHT
UEBER
DEN
ZEITLICHEN
VERLAUF
DER
POCKENVIRUSINDUZIERTEN
EFFEKTE
.
132
4.5.2
VERGLEICH
DER
STIMULATORISCHEN
KAPAZITAET
DER
GETESTETEN
POCKENVIREN.
134
5
DISKUSSION
.
137
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
153
7
SUMMARY
.
155
8
LITERATURVERZEICHNIS
.
156
9
ANHANG
.
178
9.1
ABKUERZUNGEN
.A
9.2
FIRMEN.
.
E |
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