Glutathion-S-Transferasen in Weizen: Modulation der Aktivität und Charakterisierung von Isoenzymen
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|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Friedland
Bielefeld
2000
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | IX, 141 S. graph. Darst. : 21 cm |
| ISBN: | 3898330141 |
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I
NHALTSVERZEICHNIS
L
I
NHALTSVERZEICHNIS
I
E
INLEITUNG
.
1
1
DER
ENTGIFTUNGSSTOFFWECHSEL
HOEHERER
PFLANZEN
ALS
GRUNDLAGE
FUER
DIE
HERBIZIDTOLERANZ
UND
-SELEKTIVITAET
.
1
2
METABOLISIERUNG
VON
HERBIZIDEN
VIA
GLUTATHIONKONJUGATION
.
3
3
DIE
SUPERFAMILIE
DER
GLUTATHION-S-TRANSFERASEN
.
5
4
WIRKUNG
VON
SAFENERN
AUF
DIE
METABOLISIERUNG
VON
HERBIZIDEN
.
7
5
ZIELSETZUNG
.
9
II
M
ATERIAL
UND
M
ETHODEN
.
10
1
SUSPENSIONSZELLKULTUR
.
10
1.1
KULTIVIERUNG
UND
ERNTE
EINER
HETEROTROPHEN
SUSPENSIONSZELLKULTUR
VON
WEIZEN
.
10
1.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
WEIZENZELLKULTUR
.
10
2
PFLANZENMATERIAL
.
11
2.1
ANZUCHT
VON
WEIZENKEIMLINGEN
.
,11
2.2
HERBIZID/SAFENER-BEHANDLUNG
DER
WEIZENKEIMLINGE
.
11
2.3
EMTE
DER
WEIZENKEIMLINGE
.
12
3
BESTIMMUNG
DES
GLUTATHIONGEHALTES
.
12
3.1
THIOLEXTRAKTION
UND
DERIVATISIERUNG
.
12
3.2
HPLC-ANALYSE
DER
GLUTATHIONDERIVATE
.
13
4
GEWINNUNG
VON
PFLANZENEXTRAKTEN
ZUR
BESTIMMUNG
DER
GST-AKTIVITAETEN
.
14
4.1
AUFSCHLUSS
DES
PFLANZENMATERIALS
.
14
4.2
HERSTELLUNG
VON
MIKROSOMENPRAEPARATIONEN
.
14
4.3
HERSTELLUNG
VON
CYTOSOLISCHEN
EXTRAKTEN
.
14
5
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTS
.
16
6
BESTIMMUNG
VON
GST-AKTIVITAETEN
MIT
VERSCHIEDENEN
SUBSTRATEN
.
16
6.1
PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DER
GST-AKTIVITAET
.
16
6.1.1
MODELLSUBSTRATE
.
16
6.1.2
4-HYDROXYALKENALE
.
18
6.1.3
HYDROPEROXIDE
.
18
6.1.3.1
SYNTHESE
VON
LINOLSAEURE-HYDROPEROXID
.
18
6.1.3.2
ENZYMTEST
ZUR
BESTIMMUNG
DER
GLUTATHION-PEROXIDASEAKTIVITAET
.
19
6.1.3.3
IDENTIFIZIERUNG
DER
REAKTIONSPRODUKTE
.
20
6.2
BESTIMMUNG DER
GST-AKTIVITAET
MIT
14
C-MARKIERTEN
SUBSTRATEN
.
20
6.2.1
BESTIMMUNG
DER
GST-AKTIVITAET
FUER
DIE
KONJUGATION
VON
METOLACHLOR
.
20
6.2.1.1
ENZYMTEST
.
20
N
I
NHALTSVERZEICHNIS
6.2.1.2
IDENTIFIZIERUNG
DES
GLUTATHIONKONJUGATS
VON
METOLACHLOR
DURCH
DUENN
SCHICHTCHROMATOGRAPHIE
.
21
6.2.2
GLUTATHIONKONJUGATION
VON
FRAZW-ZIMTSAEURE
.
22
6.2.2.1
ENZYMTEST
.
22
6.2.2.2
HPLC-ANALYSE
DER
GLUTATHIONKONJUGATE
VON
TRANS-ZIMTSAEURE
.
22
6.3
BESTIMMUNG
DER
GST-AKTIVITAET
FUER
DIE
KONJUGATION
VON
FENOXAPROP-ETHYL
MITTELS
HPLC
.
23
6.3.1
ENZYMTEST
.
23
6.3.2
QUANTIFIZIERUNG
DES
GLUTATHIONKONJUGATS
MITTELS
HPLC
.
24
6.4
BESTIMMUNG
VON
KINETISCHEN
KONSTANTEN
.
24
7
REINIGUNG
VON
GST-ISOENZYMEN
.
25
7.1
REINIGUNG
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-ISOENYZME
.
25
7.1.1
SOLUBILISIERUNG
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-AKTIVITAET
.
25
7.1.2
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
AUF
GLUTATHION-AGAROSE
.
26
7.1.3
PRAEPARATIVE
NATIVE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
26
7.2
REINIGUNG
LOESLICHER
GST-ISOENZYME
DURCH
ANIONENAUSTAUSCH
UND
AFFINITAETS
CHROMATOGRAPHIE
.
27
7.3
EINFLUSS
VON
KALZIUM
AUF
DIE
VERTEILUNG
CYTOSOLISCHER
UND
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-
ISOENZYME
.
29
8
ELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
.
29
8.1
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
29
8.1.1
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
29
8.1.2
NATIVE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
30
8.1.3
BLUE
IVARIVE-ELEKTROPHORESE
.
30
8.1.4
ZWEIDIMENSIONALE
ELEKTROPHORESE
.
30
8.2
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
.
31
8.3
FAERBEMETHODEN
.
32
8.3.1
SILBERFAERBUNG
.
32
8.3.2
COOMASSIE-FAERBUNG
.
32
9
MIKROSEQUENZIERUNG
EINES
GEREINIGTEN
GST-ISOENZYMS
.
33
9.1
PRAEPARATIVER
WESTERN
BLOT
.
33
9.2
SEQUENZIERUNG
VON
PEPTIDFRAGMENTEN
.
34
10
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
35
10.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
.
35
10.2
QUANTIFIZIERUNG
UND
REINHEITSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
35
10.3
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
35
10.3.1
GELELEKTROPHORETISCHE
ANALYSE
VON
GESAMT-RNA
.
35
10.3.2
GELELEKTROPHORETISCHE
ANALYSE
VON
DNA
.
36
10.4RT-PCR
.
36
10.4.1
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
,
.
36
10.4.2
PCR
.
.
37
10.5
ISOLIERUNG
DES
PCR-FRAGMENTS
AUS
DEM
AGAROSEGEL
.
38
I
NHALTSVERZEICHNIS
M
10.6
KLONIERUNG
VON
AMPLIFIKATIONSPRODUKTEN
.
38
10.7
KULTIVIERUNG
VON
E.
COLI
.
38
10.8
CDNA-SEQUENZIERUNG
.
39
10.9
SEQUENZANALYSE
.
39
HI
E
RGEBNISSE
.
40
1
ZELLULAERER
GLUTATHIONGEHALT
.
40
2
CHARAKTERISIERUNG
DER
WEIZENZELLKULTUR
.
41
2.1
PH-WERT
UND
LEITFAEHIGKEIT
DES
KULTURMEDIUMS,
WACHSTUMSKURVE
.
41
2.2
VERLAUF
DER
GST-AKTIVITAET
UEBER
DEN
KULTIVIERUNGSZEITRAUM
.
43
2.3
VERLAUF
DES
GLUTATHIONGEHALTS
UEBER
DEN
KULTIVIERUNGSZEITRAUM
.
44
3
GLUTATHIONKONJUGATION
VON
TRANS-ZIMTSAEURE
.
45
4
NACHWEIS DER
GST-AKTIVITAET
FUER
DIE
KONJUGATION
VON
FENOXAPROP-ETHYL
.
46
4.1
HPLC-ANALYSE
.
47
4.2
PROTEIN
UND
ZEITABHAENGIGKEIT
DER
GST-KATALYSIERTEN
GLUTATHIONKONJUGATION
VON
FENOXAPROP-ETHYL
.
49
5
LOESLICHE
UND
MEMBRANASSOZIIERTE
GST-AKTIVITAET
IN
WEIZENZELLEN
UND
-KEIMLINGEN
.
50
6
EINFLUSS
VON
HERBIZID
UND
SAFENER-BEHANDLUNG
AUF
LOESLICHE
UND
MEMBRANASSOZIIERTE
GST-AKTIVITAETEN
IN
BLAETTERN
VON
WEIZENKEIMLINGEN
.
51
6.1
WIRKUNG
VON
BUTYLAT,
DICHLORMID
UND
FENCHLORAZOL-ETHYL
AUF
DIE
GST-AKTIVITAET
.
51
6.2
EINFLUSS
VON
FENOXAPROP-ETHYL
UND
FENCHLORAZOL-ETHYL
AUF
DIE
GST-AKTIVITAET
.
53
6.2.1
VERLAUF
DER
GST-AKTIVITAETEN
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
INKUBATIONSZEIT
NACH
DER SAFENERBEHANDLUNG
.
53
6.2.2
ABHAENGIGKEIT
DER
GST-AKTIVITAET
VON
DER
HERBIZID
UND
SAFENERKONZENTRATION
.
55
6.2.3
EFFEKT
DER
KOMBINATION
VON
HERBIZID
UND
SAFENER
AUF
DIE
GST-AKTIVITAET
.
59
6.3
VERTEILUNG
LOESLICHER
UND
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-AKTIVITAETEN
IN
BLAETTERN
VON
WEIZENKEIMLINGEN
.
60
7
REINIGUNG
VON
GST-ISOENZYMEN
AUS
WEIZENZELLEN
.
61
7.1
REINIGUNG
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-ISOENZYME
.
61
7.1.1
SOLUBILISIERUNG
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-ISOENZYME
.
61
7.1.2
REINIGUNG
VON
MEMBRANASSOZIIERTEN
GST-ISOENZYMEN
DURCH
AFFINITAETS
CHROMATOGRAPHIE
.
64
7.1.3
TRENNUNG
MEMBRANASSOZIIERTER
ISOENZYME
MITTELS
PRAEPARATIVER,
NATIVER
PAGE
.
66
7.1.4
ZUSAMMENFASSUNG
DER
REINIGUNG
DES
MEMBRANASSOZIIERTEN
GST-ISOENZYMS
MAGSTL-1
AUS
WEIZENZELLEN
.
67
7.2
REINIGUNG
LOESLICHER
GST-ISOENZYME
AUS
WEIZENZELLEN
.
69
7.2.1
TRENNUNG
LOESLICHER
GST-ISOENZYME
DURCH
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
.
69
7.2.2
REINIGUNG
LOESLICHER
GST-ISOENZYME
DURCH
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
70
8
MOLEKULARE
UND
ENZYMATISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
MEMBRANASSOZIIERTEN
UND
LOESLICHEN
GST-ISOENZYMEN
.
72
IV
INHALTSVERZEICHNIS
8.1
BESTIMMUNG
DES
MOLEKULARGEWICHTS
.
73
8.1.1
BESTIMMUNG
DES
NATIVEN
MOLEKULARGEWICHTS
VON
MAGSTL-1
DURCH
BLUE
MZRIVE-ELEKTROPHORESE
.
73
8.1.2
BESTIMMUNG
DES
MOLEKULARGEWICHTS
DER
UNTEREINHEITEN
VON
MAGST
1-1
DURCH
2D-ELEKTROPHORESE
.
74
8.1.3
MOLEKULARGEWICHTE
DER
UNTEREINHEITEN
CYTOSOLISCHER
ISOENZYME
.
75
8.2
BESTIMMUNG
DES
ISOELEKTRISCHEN
PUNKTES
FUER
MAGSTL-1
.
75
8.3
KATALYTISCHE
EIGENSCHAFTEN
LOESLICHER
UND
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-ISOENZYME
.
76
8.3.1
TEMPERATUROPTIMUM
UND
AKTIVIERUNGSENERGIE
VON
MAGSTL-1
.
77
8.3.2
PH-ABHAENGIGKEIT
DER
GST(CDNB)-AKTIVITAET
VON
MAGSTL-1
.
78
8.3.3
SUBSTRATSPEZIFITAET
LOESLICHER
UND
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-ISOENZYME
.
79
8.3.4
BESTIMMUNG
DER
KINETISCHEN
KONSTANTEN
KM
UND
VM,
X
VON
MEMBRANASSOZIIER
TEN
UND
LOESLICHEN
ISOENZYMEN
.
81
8.3.4.1
KM
UND
V^
VON
MEMBRANASSOZIIERTEN
GST-ISOENZYMEN
NACH
DER
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHEN
REINIGUNG
.
81
8.3.4.2
BESTIMMUNG
DER
KINETISCHEN
KONSTANTEN
FIIR
MAGSTL-1
.
81
8.3.4.3
BESTIMMUNG
DER
KINETISCHEN
KONSTANTEN
DES
LOESLICHEN
HAUPTISOENZYMS
.
83
8.4
ZUSAMMENFASSUNG
DER
BIOCHEMISCHEN
CHARAKTERISIERUNG
VON
MAGSTL-1
.
84
9
LOKALISIERUNG
UND
SUBZELLULAERE
VERTEILUNG
VON
GST-ISOENZYMEN
.
85
9.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
MEMBRANASSOZIATION
VON
GST-ISOENYZMEN
.
85
9.1.1
SOLUBILISIERUNG
VON
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-AKTIVITAET
DURCH
CHAOTROPE
SUBSTANZEN
.
85
9.1.2
IDENTIFIZIERUNG
VERSCHIEDENER
GST-ISOENZYME
DURCH
SCHRITTWEISE
SOLUBILI
SIERUNG
.
86
9.2
VERGLEICH
MEMBRANASSOZIIERTER
GST
VON
WEIZENZELLEN
UND
-KEIMLINGEN
.
87
9.3
SUBZELLULAERE
VERTEILUNG
CYTOSOLISCHER
UND
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-ISOENZYME
.
88
9.3.1
VERGLEICH
DER
ISOENZYMMUSTER
VON
LOESLICHER
UND
MEMBRANASSOZIIERTER
GST
.
88
9.3.2
EINFLUSS
VON
KALZIUM
AUF
DIE
VERTEILUNG
LOESLICHER
UND
MEMBRANASSOZIIERTER
GST-ISOENZYME
ZWISCHEN
CYTOSOLISCHER
UND
MIKROSOMALER
ZELLFRAKTION
.
90
10
SEQUENZIERUNG
DES
MEMBRANASSOZIIERTEN
GST-ISOENZYMS
MAGSTL-1
.
92
10.1
MIKROSEQUENZIERUNG
VON
PEPTIDEN
GEREINIGTER
MAGSTL-1
.
92
10.2
SEQUENZIERUNG
EINES
CDNA-FRAGMENTS
VON
MAGSTL
.
94
IV
D
ISKUSSION
.
97
1
GLUTATHIONGEHALT
IN
WEIZENKEIMLINGEN
UND
WEIZENZELLEN
.
97
2
GLUTATHIONKONJUGATION
VON
TRANS-ZIMTSAEURE
.
98
3
LOESLICHE
UND
MEMBRANASSOZIIERTE
GST-AKTIVITAETEN
IN
WEIZEN,
EINFLUSS
DER
HERBIZID
UND
SAFENERBEHANDLUNG
AUF
DIE
GST-AKTIVITAETEN
IN
WEIZENKEIMLINGEN
.
100
3.1
LOESLICHE
UND
MEMBRANASSOZIIERTE
GST-AKTIVITAETEN
IN
WEIZENZELLEN
UND
-KEIM
LINGEN
.
100
3.2
EFFEKTE
DER
HERBIZID
UND
SAFENERBEHANDLUNG
AUF
DIE
GST-AKTIVITAET
IN
BLAETTERN
VON
WEIZENKEIMLINGEN
.
103
I
NHALTSVERZEICHNIS
V
3.3
EFFEKT
VON
FEMOXAPROP-ETHYL
UND
FENCHLORAZOL-ETHYL
.
104
4
REINIGUNG,
IDENTIFIZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
MEMBRANASSOZIIERTEN
GST-
ISOENZYMEN
AUS
WEIZENZELLEN
.
107
4.1
REINIGUNG
VON
GST-ISOENZYMEN
.
107
4.2
BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
MAGSTL-1
AUS
WEIZENZELLEN
.
111
4.2.1
MOLEKULARE
CHARAKTERISTIKA
.
111
4.2.2
KINETISCHE
PARAMETER
.
112
4.3
IDENTIFIZIERUNG
VON
MAGSTL
AUS
WEIZENZELLEN
ALS
GST
DER
TAEETA-KLASSE
.
115
5
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
DER
GST-ISOENZYME
UND
ENDOGENE
FUNKTION
.
120
V
Z
USAMMENFASSUNG
.
125
VI
L
ITERATURVERZEICHNIS
.
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| discipline | Chemie Agrarwissenschaft Pflanzenbau |
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