Isolierung und Charakterisierung eines Basalmembran-assozierten Heparansulfat-Proteoglykans aus humanen Knorpel:
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DER
PROTEOGLYKANE
1
1.1.1
STRUKTUR
DER
GLYCOSAMINOGLYCAN-KETTEN
3
1.1.1.1
HYALURONAN
3
1.1.1.2
HEPARANSULFAT
UND
HEPARIN
3
1.1.1.3
CHONDROITINSULFAT
UND
DERMATANSULFAT
4
1.1.1.4
KERATANSULFAT
6
1.1.2
CORE-PROTEINE
6
1.1.3
FUNKTION
DER
PROTEOGLYKANE
13
1.1.3.1
BETEILIGUNG
DER
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYCANE
AM
AUFBAU
VON
BASALMEMBRANENEN
13
1.1.3.2
BETEILIGUNG
DER
PROTEOGLYCANE
AN
ZELL-DIFFERENZIERUNG
UND
ZELL
PROLIFERATION
15
1.2
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DES
GELENKKNORPELS
19
2.
ZIEL
DER
ARBEIT
22
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
23
3.1.1
CHEMIKALIEN
23
3.1.2
ZUSAMMENSETZUNG
DER
FUER
BIOCHEMISCHE
UND
IMMUNCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGEN
EINGESETZTEN
PUFFER
24
3.2
ANALYTISCHE
METHODEN
UND
GERAETE
26
3.3
METHODEN
27
3.3.1
KULTIVIERUNG
DER
HUMANEN
CHONDROSARKOM-ZELL-LINIE
HCS
2/8
27
3.3.2
IMMUNHISTOCHEMISCHE
ANFAERBUNG
DES
HUMANEN
KNORPELS
UND
DER
CHONDROSARKOM-ZELL-LINIE
HCS
2/8
27
3.3.3
EXTRAKTION
DER
PROTEOGLYKANE
27
3.3.4
CHROMATOGRAPHISCHE
AUFTRENNUNG
DER
PROTEOGLYCANE
DES
KNORPELS
28
3.3.4.1
GELCHROMATOGRAPHIE
AN
SEPHADEX
G-25
28
3.3.4.2
ANIONEN-AUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
AN
SEPHAROSE
Q
FAST
FLOW
28
3.3.4.3
CHROMATOGRAPHIE
AN
HYDROXYLAPATIT
29
3.3.5
CHARAKTERISIERUNG
DER
PROTEOGLYCANE
29
3.3.5.1
SDS-POLYACRYLAMID-GEL-ELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
29
3.3.S.2
ALCIAN
BLAU-SILBERFAERBUNG
VON
POLYACRYLAMID-GELEN
30
3.3.5.3
WESTERN-BLOT
NACH
SDS-ELEKTROPHORESE
32
3.3.6
IMMUNCHEMISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEOGLYCANEN
32
3.3.6.1
IMMUNCHEMISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEOGLYCANEN
UND
PROTEINEN
NACH
BLOT AUF
KATIONISCH
GELADENE
NYLON
ODER
NITROCELLULOSE-MEMBRANEN
32
3.3.6.2
SLOT-BLOT
ENZYM-IMMUNO-ASSAY
34
3.3.6.3
ENZYM-IMMUNO-ASSAYS
ZUR
SEMIQUANTITATIVEN
BESTIMMUNG
VON
AGGRECAN
UND
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYCAN
35
4.
ERGEBNISSE
36
4.1
ISOLIERUNG,
BIOCHEMISCHE
UND
IMMUNCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
PROTEOGLYCANE
DES
KNORPELS
36
4.1.1
EXTRAKTION
DER
PROTEOGLYCANE
36
4.1.2
CHROMATOGRAPHISCHE
AUFTRENNUNG
DES
PROTEOGLYCAN-EXTRAKTES
36
4.1.2.1
ANIONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
AN
SEPHAROSE
Q
FF
36
4.1.2.2
HYDROXYLAPATIT-CHROMATOGRAPHIE
39
4.1.3
CHARAKTERISIERUNG
DES
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYCANS
39
4.2.1
IMMUNHISTOCHEMISCHER
NACHWEIS
DES
KLEINEN
BASALMEMBRAN-ASSOZIIERTEN
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYCANS
IM
HUMANEN
KNORPEL
42
4.2.2
IMMUNCYTOCHEMISCHER
NACHWEIS
DES
KLEINEN
BASALMEMBRAN
ASSOZIIERTEN
HEPARANSULFAT-PROTEOGLYCANS
IN
DER
HUMANEN
CHONDROSARKOM-ZELL-LINIE
HCS-2/8
44
5.
DISKUSSION
47
6.
ZUSAMMENFASSUNG
51
7.
LITERATURVERZEICHNIS
52 |
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