Untersuchungen zum Mechanismus der endothelialen Protektion durch Stickstoffmonoxid:
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
.
4
1.
EINLEITUNG
.
5
1.1
STICKSTOFFMONOXID
(NO)
.
5
1.1.1
EIGENSCHAFTEN
UND
BIOSYNTHESE
VON
NO
.
5
1.1.2
PHYSIOLOGISCHE
UND
PATHOPHYSIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
VON
NO
.
6
1.1.3
ANTIOXIDATIVE
UND
ZELLPROTEKTIVE
EFFEKTE
VON
NO
.
8
1.2
ATHEROSKLEROSE
.
8
1.2.1
PATHOGENESE
DER
ATHEROSKLEROSE
.
8
1.2.2
ENDOTHELFUNKTION
UND
ATHEROSKLEROSE
.
9
1.2.3
REAKTIVE
SAUERSTOFFSPEZIES
UND
ATHEROSKLEROSE
.
10
1.3
OXIDATIVER
STRESS
UND
ZELLULAERE
ANTIOXIDANTIEN
.
11
1.3.1
MOEGLICHKEITEN
DES
ZELLULAEREN
SCHUTZES
.
11
1.3.2
DIE
INDUZIERBARE
HAEMOXYGENASE
.
12
2.
PROBLEMSTELLUNG
.
14
2.1
WELCHER
MECHANISMUS
LIEGT
DER
ENDOTHELPROTEKTIVEN
WIRKUNG
VON
NO
ZUGRUNDE?
.
14
3.
METHODEN
UND
MATERIAL
.
16
3.1
ZELLKULTUR
.
16
3.1.1
KULTIVIERUNG
DER
ENDOTHELZELLEN
.
16
3.1.2
VIABILITAETSASSAY
.
16
3.1.3
NITRITBESTIMMUNG
NACH
GRIESS
.
17
3.1.4
LDH-ASSAY
.
17
3.1.5
BESTIMMUNG
DER
CYCLISCHEN
NUCLEOTIDE
.
18
3.2
WESTEM-BLOT-ANALYSE
.
19
3.2.1
INKUBATIONSPROTOKOLL
.
19
3.2.2
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
.
19
3.2.3
GELELEKTROPHORESE,
WESTEM-TRANSFER
UND
DETEKTION
.
19
3.3
BESTIMMUNG
DER
HAEMOXYGENASE-AKTIVITAET
.
20
3.3.1
INKUBATIONSPROTOKOLL
.
20
3.3.2
PRAEPARATION
VON
LEBERCYTOSOL
.
21
3.3.3
BESTIMMUNG
DES
BILIRUBINS
.
21
3.4
VERWENDUNG
VON
ANTISENSE-OLIGONUCLEOTIDEN
.
22
3.5
MATERIAL
.
23
3.6
LOESUNGEN
.
24
3.7
STATISTIK
.
25
4.
ERGEBNISSE
.
26
4.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ENDOTHELIALEN
TOXIZITAET
VON
TNF-A
.
26
4.1.1
ZELLTOXISCHE
WIRKUNG
VON
TNF-A
.
26
4.1.2
LDH-FREISETZUNG
NACH
INKUBATION
MIT
TNF-A
.
27
4.2
EFFEKTE
VON
NO
AUF
DIE
TNF-A-INDUZIERTE
TOXIZITAET
IN
ENDOTHELZELLEN
.
29
4.2.1
KONZENTRATIONSABHAENGIGER
EFFEKT
DER
NO-DONOREN
.
29
4.2.2
EINFLUSS
DES
NO-RADIKALFAENGERS
PTIO
AUF
DEN
PROTEKTIVEN
NO-EFIFEKT
.
30
4.2.3
EFFEKT
DES
NO-DONORS
SIN
1
IM
VERGLEICH
MIT
MOLSIDOMIN
UND
SIN
1C
.
31
4.2.4
ZEITABHAENGIGKEIT
DER
PROTEKTIVEN
NO-WIRKUNG
.
32
4.2.5
ZEITABHAENGIGKEIT
DER
FREISETZUNG
VON
NO
AUS
DEN
DONOREN
.
33
4.2.6
ZUSAMMENFASSUNG.
35
4.3
DIE
ROLLE
DER
CYCLISCHEN
NUCLEOTIDE
CGMP
UND
CAMP
.
36
4.3.1
EINFLUSS
EINES
INHIBITORS
DER
LOESLICHEN
GUANYLYLCYCLASE
AUF
DEN
PROTEKTIVEN
EFFEKT
VON
NO
.
36
4.3.2
BESTIMMUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
CGMP-SPIEGEL
NACH
STIMULATION
MIT
NO-DONOREN
.
37
4.3.3
EFFEKT
VON
MEMBRANGAENGIGEN
CGMP-ANALOGA
AUF
DIE
TNF-A-INDUZIERTE
TOXIZITAET
.
38
4.3.4
EINFLUSS
EINES
INHIBITORS
DER
ADENYLYLCYCLASE
AUF
DEN
PROTEKTIVEN
EFFEKT
VON
NO.
40
4.3.5
BESTIMMUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
CAMP-SPIEGEL
NACH
STIMULATION
MIT
NO-DONOREN
.
41
4.3.6
EFFEKT
VON
MEMBRANGAENGIGEN
CAMP-ANALOGA
AUF
DIE
TNF-A-INDUZIERTE
TOXIZITAET
.
42
4.3.7
EFFEKT
DES
ADENYLYLCYCLASE-AKTIVATORS
FORSKOLIN
AUF
DIE
TNF-A-INDUZIERTE
TOXIZITAET
.
44
4.3.8
EINFLUSS
VON
PROTEINKINASE-INHIBITOREN
AUF
DEN
PROTEKTIVEN
NO-EFFEKT
.
45
4.3.9
ZUSAMMENFASSUNG
.
47
4.4
ROLLE
DER
INDUZIERBAREN
HAEMOXYGENASE
BEI DER
VERMITTLUNG
DER
NO-ABHAENGIGEN
ENDOTHELPROTEKTION
.
48
4.4.1
EINFLUSS
DES
TRANSLATIONSBLOCKERS
CYCLOHEXIMID
AUF
DIE
CYTOPROTEKTION
DURCH
NO
.
48
4.4.2
EINFLUSS
EINES
HAEMOXYGENASE-INHIBITORS
AUF
DIE
NO-ABHAENGIGE
ENDOTHELPROTEKTION.
49
2
INHALTSVERZEICHNIS
4.4.3
KONZENTRATIONSABHAENGIGER
EFFEKT
DER
NO-DONOREN
AUF
DIE
HAEMOXYGENASE
PROTEINEXPRESSION
.
51
4.4.4
ZEITABHAENGIGER
EFFEKT
DER
NO-DONOREN
AUF
DIE
HAEMOXYGENASE
PROTEINEXPRESSION
.
52
4.4.5
EINFLUSS
DES
NO-RADIKALFAENGERS
PTIO
UND
DES
INHIBITORS
DER
LOESLICHEN
GUANYLYL
CYCLASE
ODQ
AUF
DIE
SIN
1
-INDUZIERTE
HAEMOXYGENASE-PROTEINEXPRESSION
.
53
4.4.6
EINFLUSS
DER
SUPEROXIDDISMUTASE
AUF
DIE
SIN-L-INDUZIERTE
HAEMOXYGENASE
PROTEINEXPRESSION
.
54
4.4.7
EFFEKT
MEMBRANGAENGIGER
CGMP-ANALOGA
AUF
DIE
HAEMOXYGENASE
PROTEINEXPRESSION
.
55
4.4.8
EFFEKT
DES
AKTIVATORS
DER
PARTIKULAEREN
GUANYLYLCYCLASE
ANP
AUF
DIE
HAEMOXYGENASE-PROTEINEXPRESSION
.
57
4.4.9
EFFEKT
VON
8-BR-CAMP
AUF
DIE
HAEMOXYGENASE-PROTEINEXPRESSION.
58
4.4.10
EFFEKT
VON
SIN-1
UND
8-BR-CGMP
AUF
DIE
HAEMOXYGENASE-AKTIVITAET
.
59
4.4.11
EFFEKT
VON
HAEMIN
UND
BILIRUBIN
AUF
DIE
TNF-A-INDUZIERTE
TOXIZITAET
.
61
4.4.12
EINFLUSS
VON
ANTISENSE
UND
SENSE-OLIGONUCLEOTIDEN
AUF
DIE
SIN-L
INDUZIERTE
HAEMOXYGENASE-PROTEINEXPRESSION
.
62
4.4.13
EINFLUSS
DER
OLIGONUCLEOTIDE
AUF
DIE
SIN-1
UND
8-BR-CGMP-VERMITTELTE
CYTOPROTEKTION
.
63
4.4.14
ZUSAMMENFASSUNG
.
65
5.
DISKUSSION
.
66
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
78
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
80
8.
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
96
9.
DANK
.
98 |
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