Differentielle Expression und Regulation humaner Muzingene in der Magenmukosa und in Magentumorzellen:
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
I
1 EINLEITUNG 1-9
1.1 STRUKTUR DER MUEZINE 1-4
1.2 FUNKTION DER MUEZINE IM GASTROINTESTINALTRAKT 4-5
1.3 KLASSIFIKATION DER MUEZINE UND GEWEBSSPEZIFISCHE EXPRESSION 5-6
1.4 GEWEBSSPEZIFISCHE MUZINEXPRESSION IM MAGEN 7
1.5 VERAENDERUNGEN DER STRUKTUR UND EXPRESSION VON MUEZINEN IN 7
PATHOPHYSIOLOGISCHEN ZUSTAENDEN
1.5.1 MUZINEXPRESSION BEI MALIGNER ENTARTUNG 7-8
1.5.2 MUZINEXPRESSION BEI ENTZUENDUNG 8
1.6 ZIELSETZUNG UND FRAGESTELLUNG 9
2 MATERIAL UND METHODEN 10-37
2.1 GERAETE 10
2.2 ALLGEMEINE CHEMIKALIEN 10-11
2.3 ZELLINIEN 11
2.4 HUMANES MAGENGEWEBE AUS ANTRUMBIOPSIEN 11
2.5 PRIMAERKULTUR HUMANER MAGENEPITHELZELLEN 12
2.5.1 MATERIALIEN 12
2.5.2 ISOLIERUNG HUMANER MAGENEPITHELZELLEN 12
2.5.3 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL UND VITALITAET DER HUMANEN 13
MAGENEPITHELZELLEN
2.5.4 KULTIVIERUNG VON HUMANEN MAGENEPITHELZELLEN 13
2.6 RNA PRAEPARATION 14
2.6.1 MATERIALIEN 14
2.6.2 RNA PRAEPARATION AUS ZELLINIEN UND PRIMAERKULTUR 14
2.6.3 RNA PRAEPARATION AUS BIOPSIEN 14
2.6.4 BESTIMMUNG DER QUANTITAET DER RNA 15
2.6.5 BESTIMMUNG DER QUALITAET DER RNA 15
2.7 REVERSE TRANSKRIPTION-POLYMERASE-KETTENREAKTION 16
(RT-PCR)
2.7.1 MATERIALIEN 16-17
2.7.2 REVERSE TRANSKRIPTION (RT) 18
2.7.3 POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 18
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/959764984
INHALTSVERZEICHNIS
II
2.7.4 OPTIMIERUNG DER POLYMERASE-KETTENREAKTION 19-20
2.7.4.1 ANNEALING-TEMPERATUREN 20-21
2.7.4.2 MGCL
2
-KONZENTRATION 21
2.7.4.3 TAQ-DNA-POLYMERASE 21
2.7.4.4 PRIMER-OIIGONUKLEOTIDE 22
2.7.4.5 ZYKLUSZAHL 22
2.7.4.6 VERDUENNUNG DER CDNA 23
2.7.5 DURCHFUEHRUNG DER PCR 24
2.7.6 DUPLEX-PCR 25
2.7.7 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 25
2.8 NORTHEM-BLOT MIT DIGOXIGENIN MARKIERTEN CDNA-SONDEN 25
2.8.1 MATERIALIEN 26-27
2.8.2 RNA-GELELEKTROPHORESE - 27
2.8.3 RNA TRANSFER 27
2.8.4 MARKIERUNG DER SONDEN 28
2.8.5 HYBRIDISIERUNG 28-29
2.8.6 CHEMILUMINESZENZ-DETEKTION 29
2.9 WESTEM-BLOT 30
2.9.1 MATERIALIEN 30
2.9.2 HOMOGENISATION 31
2.9.3 PROTEINBESTIMMUNG NACH BRADFORD 31
2.9.4 NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE 31
(SDS-PAGE)
2.9.5 ELEKTROTRANSFER 32
2.9.6 HYBRIDISIERUNG 32
2.9.7 CHEMILUMINESZENZ-DETEKTION 32
2.10 IMMUNHISTOLOGIE UND IMMUNZYTOCHEMIE 3 3
2.10.1 MATERIALIEN 33-34
2.10.2 GEWEBEFIXATION UND - BEARBEITUNG 34
2.10.3 ENTPARAFFINIERUNG UND REHYDRIERUNG 34
2.10.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG 34-35
2.10.5 ZYTOSPOTS VON TUMORZELLEN 36
2.10.6 IMMUNZYTOCHEMISCHE DOPPELFAERBUNG 36
2.11 STATISTISCHE ANALYSE 37
INHALTSVERZEICHNIS
_M
3 ERGEBNISSE 38-55
3.1 MUZIN MRNA-EXPRESSION IM HUMANER MAGENMUKOSA UND 38
PRIMAERKULTUREN HUMANER MAGENMUKOSAZELLEN
3.2 MUZIN MRNA-EXPRESSION IN TUMORZELLINIEN 39-41
3.3 MUZIN-PROTEINEXPRESSION IM HUMANEN MAGENGEWEBE 41
3.3.1 WESTEM-BLOT ANALYSE DER MUZIN-PROTEINEXPRESSION IM MAGEN 41 -42
UND KOLON
3.3.2 IMMUNHISTOCHEMISCHE DETEKTION UND LOKALISATION VON MUEZINEN 42-44
IN MAGENBIOPSIEN
3.3.3 IMMUNZYTOCHEMISCHE DETEKTION VON MUEZINEN IN TUMORZELLEN 44-45
3.4 EINFLUSS DER KULTURDAUER AUF DIE MRNA-EXPRESSION VON
MUC1,
46-48
MUC2
UND
MUC5AC
IN TUMORZELLEN.
3.5 EINFLUSS VON TNFA AUF DIE MUZIN MRNA-EXPRESSION IN DER 48
MAGENTUMORZELLINIE 2957/90
3.5.1 ZEITABHAENGIGER EINFLUSS VON TNFA AUF DIE EXPRESSION VON
MUC2
48-49
3.5.2 EINFLUSS VON 3 STUENDIGER INKUBATION MIT TNFA AUF DIE MRNA- 50-53
EXPRESSION VON
MUCJ, MUC2
UND
MUC5AC
3.6 EINFLUSS VON TNFA AUF DIE MUZIN-PROTEINEXPRESSION IN 54-55
MAGENTUMORZELLEN
4 DISKUSSION, 56-66
4.1 VALIDIERUNG DER METHODEN ZUR DETEKTION DER MUZINEXPRESSION 56-57
4.2 MUZINEXPRESSION IN HUMANER MAGENMUKOSA 58-59
4.3 MUZINEXPRESSION IN PRIMAERKULTUREN HUMANER MAGENMUKOSAZELLEN 59
4.4 MUZINEXPRESSION IN TUMORZELLEN 60-62
4.5 EINFLUSS DER ZELLKULTURBEDINGUNGEN AUF DIE MUZINGENEXPRESSION 62-63
4.6 EINFLUSS VON TNFA AUF DIE MUZIN MRNA-EXPRESSION 63-65
4.7 SCHLUSSFOLGERUNG 66
INHALTSVERZEICHNIS
IV
5 ZUSAMMENFASSUNG 67
6 LITERATURVERZEICHNIS 68-77
7 ANHANG 78-86
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 78-79
ABBILDUNGEN 80-81
TABELLEN 81
LEBENSLAUF 82
PUBLIKATIONSLISTE 83-84
DANKSAGUNGEN 85
ERKLAERUNG 86 |
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