Aktivierung von Zellen des humanen Immunsystems durch CpG-DNA:
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2000
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1
EINLEITUNG
1
1.1
D
IE
W
ELT
DER
DNA
------------------------------
.YY
----------------------------------------------
1
1.2
DNA
UND
DIE
I
MMUNOLOGIE
.
_
.
-
.
-
.
1
1.3
D
AS
C
P
G-P
RINZIP
.
2
1.4
W
AS
BEDEUTET
PATTERN
RECOGNITION
?.
.
.
3
1.5
D
IE
Z
ELLEN
DES
ANGEBORENEN
I
MMUNSYSTEMS
.
.
4
1.6
D
IE
ZENTRALE
R
OLLE
DER
APZ
.
-
.
5
1.7
D
IE
V
ERTRETER
DER
APZ
.
-
.
----
7
1.8
E
FFEKTE
VON
C
P
G-DNA
AUF
DAS
I
MMUNSYSTEM
.
_
_
.
8
1.9
S
IGNALTRANSDUKTION
DURCH
C
P
G-DNA
.
10
1.10
C
P
G-DNA
UND
DAS
HUMANE
I
MMUNSYSTEM
_
.
_
.
13
2
MATERIAL
UND
METHODEN
16
2.1
M
EDIEN
UND
R
EAGENZIEN
.
_
_
-
.
.
_
16
2.1.1
F
ICOLL
-H
YPAQUE
L
OESUNG
.
16
2.1.2
A
MMONIUMCHLORID
L
OESUNG
.
16
2.1.3
YYH
ANKS
BALANCED
"
S
ALZ
L
OESUNG
.
16
2.1.4
P
HOSPHAT
GEPUFFERTE
S
ALZLOESUNG
.
17
2.1.5
T
RYPSIN
/EDTA-L
OESUNG
.
17
2.1.6
E
OSIN
F
AERBELOESUNG
.
17
2.1.7
P
ARAFORMALDEHYD
F
IXIERLOESUNG
.
17
2.1.8
5
X
DN
ASE
I
P
UFFER
.
18
2.1.9
Z
ELLKULTURMEDIUM
.
18
II
2.1.10
R
EAGENZIEN
FUER
DIE
Z
ELLKULTUR
.
19
2.1.11
D
ESOXYRIBONUKLEINSAEUREN
UND
O
LIGODESOXYRIBONUKLEOTIDE
.
19
2.1.12
H
ERSTELLUNG
VERDAUTER
E
SCHERICHIA
COLI
DNA
.
20
2.1.13
Z
YTOKINE
.
20
2.1.14
Z
YTOKINE
BLOCKIERENDE
A
NTIKOERPER
.
21
2
J,
I
SOLATION
VON
PRIMAEREN
I
MMUNZELLEN
UND
Z
ELLINIEN
_
21
2.2.1
I
SOLATION
MONONUKLEAERER
Z
ELLEN
AUS
PERIPHEREM
B
LUT
.
21
2.2.2
I
SOLATION
VON
T-L
YMPHOZYTEN
AUS
PBMZ
.
22
2.2.3
I
SOLATION
VON
M
ONOZYTEN
AUS
PBMZ
.
22
2.2.4
I
SOLATION
VON
M
ONOZYTEN
ODER
B-L
YMPHOZYTEN
DEPLETIERTEN
PBMZ
.
23
2.2.5
I
SOLATION
VON
CD11C-
LYMPHOIDEN
DZ
DEPLETIERTEN
PBMZ
.
23
2.2.6
I
SOLATION
VON
B-L
YMPHOZYTEN
AUS
T
ONSILLEN
.
23
2.2.7
I
SOLATION
VON
CD1
LC
LYMPHOIDEN
DENDRITISCHEN
Z
ELLEN
AUS
T
ONSILLEN
.
24
2.2.8
G
ENERIERUNG
MYELOIDER
DENDRITISCHER
Z
ELLEN
AUS
B
LUTMONOZYTEN
.
25
2.2.9
Z
ELLINIE
.
25
23
Z
ELLULAERE
A
RBEITEN
UND
M
ETHODEN
.
_
-
.
-
----------
26
2.3.1
M
ESSUNG
VON
P
ROLIFERATION
.
26
2.3.2
B
ESTIMMUNG
DER
Z
YTOKINPRODUKTION
.
26
2.3.3
M
ESSUNG
DER
O
BERFLAECHENANTIGENEXPRESSION
.
27
2.3.4
B
ESTIMMUNG
DES
A
NTEILS
LEBENDER
Z
ELLEN
.
29
2.3.5
Z
YTOLOGISCHE
A
NALYSEN
.
29
2.3.6
S
TIMULATION
VON
T-Z
ELLEN
IN
PBMZ
.
30
2.4
S
TATISTISCHE
A
USWERTUNG
_
_
.
_
30
3
ERGEBNISSE
31
3.1
E
FFEKTE
AUF
B-L
YMPHOZYTEN
_
.
_
.
_
31
3.1.1
C
P
G-DNA
INDUZIERTE
P
ROLIFERATION
VON
PBMZ
.
31
3.1.2
C
P
G
SPEZIFISCHE
P
ROLIFERATION
VON
B-L
YMPHOZYTEN
.
32
3.1.3
E
XPRESSION
VON
KOSTIMULATORISCHEN
UND
A
NTIGEN
PRAESENTIERENDEN
O
BERFLAECHENMOLEKUELEN
.
36
III
3.1.4
E
FFEKTE
VON
C
HLOROQUIN
AUF
DIE
A
KTIVIERUNG
VON
B-Z
ELLEN
.
37
3.2
E
FFEKTE
AUF
M
ONOZYTEN
.
39
3.2.1
Z
YTOKINPRODUKTION
DURCH
PBMZ
.
39
3.2.2
C
P
G
SPEZIFISCHE
Z
YTOKINSEKRETION
DURCH
M
ONOZYTEN
.
43
3.2.3
P
RIMING
DURCH
IFNY
.
45
3.2.4
E
FFEKTE
G
REICHER
S
EQUENZEN
.
46
3.2.5
S
YNERGISMUS
MIT
LPS
.
48
3.2.6
E
XPRESSION
VON
KOSTIMULATORISCHEN
UND
A
NTIGEN
PRAESENTIERENDEN
O
BERFLAECHENMOLEKUELEN
.
50
3.2.7
B
LOCKIERBARKEIT
DER
Z
YTOKINFREISETZUNG
DURCH
C
HLOROQUIN
.
52
33
E
FFEKTE
AUF
DENDRITISCHE
Z
ELLEN
.
_
.
_
_
.
_
_
53
3.3.1
M
YELOIDE
DZ
.
54
3.3.1.1
C
HARAKTERISIERUNG
DER
GENERIERTEN
Z
ELLEN
.
54
3.3.1.2
E
FFEKTE
DER
C
P
G-ODN
AUF
MYELOIDE
DZ
.
55
3.3.2
L
YMPHOIDE
CD11
C
-DZ
.
57
3.3.2.1
V
OR
VERSUCHE
IN
PBMZ
.
57
33.2.2
I
SOLIERUNG
UND
C
HARAKTERISIERUNG
DER
LYMPHOIDEN
CD1
LC
DZ
.
60
3.3.2.3
C
P
G-ODN
UND
-
BAKTERIELLE
DNA
VERHINDERN
A
POPTOSE
DER
DZ
.
62
3.3.2.4
C
P
G-DNA
INDUZIERTE
MORPHOLOGISCHE
V
ERAENDERUNGEN
DER
CD11C
LYMPHOIDEN
DZ
.
64
33.2.5
A
KTIVIERUNG
DER
CD1
LC
LYMPHOIDEN
DZ
DURCH
C
P
G-DNA
.
64
3.3.2.6
Z
YTOKINFREISETZUNG
REINER
LYMPHOIDER
CD1
LC
DZ
.
67
33.2.7
E
INFLUSS
VON
IFN
T
YP
I
AUF
B-Z
ELL
-P
ROLIFERATION
.
69
3.4
I
NDIREKTE
E
FFEKTE
VON
C
P
G-O
LIGONUKLEOTIDEN
AUF
Z
ELLEN
DES
I
MMUNSYSTEMS
.
71
3.4.1
C
P
G-O
LIGONUKLEOTIDE
AKTIVIEREN
T-Z
ELLEN
NICHT
DIREKT
.
71
3.4.2
C
P
G
ABHAENGIGE
S
TIMULATION
VON
T-Z
ELLEN
UND
NK
Z
ELLEN
IN
PBMZ
.
72
3.4.3
E
INFLUSS
VON
C
P
G-O
LIGONUKLEOTID
AUF
T
H
1/
T
H
2
A
USPRAEGUNG
.
74
IV
4
DISKUSSION
76
4.1
D
AS
C
P
G-M
OTIV
UND
C
P
G-O
LIGONUKLEOTIDE
ALS
M
ODELL
FUER
BAKTERIELLE
DNA
.
76
4.2
C
P
G-DNA
ALS
M
ITOGEN
FUER
B-L
YMPHOZYTEN
------------------------------------------
79
43
D
IE
Z
IELZELLEN
FUER
C
P
G-DNA
SIND
A
NTIGEN
PRAESENTIERENDE
Z
ELLEN
.
_
81
4.3.1
I
NDUKTION
VON
A
NTIGEN
PRAESENTIERENDEN
UND
KOSTIMULATORISCHEN
O
BERFLAECHENMOLEKUELEN
.
82
4.3.2
C
P
G-DNA
INDUZIERTE
Z
YTOKINSEKRETION
.
83
4.4
L
YMPHOIDE
CDLLC
DENDRITISCHE
Z
ELLEN
ALS
Z
IELZELLEN
FUER
P
ATHOGEN
ASSOZIIERTE
MOLEKULARE
MUSTER
.
86
4.5
L
YMPHOIDE
CDLLC
DZ
IM
V
ERGLEICH
ZU
MYELOIDEN
DZ
_
.
_
.
88
5
ZUSAMMENFASSUNG
91
6
LITERATURVERZEICHNIS
92 |
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