Genetische Veränderungen des Tumorsuppressorgens Rb-1 in Lebermetastasen kolorektaler Karzinome:
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INHALTSVERZEICHNIS
I.Einleitung S. 5
1.1. DIE KOLOREKTALEN KARZINOME S. 5
1.2. GENETISCHE VERÄNDERUNGEN IN DER PATHOGENESE
KOLOREKTALER KARZINOME S. 10
1.3. GENETISCHES MODELL DER KOLOREKTALEN
KARZINOGENESE S. 12
1.4. DAS TUMORSUPPRESSORGEN „RB-1 S. 14
1.5. RB-VERÄNDERUNGEN IN MENSCHLICHEN TUMOREN S. 17
1.6. DAS RB-PROTEIN UND DIE REGULATION VON ZELLTEILUNG
UND-DIFFERENZIERUNG S. 19
1.7. RB-VERÄNDERUNGEN IN KOLOREKTALEN KARZINOMEN S. 21
1.8. FRAGESTELLUNG S. 21
2. Material und Methoden S. 23
2.1. PATIENTENPROBEN S. 23
2.2. VERSUCHSAUFBAU S. 23
2.3. PROBENAUFARBEITUNG UND RNA-ISOLIERUNG S. 26
2.4. REVERSE TRANSKRIPTASE - REAKTION S. 26
2.5. POLYMERASE KETTENREAKTION S. 28
2.6. KONFORMATIONSPOLYMORPIIISMEN IN DNA EINZEL
STRÄNGEN (SSCP-PCR) S. 29
2.6.1. PCR unter Verwendung von radioaktiv markiertem dCTP S. 29
2.6.2. Restriktion der PCR-Produkte S. 30
2.6.3. Elektrophoretische Auftrennung der Restriklionsprodukle S. 30
2.6.4. Auloradiografie des Elektrophoresegclcs S. 31
2.7. SEQUENZIERUNG S. 31
2.7.1. Fcstphasenscquen/.ierung S. 31
2.7.2. Klonierung und zyklische Sequenzierung S.31
-4-
3. Ergebnisse S. 34
3.1. OPTIMIERUNG DER METHODIK s-34
3.2. ERGEBNISSE DER SSCP PCR s-35
3.3. ERGEBNISSE DER SEQUENZIERUNGEN s-39
3.4. ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE s-42
4. Diskussion S. 43
4.1. METHODIK s-43
4.2. VERGLEICH MIT DEN ERGEBNISSEN ANDERER STUDIEN S. 44
4.3. DIE BEDEUTUNG VON RB-VERÄNDERUNGEN FÜR DIE
TUMORENTSTEHUNG S-46
4.4. RB-VERÄNDERUNGEN BEI KOLOREKTALEN KARZINOMEN S. 48
4.4.1. Homozygote Rb-Inaktivierung S. 48
4.4.2 Heterozygote Rb-Allelverluste S. 48
4.4.3 Allelvervielfältigungen s-49
4.4. ZUSAMMENFASSUNG S. 52
5. Literaturverzeichnis S. 54
6.Abbildungs-, Tabellen- und Übersichtenverzeichnis S. 64
7. Abkürzungsverzeichnis S. 65
8. Danksagungen S. 67
9. Lebenslauf S. 68
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