Etablierung eines porcinen Ovidukt-Explant-Assays zum Studium der Spermatozoen-Ovidukt-Interaktion:
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1999
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| adam_text | Titel: Etablierung eines porcinen Ovidukt-Explant-Assays zum Studium der Spermatozoen-Ovidukt-Interaktion
Autor: Gehlhaar, Renate
Jahr: 1999
Inhaltsverzeichnis
Abkürzungsverzeichnis
1 Einleitung............_..........__.___...................................__...............................................
2 Literaturübersieht.._______________________________..............................................*
2.1 Das Spermatozoon.......................................................................................................J
2.1.1 Morphologie der Samenzelle..............................................................................^
2.1.2 Spermatozoenreifung..........................................................................................5
2.2 Der Oviduktisthmus als funktionelles Spermatozoenreservoir....................................8
2.2.1 Funktionelle Anatomie des Oviduktes................................................................9
2.2.1.1 Makro-und mikroskopische Anatomie...................................................9
2.2.1.2 Morphologische Kennzeichen des Oviduktepithels..............................10
2.3 Interaktion von Spermatozoen mit dem Oviduktepithel in-vivo................................12
2.3.1 Spermatozoeiitransport im weiblichen Genitale...............................................12
2.3.2 Der kaudale Isthmus als Spennatozoenreservoir..............................................15
2.3.2.1 Physikalische Arretierung der Spermatozoen.......................................17
2.3.2.2 Biochemische Bindungsmechanismen der Spermatozoen....................18
2.3.3 Koordination von Ovulation und Speraiatozoenfreisetzung
aus dem Reservoir.............................................................................................21
2.4 In-Vitro-Systeme zur Untersuchung der Spermatozoen-Ovidukt-Interaktion............22
2.4.1 Explante und Oviduktepithelzellkulturen..........................................................22
2.4.1.1 Definition...............................................................................................22
2.4.2 Koinkubation von Explanten und Oviduktepithelzellekulturen
mit Spermatozoen in-vitro.................................................................................23
2.4.2.1 Effekte auf die Spermatozoen................................................................23
2.4.2.2 Effekte auf die Oviduktepithelzellen.....................................................28
3 Eigene Untersuchungen.........................................„........................................................29
3.1 Fragestellung...............................................................................................................29
3.2 Material und Methoden...............................................................................................30
3.2.1 Versuchstiere und Ejakulatgewinnung..............................................................30
3.2.2 Konventionelle spermatologische Untersuchungen..........................................30
3.2.2.1 Makroskopische Untersuchungen.........................................................32
3.2.2.2 Bewegungsaktivität...............................................................................32
3.2.2.3 Morphologie..........................................................................................32
3.2.3 Explante als/M-v/Tro-Modell.............................................................................32
3.2.3.1 Gewinnung der Explante.......................................................................33
3.2.3.2 Vorbereitung der Explante für die Versuche.........................................34
3.2.3.3 Koinkubation von Explanten mit den Spermatozoen............................34
3.2.3.4 Videomikrographie der gebundenen Spermatozoen am Explant..........36
3.2.3.5 Berechnung des Bindungsindexes.........................................................37
3.3 Versuchsaufbau gemäß spezieller Fragestellung........................................................37
3.3.1 Grundversuch....................................................................................................37
3.3.2 Spermatozoenbindungskurve............................................................................39
3.3.3 Vergleich des Bindungsverhaltens ejakulierter Spermatozoen
mit dem epididymal gewonnener Spermatozoen..............................................39
3.3.4 Bestimmung des IC 50-Wertes für Spermadhäsine............................................40
3.3.5 Bestimmung des IC50-Wertes für Asialofetuin.................................................41
3.3.6 Kompetitive Zugabe von Glykoproteinen.........................................................41
3.3.6.1 Bestimmung der Glykoproteinmenge....................................................42
3.4 Begleitende Untersuchungen......................................................................................42
3.4.1 Lektmhistochemie.............................................................................................42
3.4.1.1 Probenvorbereitung...............................................................................42
3.4.1.2 Anfertigung von Gewebeschnitten für die Lektinhistochemie..............43
3.4.1.3 Lektinhistochemische Versuche............................................................43
3.4.2 Elektronenmikroskopie.....................................................................................45
4.3.2.1 Rasterelektronenmikroskopie.................................................................46
4.3.2.2 Transmissionselektronenmikroskopie...................................................46
3.5 Statistische Auswertungen..........................................................................................47
3.5.1 Deskriptive Statistik..........................................................................................47
3.5.2 Varianzanalyse..................................................................................................48
3.5.3 Korrelations- und Regressionsanalyse..............................................................48
3.5.4 Nicht-lineare Modellierung...............................................................................49
3.5.5 Zwischenberechnung und graphische Darstellung............................................49
3.6 Ergebnisse...................................................................................................................50
3.6.1 Lebensfähigkeit und Qualität des Explantes.....................................................5
3.6.2 Qualität und Quantität der Spermatozoen Oviduktepithelzell Interaktion........50
3.6.2.1 Vergleich des Spermatozoen-Bindungsindexes von Explanten
aus dem Isthmus und der Ampulle........................................................51
3.6.2.2 Vergleich des Spermatozoen-Bindungsindexes von Explanten in
Abhängigkeit vom Zyklusstand der Sau................................................52
3.6.2.3 Vergleich des Spermatozoen-Bindungsindexes
in Abhängigkeit vom Alter des weiblichen Tieres................................53
3.6.2.4Unterschiede im Spermatozoen-Bindungsindex
in Abhängigkeit von individuellen Ebern..............................................54
3.6.2.5 Zusammenhang von konventionellen spermatologischen
Parametern mit dem Spermatozoen-Bindungsindex..............................55
3.6.3 Spermatozoenbindungskurve.............................................................................57
3.6.4 Vergleich des Spermatozoen-Bindungsindexes ejakulierter
Spermatozoen mit epididymal gewonnenen Spermatozoen...............................58
3.6.5 Kompetitive Zugabe verschiedener Substanzen, die die Interaktion von
Spermatozoen mit den Oviduktepithelzellen hemmen.......................................60
3.6.5.1 Spermadhäsine (ICso-Kurve)..................................................................60
3.6.5.2 Asialofetuin (IC5o Kurve).......................................................................61
3.6.5.3 Modellglycoproteine und Zucker im Vergleich.....................................62
3.6.6 Ergebnisse der Lektinhistochemie.....................................................................65
3.6.7 Elektronenmikroskopische Aufnahmen.............................................................72
3.6.7.1 Rasterelektronenmikroskopische Untersuchungen................................72
3.6.7.2 Transmissionselektronenmikroskopische Untersuchungen...................74
4 Diskussion............................................................__..........................................................76
5 Zusammenfassung.........................................................................................„..................87
6 Summary..................................................................................„........................................89
7 Literaturverzeichnis_______...........................................................................................91
8 Anhang A_____._______________......................._______.....................................____104
9 Anhang B______________________________________________...............................107
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