Praxis der Immunhistochemie:
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München [u.a.]
Urban und Fischer
2000
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Was versteht man unter
Antikörpern? 1
2 Polyklonale Antikörper 2
2.1 Polyklonale Antiseren 2
2.2 Chromatografisch aufgereinigte
polyklonale Antiseren 3
2.3 Aszites zur Antikörpergewinnung .... 4
3 Monoklonale Antikörper 5
3.1 Aszites mit monoklonalen Antikörpern 7
3.2 Kulturüberstand mit monoklonalen
Antikörpern 7
3.3 Gereinigter Kulturüberstand 7
3.4 Lyophilisat mit monoklonalen
Antikörpern 7
3.5 Vor und Nachteile monoklonaler
Antikörper 8
4 Reaktionsmuster bei Antikörpern
für die Immunhistochemie 9
4.1 Zytoplasmatisch 9
4.2 Nuklear 10
4.3 Membranständig 11
5 Nachweismethoden 13
5.1 Direkte Methode 13
5.2 Indirekte Methode 13
5.3 Doppelt indirekte Methode 14
5.4 PAP Methode 15
5.5 APAAP Methode 16
5.6 ABC Methode 17
5.7 LAB/LSAB Methode 18
5.8 EPOS 19
6 Fixierung 20
6.1 Gebrauchsanweisungen für
Fixierungslösungen 21
6.2 Fehlermöglichkeiten vor und
während der Fixierung 21
7 Einbettung 23
7.1 Fehlermöglichkeiten während der
Einbettung 23
7.2 Einbettprotokoll für automatisierte
Ãœbernachteinbettungen 25
8 Herstellung von Schnittpräparaten . 26
8.1 Fehlermöglichkeiten während des
Schneidens 26
8.2 Adhaesive 29
9 Trocknen und Entparaffinieren
ab vorbereitende Arbeiten 33
9.1 Fehler beim Trocknen und
Entparaffinieren 33
9.2 Gebrauchsanweisung zur
Entparaffinierung 35
10 Pufferlösungen, Detergenzien
und Stringenz 36
10.1 Fehlermöglichkeiten bei Spülpuffern . 37
10.2 Gebrauchsanweisungen für
Pufferlösungen 37
11 Enzymatische Demaskierung 40
11.1 Fehlerhafte Antigendemaskierung ... 41
11.2 Gebrauchsanweisungen 43
X 12 Hitzeinduzierte Demaskierung 44
12.1 Hitzedemaskierung in der
Mikrowelle 44
12.2 Hitzedemaskierung im
Dampfdruckkochtopf 45
12.3 Hitzedemaskierung im Autoklaven . . 46
12.4 Hitzedemaskierung im Wasserbad ... 47
12.5 Kombinierte Methoden zur
Antigendemaskierung 48
12.6 Pufferanleitungen 49
12.7 Fehlermöglichkeiten beim Einsatz
von Hitzedemaskierung 50
13 Blockieren mit Normalseren 52
14 Endogene Enzymaktivität und
Möglichkeiten zur Hemmung 54
14.1 Peroxidase 55
14.2 Alkalische Phosphatase 56
14.3 Biotin (Vitamin H)/Avidin 58
15 Primärantikörper 60
15.1 Etablierung von Antikörpern 60
15.2 Lagerung und Handhabung von
Antikörpern 62
15.3 Datenblattinformationen 64
16 Sekundärantikörper 66
16.1 Anti IgG (H+L) 68
16.2 Anti IgG Fc Fragmente 68
16.3 Anti IgG F(ab )2 Fragment 68
17 Komplexe 69
17.1 PAP Komplex 69
17.2 APAAP Komplex 69
17.3 ABC Komplex 70
17.4 LAB /LSAB Komplex 70
18 Farbstoffe für die Immunhistochemie 71
18.1 Chromogene für Reaktionen mit
Meerrettichperoxidase
(HRP = Horseradish Peroxidase) ... 71
18.2 Chromogene für Reaktionen mit
alkalischer Phosphatase 73
Inhaltsverzeichnis
19 Allgemeine Fehlerquellen 78
20 Hilfestellung in der Praxis 79
20.1 Richtiges Pipettieren 79
20.2 Korrektes Auftragen von Antikörpern 80
20.3 Inkubationszeiten 82
20.4 Feuchte Kammern 83
20.5 Berechnung von Molaritäten 85
20.6 pH Wert Messung 85
20.7 Berechnung von %igen Lösungen ... 87
21 Bearbeitung zytologischen Materials 88
22 Immunhistochemie an
Gefrierschnitten 90
22.1 Herstellung von Gefrierschnitten .... 91
22.2 Fixierungsmethoden für Gefrier¬
schnitte 92
22.3 Anleitung zur Immunhistochemie an
Gefrierschnitten 92
23 Immunhistochemie an bereits
gefärbten Präparaten 94
24 Immunfluoreszenz 96
24.1 Fluoreszenzfarbstoffe und Spektren . . 96
24.2 Anleitung zur direkten
Immunfluoreszenz 98
24.3 Anleitung zur indirekten
Immunfluoreszenz 99
25 Kompetetive Hemmung 101
26 Verstärkungsmethoden 104
26.1 Imidazolverstärkung 104
26.2 Nickel Kobalt Verstärkung 07
26.3 Tyraminverstärkte Immun¬
histochemie 109
26.4 Silberverstärkte Goldmarkierungs¬
methoden 111
27 Doppelmarkierungen 118
28 Kontrollen 124
Inhaltsverzeichnis
29 Automatisierung in der
Immunhistochemie 127
30 Zusammenstellung häufig
angewendeter Primärantikörper
anwendungsbezogen ausgewählt . 129
31 Antikörper zum Nachweis
charakteristischer Antigene
in Organen und Organsystemen . . 134
XI
32 Ausstattung eines
immunhistochemischen
Laboratoriums 136
33 Glossar 138
34 Literaturverzeichnis 140
35 Stichwortverzeichnis 143
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